首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 儿科论文 > 小儿内科学论文 > 探究糖皮质激素受体基因多态性与肾病综合征患儿激素耐药相关性

探究糖皮质激素受体基因多态性与肾病综合征患儿激素耐药相关性

2020-01-02 325 上传者：管理员

摘要：目的：分析糖皮质激素受体基因多态性与肾病综合征患儿激素耐药相关性｡方法：对研究对象进行基因组DNA的提取,后进行引物的设计和合成,进行PCR扩增,在高温和稳定状态下合成杂合双链,再应用变性高效液相色谱进行分析,进行DNA直接测序｡结果：琼脂糖凝胶中进行电泳的结果为,研究对象的外显子PCR产物可形成单一的区带,其序列与已知序列相一致,可见清晰明亮的均一条带｡在136份基因样本中,经变性高效液相色谱分析出11种多态性,经DNA图谱测序证实｡其中3组多态性呈紧密连锁的单倍型,并且为首次报道,其在激素耐药型肾病综合征的基因型频率高于敏感型肾病综合征组,其他的多态性出现的频率较低｡结论：在糖皮质激素受体基因多态性中选择出11处多态性,并且发现其中2种为多为点紧密连接的单倍型,有可能与肾病综合征患儿发生糖皮质激素耐药性有关｡

关键词：
受体
多态性
糖皮质激素
耐药性
肾病综合征
加入收藏

原发性肾病综合征是临床中较为常见的肾小球疾病,期临床特征为患者出现大量蛋白尿､低白蛋白血症､水肿和高脂血症为主^【1】｡治疗原发性肾病综合征的主要方法为给予糖皮质激素,但是有25%的患者会发生激素耐药情况｡糖皮质激素受体是介导糖皮质激素生物效应的重要分子,糖皮质激素受体异常直接导致激素耐药的发生^【2】｡最新研究表明,基因变异是导致糖皮质激素受体异常的直接原因,本次研究糖皮质激素受体基因结构的多态性和肾病综合征患儿激素耐药相关性的关系,现进行报道｡

1、资料和方法

1.1 临床资料

本次研究对象为我院2010年9月至2015年9月期间收治的136例原发性肾病综合征患儿,其中男性69例,女性67例,患者年龄在2-15岁,平均年龄7.5岁｡在136例患者中激素敏感型患儿96例,激素耐药型患儿40例,根据中华医学会儿科学会分会肾脏病学组制定的标准对患儿的激素反应性进行糖皮质激素耐药性评价｡

1.2 仪器与方法

1.2.1 实验仪器

肾功能检查项目:24小时尿蛋白定量､尿微量蛋白､尿常规､在激素耐药患儿中进行肾穿刺｡具体设备及型号:尿微量蛋白,散色比浊法,仪器imes800血胱抑素c,散色比浊法,仪器AU5400分光光度汁,型号721上海清华自动分化仪,型号Bayer公司ADVIA1650｡

1.2.2 实验方法

先提取研究对象的DNA基因组^【3】,取外周血10ml,用草酸钾进行抗凝处理,用标准盐析法提取DNA,后进行引物设计并合成引物,进行PCR扩增,在琼脂糖凝胶中进行电泳,用溴化乙锭进行染色鉴定,将PCR产物经过高温变性缓慢复性后形成杂合双链,用高效液相色谱进行分析,筛选出糖皮质激素受体基因多态性,再进行变性高效液相色谱检测,从而筛选出纯合变异｡

2、结果

琼脂糖凝胶中进行电泳的结果为,研究对象的外显子PCR产物可形成单一的区带,其序列与已知序列相一致,可见清晰明亮的均一条带｡两种单倍型的基因分型,可进行较高的基因频率,在肾病综合征患者中的基因组进行单倍型3和单倍型5的基因分型｡存在多态位点时,可对两个位点进行下一步的检测,证实其具有完整的单倍型｡在136份基因样本中,经变性高效液相色谱分析出11种多态性,经DNA图谱测序证实｡根据不同人群的分布和趋势可见单倍型3和单倍型5的人群中基因频率较高,耐药型肾病可高于敏感型肾病,其余基因型的出现频率较低｡在所有患者的基因检测中,单倍型3和单倍型5的激素耐受型肾病综合征的频率分别为10.3%和15.4%,明显高于敏感型肾病综合征的频率1.5%和0.7%｡其中3组多态性呈紧密连锁的单倍型,并且为首次报道,其在激素耐药型肾病综合征的基因型频率高于敏感型肾病综合征组,其他的多态性出现的频率较低｡

3、讨论

肾病综合征患儿激素耐药性是临床治疗的难点,其最终可发展为终末期肾病,并且激素耐药的机制相对较复杂,主要与糖皮质激素受体的亚型表达有关,亚型表达降低导致糖皮质激素受体无法有效的和糖皮质激素结合,对糖皮质激素产生不敏感表达,表现为激素耐药^【4】｡糖皮质激素受体是一种内源性的转录因子,其可存在于各种类型细胞的细胞浆液中,在与糖皮质激素结合后可被激活,激活后的受体复合物向细胞核内进行转移,以二聚体的形式与染色体结合,作用于应答基因上控制糖皮质激素的反应,从而抑制或激活靶基因的转绿功能,形成蛋白质的结合,从而发挥免疫调节和代谢的功能｡糖皮质激素受体基因多态性的改变可导致糖皮质激素受体结构和功能的改变,从而发生糖皮质激素耐药性的发生｡现在学术界对于糖皮质激素受体基因多态性和糖皮质激素受体之间的关系越来越引起关注,但是目前还没有系统的导致糖皮质激素耐药性的相关研究报道^【5】｡

糖皮质激素受体结构区免疫去在本研究未与NH2端,其功能具有特异性抗原,位于糖皮质激素受体ID的突变并不会是糖皮质激素的敏感性降低,有必要完成糖皮质激素受体基因序列进行分析,单链构象多态性分析可应用于较大样本的突变基因筛选,已经被广泛应用于基础研究和临床研究中,随着基因产物的扩大其敏感性也相对降低｡

本次研究,对研究对象进行基因组DNA的提取,后进行引物的设计和合成,进行PCR扩增,在高温和稳定状态下合成杂合双链,再应用变性高效液相色谱进行分析,进行DNA直接测序｡结果显示,琼脂糖凝胶中进行电泳的结果为,研究对象的外显子PCR产物可形成单一的区带,其序列与已知序列相一致,可见清晰明亮的均一条带｡在136份基因样本中,经变性高效液相色谱分析出11种多态性,经DNA图谱测序证实｡其中3组多态性呈紧密连锁的单倍型,并且为首次报道,其在激素耐药型肾病综合征的基因型频率高于敏感型肾病综合征组,其他的多态性出现的频率较低｡

随着目前分子生物学的快速发展,单核甘酸多态性的功能也有新的看法｡有研究证实,单核甘酸多态性可直接影响RNA的结构,为SNP变异提供解释的机制｡基因编码区的突变除了对氨基酸的编码发生改变外,还可直接影响到RNA的剪切,可影响RNA剪切的效率和准确率,本次研究结果发现单倍型和糖皮质激素受体功能可直接影响和功能,还需进一步的功能｡综上,在糖皮质激素受体基因多态性中筛选出11处多态性,并且发现其中2种为多为点紧密连接的单倍型,有可能与肾病综合征患儿发生糖皮质激素耐药性有关｡

参考文献：

[1]张秀敏,李宇宁,糖皮质激素受体与儿童激素耐药型肾病综合征研究进展[J],中国小儿急救医学,2013,20(6):647-648.

[2]叶建伟,丁洁,黄健萍,糖皮质激素受体基因多态性与肾病综合征患儿激素耐药相关性探讨[J],中华儿科杂志,2013,41(9):661-662.

[3]彭华保,易著文,何庆南,等,儿童原发性肾病综合征激素抵抗与糖皮质激素受体基因多态性的相关性[J],中国当代儿科杂志,2014,6(4):274-275.

[4]赵露,黄威,杨淑珍,等,肾上腺糖皮质激素水平与肾病综合征相关性的临床研究[J],北华大学学报(自然科学版),2014,12(5):562-563.

[5]何小解,易著文,党西强,等,GRB在原发性肾病综合征患儿糖皮质激素耐药中的作用[J],中华儿科榨汁,2015,43(2):109-110.

周燕,蒋红雨.糖皮质激素受体基因多态性与肾病综合征患儿激素耐药相关性分析[J].世界最新医学信息文摘,2016,16(64):1-2.