评估流式细胞术检测外周血白血病细胞在急性白血病患者的应用价值

2020-07-10 219 上传者：管理员

摘要：目的：评估流式细胞术(FCM)检测外周血白血病细胞在急性白血病患者的应用价值。方法：2017年1-12月收治急性白血病患者130例，其中急性髓系白血病80例，急性淋巴白血病50例。采集所有患者血液样本，通过FCM检测外周血白血病细胞。分析检验结果，评估预后。结果：FCM检测急性髓系白血病的敏感性、阴性预测值显著高于急性淋巴白血病，特异性低于急性淋巴白血病，差异均有统计学意义(P<0.05)。MRD阳性患者复发率高于阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：急性白血病患者外周血白血病细胞临床检测中，流式细胞术具有较高敏感性与特异性，可作为评估患者预后的参考指标。

关键词：
外周血白血病细胞
急性白血病
流式细胞术
血液肿瘤
评估
预后
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急性白血病的发生与环境污染、遗传、生活方式等各种因素有关[1]，是一种临床发病率较高的非实体肿瘤，严重影响患者生活质量，同时也给家庭造成沉重经济负担。随着近年来临床对白血病研究的深入，越来越多先进治疗方案得以落实，如果白血病患者能够在发病早期得到有效治疗，仍有相当高缓解率，但同时也伴有较大复发风险。资料表明[2]，急性白血病患者主要复发原因是体内肿瘤细胞没有被完全清除，机体内仍存在微小残留病变(MRD)，如果残留的肿瘤细胞持续增殖，就会导致疾病复发。白血病细胞表型与异常光散射的特点非常突出[3]，属于表面抗原，因此临床主张采用FCM识别不同抗原的荧光信号，以提高临床诊断准确率。本研究采集急性白血病患者外周血样本130例，应用FCM技术检测白血病细胞，现报告如下。

资料与方法

2017年1-12月收治急性白血病患者130例，男73例，女57例；年龄21～67岁，平均(37.69±2.46)岁；病理分型：急性髓系白血病80例，急性淋巴白血病50例。所有患者均符合《血液病诊断及疗效标准》中相关诊断标准[4]，所有患者及家属均签署知情同意书。排除依从性差、无法完成随访、急性早幼粒细胞白血病、精神疾病。

方法：采集患者空腹状态下的外周静脉血3mL，乙二胺四乙酸二钾抗凝处理后，将1×106的有核细胞加入试管中，选择与患者病情特点相符的荧光素标记的单克隆抗体，按照说明书进行规范操作。应用FACSCalibur流式细胞仪收集具有分析价值的有核细胞10万个以上，并用配套软件分析。MRD的判定参考原始细胞抗原有无跨系表达、表达是否同步、表达是否丢失、表达的强弱等因素，MRD阳性的判定标准为≥0.01%，否则可判定为阴性。对130例患者骨髓细胞进行6～8张骨髓液涂片，经吉姆萨-瑞士染色处理后，在显微镜油镜下对200个细胞进行分类，对参考细胞形态进行分类计数，将《血液病诊断及疗效标准》作为是否复发的判断依据。

观察指标[5]：比较FCM检测急性髓系白血病与急性淋巴白血病的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值。统计随访12～18个月MRD阳性和阴性患者复发情况。WHO明确提出，将骨髓细胞形态学的检测结果作为临床诊断的金标准，增生Ⅰ～Ⅱ级；原始细胞增多≥20%。

统计学处理：数据应用SPSS19.0软件处理；计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验；P<0.05为差异有统计学意义。

结果

FCM检测急性白血病的敏感性、特异性比较：FCM检测对急性髓系白血病的敏感性和阴性预测值显著高于急性淋巴白血病，特异性低于急性淋巴白血病，差异均有统计学意义(P<0.05)。两种病理分型阳性预测值比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

MRD与复发之间关系：MRD阳性104例，复发77例，复发率为74.04%;MRD阴性26例，复发6例，复发率为23.08%。MRD阳性患者复发率高于阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)。

讨论

急性白血病除发病率较高之外，治疗后还存在相当大复发风险。急性白血病发生机制为造血干细胞出现异常增殖，长时间在骨髓中大量累积，最终阻断骨髓造血功能。白血病细胞主要是以单细胞形式存在，属于天然单细胞悬液，FCM技术针对的正是单个散在细胞，因此可用于白血病细胞检测。FCM通过荧光对单克隆抗体进行标记，分析细胞表面或内部成分，还可以通过核酸染料对细胞内部RNA、DNA进行检测，从而分析细胞pH值、钙离子浓度及细胞的摄取、吞噬功能，还能够检测细胞培养液及血清中可溶性成分。骨髓形态学检查是评估急性白血病患者临床疗效重要依据，但该检测结果具有局限性，如果只能体现一部分骨髓情况，那么只有在患者机体内白血病细胞的比例>1%的情况下才能检测出来，患者也很难耐受反复的穿刺。因此FCM成为检测MRD的主要方法。研究发现[6]，一部分急性白血病患者在经过放疗治疗后，尽管能够杀死白血病细胞，但无法达到根治效果，仍有患者因存在MRD阳性而复发，因此，完全缓解的时期与程度是影响患者预后的重要参考指标。

表1FCM检测急性白血病的敏感性、特异性比较

本研究中，FCM对急性髓系白血病的敏感性达到97.38%，对急性淋巴白血病的特异性为45.83%。提示FCM检测结果可作为急性白血病患者预后评估的指标水平。同时，MRD阳性患者复发率要显著高于阴性患者，差异有统计学意义(P<0.05)。临床应参考多方面检测指标和结果，对患者采取个性化的治疗措施。

参考文献：

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[3]王申.流式细胞术检测外周血白血病细胞在急性白血病复发诊断中的应用价值[J].国际医药卫生导报,2018,24(23):3669-3671.

[4]李焱,叶敬伟,郭晓玲.IL-12､IL-15对急性髓系白血病患者骨髓来源CD34+白血病细胞转化为NK细胞作用研究[J].临床肿瘤学杂志,2019,24(1):32-37.

[5]曹丽霞,陈连香.RNA甲基化"阅读器"蛋白YTHDF2在急性髓系白血病中的作用[J].基础医学与临床,2018,38(12):1727-1732.

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胡红波,彭敏源,刘苏.急性白血病患者外周血白血病细胞流式细胞术检测情况[J].中国社区医师,2020,36(15):125-126.