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新生儿早产与其IRAKM基因多态性的相关性研究

2020-07-18 220 上传者：管理员

摘要：目的研究新生儿白介素1受体相关激酶M(IRAKM)基因多态性与早产的关系。方法选取2017年1月—2018年12月在浙江省台州医院就诊的妊娠妇女1300例,随机选取其中300例早产儿作为早产儿组和50例非早产儿作为对照组,统计2组新生儿一般资料。检测2组新生儿血清IRAKMmRNA的表达量,并检测IRAKM基因型,分析新生儿IRAKM基因多态性与早产的相关性。结果 2组新生儿母亲平均年龄、母亲分娩史、母亲文化程度、性别比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。早产儿组血清中IRAKMmRNA表达量低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。2组新生儿IRAKM+22148位点基因型频率、等位基因频率比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,携带基因G为早产发生的危险因素。结论新生儿IRAKM+22148位点基因多态性与早产具有一定的相关性,携带等位基因G可能是发生早产的易感基因。

关键词：
IRAKM基因
基因多态性
新生儿
早产
遗传基因
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早产儿是指妊娠满28周至不足37周间所出生的新生儿,此类新生儿体质量多在1000～2499g。目前我国早产儿分娩率大约占分娩新生儿总数的5%～15%,且近年来呈逐渐上升趋势,75%左右的新生儿死亡与早产有关,存活的早产儿少部分会遗留智力障碍或者神经系统后遗症[1,2]。目前临床上有研究[3]报道早产与遗传因素具有一定的相关性,可能受到多种基因的调控影响孕周有关;但也有研究[4]认为早产与细胞炎性反应相关,当机体合成并分泌过量的细胞因子后会介导多种炎性反应,影响产妇机体生理变化,进而影响孕周,最终导致早产的发生。IRAKM基因属于一种Toll样受体信号途径的负向调节因子,目前认为此基因与多种疾病的发生具有一定的相关性[5]。但目前对于此基因与早产之间的关系尚未有研究证实,因此在本文研究中分析新生儿IRAKM基因多态性与早产的相关性,为早产的遗传基因研究提供新的方向。

1、资料与方法

1.1临床资料

选取2017年1月—2018年12月在我院就诊的妊娠妇女1300例,所有产妇分娩成功后,随机选取其中300例早产儿作为早产儿组和50例非早产儿作为对照组,其中早产儿组男148例,女152例,对照组男23例,女27例。本研究所有新生儿家长均知情并签署知情同意书,且研究经过我院伦理委员会批准。

1.1.1纳入标准

早产儿组:在正常情况下分娩的活产儿,非意外、人工引产所引起的早产,非双胎或多胎,孕周<37周。对照组:与早产儿同期出生,出生时间相差小于3d,孕周≥37周。

1.1.2排除标准

排除有合并病的妊娠产妇,如妊娠糖尿病、妊娠高血压等;排除畸形新生儿;排除肝、肾、心功能不全的妊娠产妇。

1.2检测方法

1.2.1样本采集

采集2组新生儿脐带血2mL,在抗凝管中保存,离心处理,转速为3000r/min,离心半径为10cm,离心10min,之后放入洁净的EP试管中,分离上层血清,在温度为-80℃环境中保存,待用。

1.2.2血清IRAKMmRNA表达量检测

使用荧光定量RT-PCR检测IRAKMmRNA的表达量,严格按照定量PCR仪的操作说明书进行。依次加入2.5μL稀释10倍的PCR缓冲液,1.5μLMgCl2溶液,0.5μL上游引物和下游引物,最后加水配成总体积为25μL的反应体系。在94℃环境中反应1min;55℃环境中反应1min;72℃环境中反应1min,进行35个循环,72℃环境中反应延长5min,重复最少3次。采用2-△△Ct方法计算出需要检测的IRAKMmRNA的表达量。

1.2.3DNA提取

采集2组新生儿脐带血2mL,在EDTA管中保存,按照Gentra Puregene BloodKit说明进行操作,提取血液样本中的DNA,在温度为-70℃的冰箱中保存。

1.2.4IRAKM基因型鉴定

将提取的DNA样本使用SNPscanTM多重SNP分型技术鉴定IRAKM基因+22148位点基因型。基因型包括AA、AG、GG。引物使用primer5.0软件设计,采用Bi-PASA方法设计引物,其中上游引物为:5'-AGTGGAACTGATGTCCTGCAG-3',下游引物为:5'-GCAACACATTGACCTAATGACCAG-3'。

1.3统计学方法

使用SPSS20.0统计学软件对2组各项数据进行分析处理。计量数据采用x¯±s表示,2组间比较采用成组t检验;等级资料采用Wilcoxon秩和检验;各组基因频率、等位基因频率比较使用χ2检验,IRAKM+22148位点基因型及突变等位基因与早产的相对危险度分析采用logistic回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1新生儿一般资料比较

2组新生儿母亲平均年龄、母亲分娩史、母亲文化程度、性别比较,差异无统计学意义(均P>0.05),具有可比性,见表1。

2.2IRAKM基因在两组新生儿血清中的表达量比较

早产儿组血清中IRAKMmRNA表达量低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),见表2。

2.3新生儿IRAKM基因多态性与早产的相关性

2组新生儿IRAKM+22148位点基因型频率、等位基因频率比较差异具有统计学意义(均P<0.05),见表3。以组别为因变量(对照组=0,早产儿组=1),以IRAKM基因型(AA=0,AG=1,GG=-1)、等位基因(A=0,G=1)为自变量,logistic回归分析结果显示,携带基因G为早产发生的危险因素,见表4。

表12组新生儿一般资料比较

表22组新生儿血清中IRAKMmRNA表达量比较

表32组新生儿IRAKM基因多态性比较

表4新生儿IRAKM基因多态性logistic回归分析

3、讨论

早产为导致新生儿死亡的主要原因,其中存活的早产儿少部分伴随着运动障碍、智力障碍以及各个系统的功能和结构异常等后遗症,多种因素可导致早产的发生,包括胎盘因素、母体疾病因素、遗传因素等。但目前临床上对于导致早产的具体因素并不明确,因此寻找导致早产的相关因素,对延长孕周、降低早产率具有重要的意义。

细胞因子是由多种免疫细胞(单核巨噬细胞、T细胞)与非免疫细胞(成纤维细胞、表皮细胞)受到刺激后所合成分泌的,部分细胞因子具有较高的生物活性[6]。有研究表明,当机体受到多种抗原的刺激后,受到破坏的细胞会合成分泌大量的细胞因子,进而介导炎性反应的发生[7]。目前研究发现与细胞因子相关的基因其多态性与早产之间具有一定的相关性,可能为早产的遗传基因,如梅梅等[8]在研究中认为MTHFR基因677位点T等位基因多态性可能与新生儿早产相关,潘金勇等[9]认为ESR1基因rs2234693位点T等位基因与早产儿脑室内出血具有一定的相关性。IRAK家族属于Toll样受体信号通路中较为重要的一种调节因子,包括IRAK1、IRAK2、IRAK4和IRAKM等4个家族成员,其中Toll样受体信号通路的负向调节因子为IRAK2、IRAKM,正向调节因子为IRAK1、IRAK4,其中IRAK2、IRAKM不具备激酶活性,IRAK1、IRAK4具备激酶活性[10,11,12,13]。有研究[14,15]认为,IRAKM基因是位于染色体12q14.1-12q15,但仅在巨噬细胞、单核细胞中有表达,但近年来有研究发现此基因还在上皮细胞中有所表达。IRAKM属于一种细胞内激酶,通过调节炎症反应,抑制IRAK4对IRAK1的磷酸化,稳定Toll样受体信号通路/MyD88/IRAK4/IRAK1的复合物,阻止复合体IRAK1-TRAF6从Toll样受体信号通路/MyD88/IRAK4/IRAK1的复合物上分离,最终起到抑制炎症反应的效果,对免疫动态平衡进行调节[16,17,18]。李慧佳等[19]在其研究中对广西汉族人群IRAKM+22148-A/G基因多态性和抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎之间的相关性进行分析,并检测IRAKM+22148位点基因型,认为IRAKM+22148-A/G基因分布频率在抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎患者与健康人之间比较差异无统计学意义,IRAKM+22148-A/G基因多态性与抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎易感性无关。张向莲等[20]研究发现IRAKM基因多态性与脓毒症的发生具有一定的相关性,携带等位基因G可能是导致脓毒症发生的易感基因。本研究取新生儿脐带血,检测IRAKM基因在新生儿血清中的表达量,并对IRAKM基因的基因型进行鉴定分析,分析新生儿IRAKM基因多态性与早产的相关性,结果显示,新生儿IRAKM+22148位点基因多态性与早产的发生具有一定的相关性,且携带等位基因G可能为发生早产的易感基因,与上述研究中认为携带等位基因G为发病的易感基因的研究结果一致。但本文样本量较少,统计数据可能存在一定的偏倚,因此还需后续研究实验进一步验证。

综上所述,新生儿IRAKM+22148位点基因多态性与早产具有一定的相关性,携带等位基因G可能是发生早产的易感基因。

利益冲突无

参考文献：

[1]刘念,李智文.多环芳烃相关代谢酶基因多态性与早产易感性的研究进展[J].中华预防医学杂志,2016,50(5):463-467.

[3]蒋敏,姚延娇,谢艳艳,等.自发性早产的免疫学研究进展[J].医学综述,2018,24(18):3548-3553.

[4]马丙祥,陈恬恬,欧阳俊辉.蒲金口服液对宫内感染/炎症致早产脑损伤大鼠脑组织IL-6和TNF-α表达的影响[J].辽宁中医杂志,2018,45(5):1069-1072,1120.

[5]常绍鸿,栾斌,张卫星.胎龄≤34周的汉族早产儿脐带血内皮型一氧化氮合成酶基因多态性及其与早产儿主要并发症的关系研究[J].中国全科医学,2018,21(18):2222-2226.

[6]丁华,孙芹,方秀文.ATG5基因多态性与早产儿脑瘫等神经发育相关疾病的关联性研究[J].中国妇幼保健,2018,33(23):5492-5495.

[8]梅梅,习红丽,任红英,等.MTHFR及PAI基因多态性与新生儿早产易感性的关系[J].现代生物医学进展,2015,15(33):6435-6438.

[9]潘金勇,张惠荣,曹晓燕,等.雌激素受体1基因多态性与早产儿脑室内出血相关性的研究[J].中国儿童保健杂志,2016,24(5):462-465,482.

[18]武延格,邱劲军,刘宏霞,等.负性调控因子IRAKM在系统性红斑狼疮免疫调节异常中的作用[J].中国免疫学杂志,2017,33(12):1858-1861.

[19]李慧佳,薛超,黎伟,等.广西汉族人群IRAKM+22148-A/G基因多态性与ANCA相关性小血管炎的关系[J].广东医学,2018,39(5):686-690.