头孢泊肟酯属于高效第3代头孢菌素,为头孢泊肟(cefpodoxime,CPDX)前体药物,口服后经肠管吸收,由肠管壁酯酶迅速水解成具有抗菌活性的头孢泊肟。头孢泊肟酯几乎不溶于水[1]。在临床主要用于敏感菌所致呼吸道感染、泌尿生殖系统感染、皮肤及软组织感染及儿科感染等。干混悬剂具有药物吸收良好,制成混悬剂后颗粒分布均匀,在胃肠道分布面积广、吸收快、生物利用度高等优点,还可避免片剂、胶囊剂难吞服的缺点,适用于儿童、老年人及吞咽困难的患者服用[2]。该药由日本三共株式会社开发研制,1990年在日本上市,商品名Banan,中文名为“博拿”。

笔者在本实验对头孢泊肟酯干混悬剂处方及制备工艺进行研究,并参照《中华人民共和国药典》(2015年版)有关要求,对其溶出度及溶出曲线测定方法进行研究,建立了快速、准确、专属、灵敏、重复性好的溶出曲线测定方法,可以更好地用于本品的质量控制。

1、仪器与试药

1.1仪器

LSH2-6A湿法混合制粒机(中国航空工业第一集团公司),UV2300型紫外-可见分光光度仪(上海天美),RC806智能溶出实验仪(天津市天大天发科技有限公司),XS105电子天平(梅特勒托利多仪器公司,感量:0.01mg)。Agilent1210高效液相色谱仪[安捷伦科技(中国)有限公司]。

1.2药品与试剂

头孢泊肟酯对照品(中国食品药品检定研究院,批号:130517-200802,以C15H17N6O6S2计含量为73.6%),头孢泊肟酯干混悬剂(公司中试产品,批号:H916140501,H916140502,H916140503,规格:50mg/袋);头孢泊肟酯干混悬剂对照药品(BANAN®,日本第一三共株式会社,规格:1g:50mg/袋,批号:0369)。蔗糖(南宁糖业股份有限公司伶俐糖厂,批号:S20141221,含量:99.8%);交联羧甲基纤维素钠(德国JRS药用辅料公司,批号:S3201011025,含量:99.4%);黄原胶(淄博中轩生化有限公司,批号:S18140005,含量:99.9%);羟丙甲纤维素(安徽山河药用辅料股份有限公司,批号:32062141001);甘露醇(河北华旭药业有限责任公司,批号:32050142001,含量:99.9%);二氧化硅(湖州展望药业有限公司,批号:3200812C002,含量:99.7%);阿斯巴甜(常州市牛塘化工有限公司,批号:S10024021XNM,含量:99.7%),氯化钠(山东肥城精制盐厂,批号:201402008,含量:99.8%),谷氨酸钠(上海味之素调料品有限公司,批号:131128A4,含量:99.3%),黄氧化铁(宁波一品生物技术有限公司,批号:32067142001,含量:98.7%),甜橙味粉末香精(浙江巨邦高新技术有限公司,批号:32077132001,含量:99.1%)。纯化水,甘氨酸、氯化钠、盐酸、甲醇均为分析纯。

2、方法与结果

2.1处方前研究

头孢泊肟酯属于无定型粉末,无固定熔点,在水中不溶解。破坏性实验表明,头孢泊肟酯在光、热、湿、酸性条件下稳定性较差,可以被降解。头孢泊肟酯干混悬剂采用湿法制粒,考虑到干混悬剂的制剂特性,将沉降体积比、颗粒物料性状作为首要考察条件,溶出度指标是处方筛选重点考察项目。综合考虑沉降体积比、颗粒物料性状、溶出度及pH值等指标。

2.2处方筛选及制备工艺

2.2.1处方筛选

根据原研制剂处方[3]和专利CN101278914.B[4]中所提到的辅料种类,结合头孢泊肟酯特点,进行处方设计,根据干混悬剂的质量考核标准进行筛选,并与参比制剂进行对比。矫味剂、色素等辅料选用常规用量,处方筛选采用单因素考察与多因素考察联合方式。首先采用单因素考察填充剂和助悬剂,处方筛选设计(以40袋样品量为标准)及结果见表1。

处方A颗粒偏硬,吸潮情况严重,考虑主要由于蔗糖易吸潮,处方B则颗粒相对适中,因此填充剂选用蔗糖与甘露醇联合应用。处方C、D、E的体积沉降比分别为0.88,0.57,0.94,表明黄原胶助悬效果比羟丙甲纤维素好,两者混用效果最好。

依据初步筛选结果,采用多因素考察设计进行处方筛选,综合考虑颗粒情况、沉降体积比、溶出度、pH值及吸湿增重等指标。处方筛选设计见表2;综合评价结果见表3。根据与参比制剂的结果比较,最终选用处方9。

2.2.2制备工艺

蔗糖粉碎过30目筛(筛孔内径:613μm),除原料、香精外其余辅料均过40目筛(筛孔内径:425μm)备用。取羟丙甲纤维素(E5),加纯化水搅拌溶解制备成浓度为6%粘合剂。称取处方量的头孢泊肟酯、蔗糖、交联羧甲基纤维素钠、黄原胶、甘露醇、二氧化硅、阿斯巴甜、氯化钠、谷氨酸钠及黄氧化铁,加入湿法制粒机预混5～10min,分次加入粘合剂适量,制备软材;将所制备软材出料至沸腾干燥机,30目制粒,50～60℃通风干燥,30目整粒;加入处方量甜橙味粉末香精,混合5～10min,即得。

表1头孢泊肟酯干混悬剂处方初步筛选

表2头孢泊肟酯干混悬剂处方筛选

表3头孢泊肟酯干混悬剂处方筛选评价

2.3优化处方的性质考察

外观:浅黄色粉末;3批头孢泊肟酯干混悬剂沉降体积比分别为0.99,0.98及0.98;pH值分别为4.7,4.8及4.8;水分采用卡式水分测定法,结果分别为0.9%,1.0%及1.2%;吸湿增重分别为4.78%,4.65%及4.81%。

2.4溶出度检查

2.4.1空白辅料干扰

取处方量空白辅料约0.1g,照溶出度测定法进行稀释,在200～400nm波长范围进行光谱扫描。辅料在波长259及264nm处均无紫外吸收。

2.4.2测定波长选择

取头孢泊肟酯干混悬剂适量,以甲醇溶解后,用各溶出介质(pH值1.2盐酸、pH值4.0醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液、水、pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸)稀释制成每毫升约含头孢泊肟酯11μg的溶液,作为供试品溶液。取供试品溶液,以各对应溶出介质为空白,按照紫外-可见分光光度法,在波长200～400nm范围内扫描。

由结果可知,头孢泊肟酯干混悬剂溶出度检测波长为259nm(pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸)、264nm(pH值1.2盐酸、pH值4.0醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲液、水)。

2.4.3线性范围

精密称取头孢泊肟酯对照品11.28mg,置10mL量瓶,加甲醇适量使溶解,以溶出介质溶解并稀释至刻度,作为对照品贮备液。分别量取对照品贮备液0.2,0.5,0.8,1.0,1.5,2.0mL置100mL量瓶,加溶出介质稀释定容至刻度,照紫外-可见分光光度法测定,溶出介质为空白对照,记录吸光度值。以头孢泊肟浓度(C,μg·mL-1)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标进行线性回归。线性方程为A=0.0423X-0.002,R2=0.9984,结果表明头孢泊肟浓度在1.66～16.6μg·mL-1范围内,溶液浓度与吸光度呈良好的线性关系。

2.4.4精密度实验

取上述供试品溶液,分别测定吸光度6次,结果为0.351,0.349,0.355,0.351,0.353,0.351,平均0.352,RSD为0.59%,结果表明该法测定精密度良好。

2.4.5重复性实验

取本品(批号:H916140501)6袋,分别测定吸光度,结果为0.461,0.469,0.459,0.463,0.462,0.466,平均0.463,RSD为0.36%。结果表明该溶出测定方法重复性良好。

2.4.6回收率实验

分别称取头孢泊肟酯对照品(约含头孢泊肟酯5.5,8.9和11mg)各3份,置9个10mL量瓶,用pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸稀释至刻度,摇匀,作为各回收率对照品储备液。精密量取各回收率对照品储备液1mL,置100mL量瓶,加入空白辅料21mg,用pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸稀释至刻度,摇匀,作为50%,80%,100%供试品溶液,每个浓度3份,共9份。以100%回收率溶液(11.11mg)为对照溶液。取供试品溶液与和对照品溶液,照紫外-可见分光光度法在259nm波长处测定吸光度,计算回收率,测定结果见表4。

结果表明本品3个浓度下溶出回收率平均值为100.4%,RSD值为1.12%,说明本法回收率良好。

2.4.7溶液稳定性实验

①对照品溶液稳定性。

取头孢泊肟酯对照品回收率对照溶液,作为稳定性溶液,以溶出介质甘氨酸-氯化钠-盐酸(pH值3.0)为空白,测定紫外吸光度,检测波长259nm,分别于室温条件下在0,1,2,3,4h末取各供试品溶液测定吸光度,RSD为0.37%,结果表明对照品溶液在4h内稳定。

②样品溶液稳定性。

取溶出仪溶出液滤过,以溶出介质为空白对照,分别于室温条件下在0,1,2,3,4h末取各供试品溶液测定吸光度,计算得RSD分别为0.37%,0.33%,0.44%,0.71%和0.98%。结果本品溶液吸光度无明显变化,4h内稳定。

2.4.8溶出度测定结果

取头孢泊肟酯干混悬剂样品3批,各6袋,以pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸(pH值3.0)为溶出介质,采用紫外-分光光度法测定,检测波长259nm,转速75r·min-1,依法操作,经30min时取样测定,结果见表5。

表4溶出度测定回收率实验结果

表53批样品溶出度测定结果

2.4.9含量测定结果

采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以水-甲醇=55:45为流动相;检测波长为240nm;柱温40℃,精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μL分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法计算供试品中C15H17N5O6S2的含量,分别为99.1%,98.9%及99.6%。

2.5溶出曲线的绘制

2.5.1溶出均一性

取自制样品(批号:H916140501)6袋,根据上述已确定溶出方法,测定各样品溶出曲线,确定其溶出均一性,样品在各时间点的溶出RSD分别为2.4%,1.4%,0.73%,1.28%,0.87%;其在15min溶出均超过85%,溶出相似。测定结果图1。结果表明,在pH值3.0介质中本品溶出批内均一性良好。

2.5.2溶出重复性

取3批供试品(批号:H916140501,H916140502,H916140503)及对照品(批号:0369),每批取12个样品,于5,10,15,20,30min时吸取溶出液适量,测定溶出量,绘制4批样品溶出曲线,结果见图2,表明产品溶出均一性良好。由于其在15min溶出均>85%,与参比制剂溶出相似。

图1溶出均一性测定结果

图2溶出重复性测定结果

2.5.3溶出曲线的绘制

按照上述确定的5种溶出介质及溶出曲线方法,测定头孢泊肟酯干混悬剂(批号:H916140501)溶出曲线,结果见图3。

图3头孢泊肟酯5种溶出介质溶出曲线

3、讨论

3.1处方工艺选择

干混悬剂是提高生物利用度的优选剂型,由于其药物以微粒的形式混散于辅料中,因此分散度较大,有利于胃肠道吸收。干混悬剂加水分散后,应符合混悬剂的质量要求,即混悬液中的微粒应均匀分散,不应迅速下沉,沉降后不应结成饼块,经振摇后应迅速再分散。由于干混悬剂的制剂特性,沉降体积比为其处方工艺研究过程中最主要指标之一。处方筛选主要考察助悬剂及填充剂的选择和用量。

根据原研制剂的处方[3]和专利CN101278914.B[4]中所提到的辅料种类,选用黄原胶和羟丙甲纤维素为助悬剂,选用蔗糖和甘露醇联合作为填充剂,头孢泊肟酯味苦,有异臭,处方中加入适量阿斯巴甜、氯化钠、谷氨酸钠及甜橙味粉末香精作为矫味剂,使得干混悬剂口感更好,易被患者尤其是儿童患者接受。控制原辅料的粒度,采用常规的湿法制粒、整粒及干燥工艺,制备工艺相对容易控制。

3.2方法学验证溶出介质的选择

日本厚生省选择水为溶出介质[5],而吴琦琦等[6]报道,在0.1mol·L-1盐酸中,转速为50r·min-1时,样品可能产生凝胶化现象,膨胀结块,不能有效溶出。研究表明,头孢泊肟酯与食物同服会增药物浓度-时间曲线下面积(AUC)和峰浓度(Cmax),因而该药宜饭后服用。人体空腹时胃液pH值为1.0,饭后被稀释至约pH值3.5,因此《中华人民共和国药典》2015版[7]及《美国药典》[8]溶出介质均为甘氨酸-氯化钠-盐酸(pH值3.0)更能模拟该药品在体内溶出的实际情况,更合理。因此溶出曲线方法学验证选用甘氨酸-氯化钠-盐酸溶液(pH值3.0)作为溶出介质。

3.3溶出测定方法的选择

《中华人民共和国药典》2015年版及《美国药典》溶出度测定均选择紫外-可见分光光度法,而日本厚生省选择高效液相色谱(HPLC)法,通过HPLC法及紫外-可见分光光度法分别测定头孢泊肟酯在5种溶出介质中的溶出,F检验对测得数据进行评估,结果表明两种方法间无显著差异。由于头孢泊肟酯A、B异构体的保留时间分别为24和30min,无法及时有效测定,不适用于溶出曲线研究,最终选定紫外-可见分光光度法进行溶出曲线测定。

3.4溶出曲线测定介质的确定

人体消化道的pH值全范围为1.2～6.8,参考日本厚生省公布的头孢泊肟酯干混悬剂溶出曲线测定法,其溶出介质分别为pH值1.2盐酸、pH值6.8磷酸盐缓冲液、水、pH值4.0醋酸盐缓冲液;头孢泊肟酯的解离常数pKa为3.20,《中华人民共和国药典》2015年版收载品种头孢泊肟酯干混悬剂质量标准中溶出度项以pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸为溶出介质;为了真实反映药物体内生物利用度,并对不同产品作出合理区分,进而预测药物的体内吸收过程[9],综合分析选择以pH值1.2盐酸、pH值4.0醋酸盐缓冲液、水、pH值6.8磷酸盐缓冲液、pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸为溶出介质,测定其溶出曲线,进行系统考察。

3.5溶出相似性的确定

美国食品药品管理局提出采用溶出曲线来评价药品内在质量、即延伸至仿制药与原研药是否生物等效的情况,并规定采用f2因子对溶出曲线的一致性进行评估。日本于1998年推出的“药品品质再评价工程”采用的手段是通过体外溶出度实验来对药品的内在品质进行评估[10]。溶出度测定是体外评价药物质量、判断药物临床疗效的有效方法,是评价药物渗透吸收和生物利用度的重要指标,即参比制剂与仿制制剂的4条溶出曲线的一致性。本品属低溶解性-低渗透性药物,溶出曲线主要目的在于提高BE实验的通过率,体外溶出一致,体内生物等效性的概率会大大提高。根据生物药剂学分类系统,如果药物在15min内溶出达到85%,可认为两批产品溶出行为相似。本研究中参比制剂和自研制剂在pH值为1.2盐酸、pH值3.0甘氨酸-氯化钠-盐酸、pH值4.0醋酸盐缓冲液、pH值6.8磷酸盐缓冲、水5种溶出介质中15min溶出均超过85%,自研制剂与参比制剂在上述溶出介质中溶出相似,本结果为进一步生物等效性研究奠定了基础。

参考文献：

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[3]1990.日本第一三共株式会社.头孢泊肟酯干混悬剂(博拿)日文版说明书[A].

[4]海南三叶美好制药有限公司.头孢泊肟酯干混悬剂组合物及其制备方法:101278914.B[P].2010-06-02.

[5]日本厚生省医药安全局.医疗用医药品品质情报集2010年版[S].东京:药事日报社,2010:121-122.

[6]吴琦琦,文亮,李晓燕,等.头孢泊肟酯片溶出度方法研究[J].中国药品标准,2015,16(1):20-24.

[7]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社,2015:185-186.

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