头孢妥仑匹酯为第四代口服类头孢菌素，属于β-内酰胺类抗生素[1]，为头孢妥仑的前体药物，其本身并无抗菌活性，口服后经肠道吸收，由肠管壁内酯酶迅速水解成具有抗菌活性的头孢妥仑[2,3]。其作用机制主要是抑制细菌细胞壁合成，对革兰阳性菌及阴性菌均具有广谱抗菌作用，尤其对革兰阳性的金黄色葡萄球菌及表皮葡萄球菌的抗菌力比已有的头孢烯类优越，且对β-内酰胺酶稳定。临床主要用于治疗由敏感菌引起的各种感染症，如呼吸道感染、皮肤感染和尿路感染等[4,5,6]。

头孢妥仑匹酯由日本明治制果株式会社研制，于1994年在日本首先上市，剂型为片剂（100mg）和小儿用颗粒剂（100mg）。片剂于2000年获准进口我国，商品名为“美爱克”。头孢妥仑匹酯片剂在国外已上市多年，但目前国内尚无药企获得其原料药及制剂生产批文。关于头孢妥仑匹酯合成、有关物质及药效学方面的研究已有文献报道，但少有制剂及其溶出方面的研究报道。口服固体制剂的体外溶出行为在一定程度上能代表药物在体内的吸收速度和程度。因此在制剂研究过程中体外溶出方法对制剂研发和质量研究都很关键。

本文作者对头孢妥仑匹酯的溶出度及溶出曲线测定方法进行了研究，建立了快速、准确、专属、灵敏、重现性好的溶出曲线测定方法，可以更好地指导制剂研发并进行质量控制。

1、仪器与材料

RC806溶出试验仪（天大天发科技有限公司），UV7300紫外-可见分光光度仪（上海天美），XS105电子天平（十万分之一，德国梅特勒托利多公司），GZP-26全自动高速压片机（北京翰林航宇科技发展有限公司），BGB-350D高效包衣机（浙江小伦制药机械有限公司），LHSZ200B湿法制粒混合机（浙江迦南科技股份有限公司）。

头孢妥仑匹酯对照品（USP批号F01164，含量质量分数为96.5%），头孢妥仑匹酯片（华北制药河北华民药业有限责任公司中试生产，批号G211150202、G211150203、G211150204，规格为100mg），头孢妥仑匹酯片（美爱克®，日本明治制果株式会社，规格100mg，批号CFNTCV1001）。

头孢妥仑匹酯原料（华北制药河北华民药业有限责任公司），交联羧甲基纤维素钠（尼克林化工有限公司），羟丙甲纤维素（陶氏化学有限公司），羟丙纤维素（日本曹达株式会社），甘露醇（广西南宁化学制药有限公司），预胶化淀粉（美国卡乐康公司），硬脂酸镁（湖州展望药业有限公司），薄膜包衣预混剂（卡乐康包衣技术有限公司）。

盐酸、氯化钠、醋酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、柠檬酸均为分析纯、市售。水为纯化水。

2、方法与结果

2.1头孢妥仑匹酯片的制备

在5℃条件下，将头孢妥仑匹酯（50g）溶解于羟丙基甲基纤维素（500mg）的1mol·L-1盐酸的酸性水溶液（350mL）中，于0.22µm微孔膜过滤，去除不溶性固体物质；在5℃或低于5℃环境下，缓慢滴加1mol·L-1氨水至沉淀析出；过滤，用质量分数0.5%羟丙基纤维素水溶液（150mL）充分洗涤沉淀，减压干燥得细小颗粒状黄色粉末。

将所得黄色粉末粉碎并过180μm筛、甘露醇过250μm筛；将黄色粉末、甘露醇、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素钠等按照处方比例准确称量后置于湿法制粒机中，预混5min（搅拌桨转速80r·min-1，切割刀转速1000r·min-1）后加入水，制软材3～5min（搅拌桨转速80r·min-1、切割刀转速1800r·min-1），过850μm筛制粒；湿颗粒在沸腾干燥机内当水分<3%时出料；过850μm筛整粒；加入处方量硬脂酸镁，总混完成后压片、包衣；铝塑包装并加入干燥剂即得。

2.2性质考察

外观：薄膜衣片，除去包衣后显淡黄色；三批头孢妥仑匹酯片干燥失重分别为1.5%、2.1%和2.0%；含量质量质分数分别为98.3%、99.3%和98.9%；有关物质测定结果见表1。

表1有关物质测定结果

2.3溶出方法筛选

2.3.1溶出介质的配制

(1)水：纯化水。(2)pH1.2盐酸溶液：取氯化钠2.0g，盐酸7.0mL，加水稀释至1000mL，摇匀，即得。(3)pH4.0醋酸盐溶液：取醋酸钠1.22g,2mol·L-1醋酸20.5mL，加水稀释至1000mL摇匀，即得。(4)pH6.8磷酸盐溶液：取0.2mol·L-1磷酸二氢钾溶液250mL与0.2mol·L-1氢氧化钠溶液112mL混合后，再加水稀释至1000mL，摇匀，即得。(5)pH3.0磷酸盐溶液：取磷酸氢二钠3.58g，加水至200mL得磷酸氢二钠溶液；称取柠檬酸4.83g，加水溶解，用水稀释至1000mL，摇匀，得柠檬酸溶液；用柠檬酸溶液调节pH至3.0，即得。

2.3.2溶出度测定方法

按照《中华人民共和国药典》(2015年版)四部通则0931“溶出度与释放度测定法（第二法）”[5]。其中，介质体积：900mL，转速：50r·min-1，测定波长：272nm。

对照品溶液：取头孢妥仑匹酯对照品约22mg，精密称定，置200mL量瓶中，加体积分数75%乙腈溶液20mL使溶解，用溶出介质稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL，置10mL量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，即得。

空白辅料溶液：取空白辅料适量（约相当于头孢妥仑匹酯22mg的处方量），精密称定，置200mL量瓶中，加体积分数75%乙腈溶液20mL充分振摇使溶解，用溶出介质稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL，置10mL量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4溶出曲线考察

按照上述确定的5种溶出介质及“2.3.2”条测定方法，分别测定头孢妥仑匹酯片参比制剂的溶出度并绘制溶出曲线，结果见图1。

图1参比制剂五种溶出介质中的溶出曲线（n=12)

FDA公布的头孢妥仑匹酯片溶出曲线测定方法中，选用的溶出介质为pH1.2盐酸溶液；《日本药典》中头孢妥仑匹酯片溶出度项测定也是以pH1.2盐酸溶液为溶出介质，故选择pH1.2盐酸溶液进行方法学验证。其中pH1.2盐酸溶液取样点为5、10、15、20、30和60min，其他4种溶出介质取样点分别为5、15、30、60、90和120min。

2.5溶出测定方法学验证

2.5.1专属性试验

按处方量比例，称取混合辅料适量（约相当于头孢妥仑匹酯22mg），置于200mL量瓶中，加体积分数75%乙腈溶液20mL充分振摇使溶解，用溶出介质稀释至刻度，摇匀；精密量取1mL，置10mL量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液。按照紫外分光光度法，以溶出介质为空白对照，在200～400nm波长范围内扫描。结果表明，混合辅料在272nm波长处无吸收，不会干扰头孢妥仑匹酯的测定（图2）。

图2白辅料（A）和对照溶液（B）的UV谱图

2.5.2滤膜干扰试验

工作中常用的滤膜分为水系和有机系两种，因选取的5种介质均不含有机溶剂，因此选取水系膜进行滤膜吸附验证实验。取“2.3.2”条对照品溶液适量，将其分为两份，一份不过滤，一份用0.45μm滤膜过滤，并在272nm波长处测定两者的吸光度。结果表明，溶出介质为pH1.2盐酸溶液时，滤膜吸附率小于2%，滤膜吸附过滤无干扰。而其他4种溶出介质中滤膜吸附小于2%，需弃去5mL初滤液。

2.5.3线性关系考察

精密称取头孢妥仑匹酯对照品约22mg，置200mL量瓶中，加体积分数75%乙腈溶液20mL使溶解，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液。分别精密量取对照储备液0.6、0.8、1、1.2和1.5mL，置于10mL量瓶中，用溶出介质稀释至刻度，摇匀。按紫外分光光度法，以溶出介质为空白对照，于272nm波长处测定吸光度。分别以头孢妥仑质量浓度（ρ，mg·L-1）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为A=4.36×10-2ρ-1.85×10-2,R2=0.9998结果表明，头孢妥仑质量浓度在5.60～14.01mg·L-1内，吸光度与质量浓度呈良好的线性关系。

2.5.4仪器精密度试验

精密称取头孢妥仑匹酯对照品22mg，置200mL量瓶中，加体积分数75%乙腈溶液20mL使溶解，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置50mL量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀。以溶出介质为空白对照，于272nm波长处测定吸光度，连续测定6次，RSD为0.59%，表明仪器精密度良好。

2.5.5重复性试验

取本品（批号G211150202)6片，分别按上述确定的溶出方法进行测定，于20min时取溶出液，滤过，取续滤液作为供试品溶液测定吸光度，计算溶出度，结果RSD为1.48%，表明方法重复性良好。

2.5.6中间精密度

由不同试验分析人员在不同仪器上分2天分别测定同一批供试品溶液溶出度，计算12份溶出度数据的相对标准偏差为1.2%，表明头孢妥仑匹酯溶出在测定中间精密度符合规定。

2.5.7回收率试验

分别称取空白辅料9份，各约67.5mg（约相当于头孢妥仑100mg对应处方量的空白辅料），精密称定，加溶出介质1000mL，分别加入处方量65%、85%和105%的头孢妥仑匹酯，充分摇匀，使主药溶解，滤过；精密量取续滤液1mL，置10mL量瓶中，加溶出介质至刻度，摇匀，照紫外分光光度法，在272nm波长处测定吸光度。计算回收率，测定结果见表2，结果表明本品3个质量浓度下的溶出回收率平均值为100.4%，在98%～102%内，RSD值为0.19%，说明本法回收率良好。

表2溶出度测定回收率试验结果（n=3)

2.5.8溶液稳定性试验

取“2.3.2”条头孢妥仑匹酯对照品溶液，以溶出介质pH1.2盐酸溶液为空白，于室温条件下放置8h，于0、1、2、4、6和8h分别测定溶液吸光度，吸光度的RSD为0.37%(n=6），表明对照品溶液在8h内稳定。

取批号为G211150202样品溶出液适量，与室温下放置8h，于第0、1、2、4、6和8h分别测定溶液的吸光度，吸光度的RSD为0.08%(n=6），表明样品溶液在8h内稳定。

2.6溶出曲线绘制

2.6.1批内溶出均一性

自制样品（批号G211150202）取6片，按“2.3.2”条方法测定头孢妥仑匹酯片的溶出度，并计算其在各个时间点的RSD，结果见表3。表明本方法的溶出均一性良好。

表3批内溶出均一性（n=12)

2.6.2批间溶出重现性

取G211150202、G211150203、G211150204三批供试品，每批取12片，以pH1.2盐酸溶液、pH4.0醋酸盐溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水和pH3.0溶液为溶出介质，按“2.3.2”条方法操作，分别于相应时间点取样，测定其溶出度，并计算其在各个时间点的RSD，结果见表4，溶出曲线图见图3。结果表明，不同批次间的自制头孢妥仑匹酯片批间溶出重现性良好。

表4批间溶出重现性（n=12)

图3自制制剂在不同溶出介质中的溶出曲线（n=12)

2.6.3不同溶出介质中的溶出曲线考察

分别取G211150202、G211150203、G211150204三批自制制剂和参比制剂，以pH1.2盐酸溶液、pH4.0醋酸盐溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水和pH3.0溶液为溶出介质，按“2.3.2”条方法操作，分别于相应时间点取样，测定其溶出度，并比较自制制剂与参比制剂的相似性，结果表5。

表5相似因子测定结果

结果表明：头孢妥仑匹酯在pH1.2盐酸溶液中15min时溶出均大于85%，且其在其他4种溶出介质中相似因子f2均大于50，说明三批自制产品与参比制剂体外溶出行为均相似。

3、讨论

3.1头孢妥仑匹酯片的制备

头孢妥仑匹酯为BCS分类Ⅱ类，属于低溶解高渗透药物。药物溶出成为吸收的限速步骤，其与生物利用度密切相关，需要通过增加溶解度来改善药物的吸收。通常可以通过控制固体药物的物理形态改善其溶出和吸收，采用高分子物质作为载体使头孢妥仑匹酯药物以无定型状态分散于固体分散体中，比稳定的晶态物质具有更大的溶解度和更高的溶出速率[8,9,10]。

3.2溶出方法的选择

头孢妥仑匹酯片在美国食品药品监督管理局（FDA）溶出度方法数据库中采用pH1.2盐酸溶液为溶出介质，转速为75r·min-1,但其存在区分力过大的情况，而《日本药典》采用pH1.2盐酸溶液为溶出介质，转速则为50r·min-1，参考日本《医疗用药品品质情报集》中头孢妥仑匹酯细粒剂以及日本长生堂IF文件溶出度方法选择溶出介质为pH1.2盐酸溶液，转速则为50r·min-1，方法学验证结果也表明其适用于体外研究。

3.3溶出介质的选择

在多种pH溶出介质中溶出曲线的测定和对比成为剖析固体制剂内在品质的重要手段，成为先进国家药物审评机构评价口服制剂内在质量的一种手段，其最重要的目的在于提高BE试验的通过率。人体消化道的pH全范围为1.2～6.8，因此选择溶出介质分别为pH1.2、pH3.0、pH4.0、pH6.8和水即能模拟人体[11,12]。参考日本《医疗用药品品质情报集》中头孢妥仑匹酯细粒剂以及日本长生堂IF文件中选择的溶出介质，最终选择pH1.2盐酸溶液、pH4.0醋酸盐溶液、pH6.8磷酸盐溶液、水和pH3.0溶液作为溶出介质。结果表明：在pH1.2溶出介质中参比制剂和自研制剂在15min内溶出达到85%以上，而在其他介质中，相似因子均大于50，自研制剂与参比制剂在上述溶出介质中溶出相似。

4、结论

对头孢妥仑匹酯片进行了研究，参照《中国人民共和国药典》（2015年版）四部通则的有关要求，对其溶出度及溶出曲线测定方法进行了研究，建立了快速、准确、专属、重现性好的溶出曲线测定方法，可以用于指导本品的制剂研发及质量控制。

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