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口腔鳞状细胞癌组织中IDO1、KYNU表达与临床及预后的关系

2024-04-02 147 上传者：管理员

摘要：目的探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)、犬尿氨酸酶(KYNU)表达情况与病理特征、预后的关系。方法将2018年1月至2020年6月该院收治的98例OSCC患者纳入研究。收集患者OSCC组织标本及对应的癌旁组织标本。采用免疫组化法检测组织中IDO1、KYNU的表达情况，分析IDO1、KYNU表达情况与OSCC患者临床病理特征的关系。采用多因素Cox回归分析OSCC患者预后的影响因素。结果 OSCC组织IDO1、KYNU阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05)。OSCC分化程度低分化、浸润深度(DOI)>5 mm、淋巴结转移、临床分期Ⅲ～Ⅳ期的患者IDO1、KYNU阳性表达率分别高于OSCC分化程度中高分化、DOI≤5 mm、淋巴结无转移、临床分期Ⅰ～Ⅱ期的患者(P<0.05)。OSCC分化程度中高分化、DOI≤5 mm、淋巴结无转移、临床分期Ⅰ～Ⅱ期、IDO1阴性、KYNU阴性患者的3年总生存率分别高于OSCC分化程度低分化、DOI>5 mm、淋巴结转移、临床分期为Ⅲ～Ⅳ期、IDO1阳性、KYNU阳性患者(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示，DOI>5 mm(HR=3.225,95%CI:1.496～6.954),IDO1阳性(HR=3.714,95%CI:1.941～7.105),KYNU阳性(HR=4.150,95%CI:1.887～9.124)是OSCC患者预后的影响因素(P<0.05)。结论 IDO1、KYNU在OSCC患者癌组织中呈高表达，与OSCC的DOI、临床分期、分化程度等特征密切相关，有望作为辅助评估患者预后的标志物。

关键词：
3-双加氧酶1
OSCC
口腔鳞状细胞癌
吲哚胺2
外科手术
犬尿氨酸酶
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口腔鳞状细胞癌(OSCC)上皮是口腔最常见的恶性肿瘤，常发生于患者的口腔鳞状细胞，主要表现为口腔黏膜鳞状上皮细胞出现异常，有增生、溃疡、肿物等现象[1,2]。OSCC的临床治疗手段主要为外科手术切除，但由于OSCC早期原发癌和早期淋巴结转移诊断均较为困难，OSCC患者5年生存率不到50%,总体预后较差[3]。因此，寻找OSCC相关的生物学标志物有利于OSCC患者的早期诊断和治疗。吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)可以促进色氨酸的降解，与恶性肿瘤免疫耐受密切相关[4]。犬尿氨酸酶(KYNU)在人体多种组织器官中均有表达，能水解L-犬尿氨酸和3-羟基L-犬尿氨酸为邻氨基苯甲酸，通过色氨酸代谢途径参与NAD辅因子的生物合成[5,6]。而色氨酸在肿瘤细胞中主要通过IDO1降解，其降解产物之一为犬尿氨酸。然而，IDO1与KYNU在OSCC发生、发展中的作用尚不明确。因此，本研究主要探讨OSCC组织IDO1、KYNU表达水平与患者临床病理特征及预后的关系。

1、资料与方法

1.1 一般资料

将2018年1月至2020年6月本院收治的98例OSCC患者纳入研究，年龄25～80岁、平均(61.31±10.43)岁。纳入标准：(1)经病理组织活检确诊为OSCC;(2)首发OSCC;(3)首次接受抗癌治疗；(4)精神、认知正常，能配合研究。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤；(2)有严重的器官功能障碍；(3)心脏功能不全；(4)有酗酒史或吸毒史。纳入研究的患者或直系亲属对本研究知情同意并签署知情同意书。本研究经本院医学伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 分期及资料收集

根据国际抗癌联盟制订的TNM分期第8版标准对OSCC患者进行临床分期，收集OSCC患者病理分级、淋巴结转移情况、分化程度等资料。

1.2.2 组织标本中IDO1、KYNU表达情况的检测

收集患者癌组织标本及对应的癌旁组织标本。采用免疫组化法检测IDO1、KYNU在OSCC患者癌组织及癌旁组织中的表达情况。首先，将组织标本制成石蜡切片。组织切片进行脱蜡、水化处理后，用5%过氧化氢溶液孵育，磷酸缓冲盐溶液冲洗，加入山羊血清封闭液进行抗体封闭；10 min后加入兔抗人IDO1单克隆抗体(1∶100稀释)、兔抗人KYNU单克隆抗体(1∶150稀释，南京德泰生物工程有限公司),4 ℃孵育过夜；次日取出后室温下静置30 min, 加入磷酸缓冲盐溶液冲洗，滴加羊抗兔二抗IgG(赛默飞世尔科技有限公司),室温孵育60 min, 加入磷酸缓冲盐溶液冲洗3次，DAB染色试剂盒显色(上海卓立生物有限公司),复染，脱水后树胶封片。最后，在光学显微镜(徕卡显微系统有限公司)下观察结果。

1.2.3 结果判定[7]

实验结果判定采用双盲阅片法，根据细胞的染色强度及阳性细胞所占比例进行判定。观察光学显微镜下的细胞质或细胞核染色强度，染色强度评分标准：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。阳性细胞所占比例评分标准：阳性细胞所占比例<10%为1分，10%～50%为2分，>50%为3分。染色强度评分和阳性细胞所占比例评分之和≥3分为阳性，<3分为阴性。

1.2.4 随访

OSCC患者出院后通过线上电话、微信沟通或门诊复查等方式连续随访3年，记录患者生存情况，随访截止时间为2023年1月31日。

1.3 统计学处理

采用SPSS23.0统计软件进行数据分析。计数资料以例数或百分比表示，组间比较采用χ2检验。采用多因素Cox回归分析OSCC患者预后的影响因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 IDO1、KYNU在OSCC组织及癌旁组织中的表达情况比较

OSCC组织的IDO1、KYNU阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),见表1。

表1 IDO1、KYNU在OSCC组织及癌旁组织中的表达情况比较[n(%)]

2.2 IDO1、KYNU表达情况与OSCC患者临床病理特征的关系

分化程度低分化、浸润深度(DOI)>5 mm、淋巴结有转移、临床分期Ⅲ～Ⅳ期的OSCC患者IDO1和KYNU阳性表达率分别高于OSCC分化程度中/高分化、DOI≤5 mm、淋巴结无转移、临床分期为Ⅰ～Ⅱ期的患者，差异均有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 IDO1、KYNU表达与OSCC患者临床病理特征的关系[n(%)]

2.3 OSCC患者预后生存情况及单因素分析

OSCC患者出院后，对其进行连续3年随访，73例患者存活，总生存率为74.49%(73/98)。OSCC患者的3年总生存率与患者分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期有关(P<0.05)。IDO1、KYNU阴性表达的患者3年总生存率高于IDO1、KYNU阳性表达的患者(P<0.05),见表3。

表3 OSCC患者预后的单因素分析[n(%)]

2.4 OSCC患者预后的多因素Cox回归分析

将OSCC患者预后作为因变量，将单因素分析中差异有统计学意义的指标作为自变量进行多因素Cox回归分析。结果显示，浸润深度>5 mm(HR=3.225,95%CI:1.496～6.954),IDO1阳性(HR=3.714,95%CI:1.941～7.105),KYNU阳性(HR=4.150,95%CI:1.887～9.124)是影响OSCC患者预后的因素(P<0.05),见表4。

表4 OSCC患者预后的多因素Cox回归分析

3、讨论

OSCC是头颈部常见的恶性肿瘤，具有高度异质性和侵袭性，常发病于舌、颊、牙龈、上颌窦等部位[8,9]。OSCC的发病率在头颈部癌症中排名第一，约占所有头颈部癌症的95%,严重威胁人们的生命健康[10]。因其发病机制复杂且多数患者确诊时已处于中晚期，该病的预后较差[11]。因此，寻找与OSCC病情进展有关的标志物，对提高临床疗效及延长生存期非常关键。

IDO1是一种色氨酸代谢酶，参与肿瘤细胞的增殖、迁移等过程[12]。越来越多的研究证明IDO1在健康者中呈低表达，当机体受到刺激时IDO1表达明显上调[13]。本研究结果显示，OSCC组织的IDO1阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),提示OSCC与IDO1有密切关系，IDO1在OSCC患者中呈高表达，说明IDO1可能参与OSCC的疾病进展。分析其原因：色氨酸是人体必需氨基酸，而IDO1是参与色氨酸代谢途径中的关键酶，IDO1的高表达能促使肿瘤微环境中的色氨酸代谢[14]。在色氨酸严重耗竭的情况下，T细胞等免疫细胞会因为能量缺乏而凋亡，与此同时携带着色氨酸的tRNAs处于游离状态，游离的tRNAs通过应激激酶2通路直接激活调节性T细胞，抑制效应T淋巴细胞的增殖及抗原提呈细胞的功能，为OSCC肿瘤细胞创造一个免疫抑制微环境，从而避免有效的免疫应答，使得肿瘤细胞产生免疫逃逸[15,16]。相关研究还显示，喉鳞状细胞癌中IDO1的高表达与肿瘤不良预后相关，是导致肿瘤病情加重、预后变差的重要分子[17]。本研究结果显示，IDO1阴性表达患者的3年总生存率高于IDO1阳性表达患者(P<0.05);IDO1阳性表达是OSCC患者预后的影响因素(P<0.05)。综合以上信息，笔者认为IDO1与OSCC预后相关，可作为OSCC患者预后评估的生物标志物。

KYNU属于犬尿氨酸酶家族，是在喂食了大量色氨酸食物的兔子尿液中发现的[18]。KYNU是色氨酸分解代谢途径中的一种关键酶，KYNU与肿瘤的发生、发展有密切联系[19]。本研究结果显示，OSCC组KYNU阳性表达率高于癌旁组(P<0.05),提示OSCC与KYNU有密切关联，KYNU在OSCC患者中呈高表达，说明KYNU可能参与了OSCC的发展进程。分析其原因：KYNU参与色氨酸经犬尿氨酸的分解代谢途径，而色氨酸代谢中的重要酶IDO1是一种免疫调节酶，与恶性肿瘤免疫逃逸密切相关：IDO1通过抑制T细胞增殖，催化色氨酸转化，抑制T淋巴细胞免疫应答[20]。相关研究显示，KYNU在宫颈腺癌中是促进宫颈腺癌细胞恶性进展的因子[21],可作为喉鳞癌化疗敏感性的检测指标[22]。小儿急性淋巴细胞白血病中KYNU的表达与预后密切相关，表达越高，预后越差[23]。本研究结果显示，KYNU阴性表达患者的3年总生存率高于KYNU阳性表达患者(P<0.05);KYNU阳性是OSCC患者预后的影响因素(P<0.05)。综合以上信息，笔者认为KYNU与OSCC预后相关，可作为OSCC患者预后评估的生物学标志物。

DOI通常是指肿瘤细胞侵袭患者组织器官的深度，一般被用作评价肿瘤侵袭力。黏膜下有大量的淋巴管，黏膜下层深度浸润的肿瘤患者发生淋巴结转移的可能性更大。DOI可作为预后较差的标志，随着肿瘤浸润程度加深，恶性程度增加及手术难度增大，肿瘤患者预后不良事件的发生率也会增加，因此获得患者准确的DOI具有重要意义[24,25]。

综上所述，IDO1和KYNU在OSCC患者癌组织中呈高表达，与OSCC患者预后密切相关，可作为评估OSCC患者预后的生物学指标。但本研究尚存在不足之处，例如，本研究为单中心研究且样本量小，没能长期对患者进行充分评估，无法全面了解患者的预后情况，在后续研究中还需进一步完善。

参考文献:

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