流感是流感病毒引起的急性呼吸道传染病，人群普遍易感，儿童是流感的高发人群以及重症高危群体[1]。在秋冬流感流行季，有20%～30%的儿童会感染甲型流感[2]。儿童感染甲型流感后，易发展为甲型流感病毒性肺炎。据报道，流感导致下呼吸道感染死亡的5岁以下儿童中，99%是发展中国家儿童[3]。甲型流感病毒性肺炎儿童的主要临床表现为发热（以高热程度多见）、咳嗽、咽痛以及呕吐、腹泻等消化道症状，并存在流感病毒混合其他病原菌感染引起的肠道并发症[4]。一旦出现重症，进展迅速，甚至危及生命。

羚羊感冒口服液功能主治为清热解表，临床用于治疗流行性感冒、伤风咳嗽、头晕发热、咽喉肿痛。目前，羚羊感冒口服液在临床广泛用于治疗儿童急性上呼吸道感染[5]、小儿热性惊厥复发[6]等，可有效减轻患儿病情，不良反应小。但现有羚羊感冒口服液说明书对儿童用药表述不清，对临床应用造成困扰。

儿童用药（儿科用药）是中成药临床应用的重要组成之一，儿童用药与儿童健康密切相关[7]。由于儿童正处于生长发育阶段，与成年人相比，其新陈代谢旺盛，免疫系统发育不完全，内分泌、神经系统以及药物酶解系统发育不完善，对药物毒副作用比成年人更敏感[8,9]。并且不同年龄段儿童的身体器官结构和代谢功能不同，用药剂量过多产生毒性反应，用药剂量不足则无法有效治疗疾病，因此选择正确的用药剂量，对于儿童安全合理用药至关重要。本次研究的目的是确定羚羊感冒口服液儿童用药范围，为儿童临床用药提供有效性及用法用量的参考。

1、材料

1.1 实验动物

幼龄ICR小鼠，3～4周龄，体质量（14.00±1.00)g，均为SPF级，雌雄各半，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号：SCXK（京）2016-0006；幼龄日本大耳白兔，6～7周龄，体质量1.50～1.80 kg，普通级，雌雄各半，由北京金牧阳实验动物养殖有限责任公司提供，动物许可证号：SCXK（京）2015-0005。实验中所有操作均遵循National Institutes of Health(NIH）及北京市实验动物伦理委员会的规定。

1.2 病毒株

甲型流感病毒FM1株，购自美国标准生物品收藏中心（American type culture collection,ATCC），本实验室传代，-80℃冰箱保存备用。

1.3 药物

羚羊感冒口服液（南京同仁堂药业有限责任公司，生产批号：180520）；小儿肺热咳喘口服液（黑龙江葵花药业股份有限公司，生产批号：201709047）；磷酸奥司他韦（宜昌东阳光长江药业股份有限公司，生产批号：0651808031）；复方氨酚美沙糖浆（瑞可）[史达德药业（北京）有限公司，生产批号：18031512]；小儿热速清口服液（吉林一正药业集团有限公司，生产批号：181292）。

1.4 实验试剂

营养肉汤（北京奥博星生物技术有限责任公司，批号：20140320）；冰醋酸（国药集团化学试剂有限公司，批号：20141121）；伊文思兰（中国医药公司北京采购供应站，批号：871226）；乙醚（上海市鸿盛精细化工有限公司，批号：20181009）；氨水（国药集团化学试剂有限公司，批号：20120918）；脂多糖（美国SIGMA公司，批号：039M004V）。

1.5 实验仪器

A2型生物安全柜（美国Thermo公司，型号：MSC1.8；美国Nuaire公司，型号：NU-425-400E），低温高速离心机（德国Eppendorf，型号：5810R），电子分析天平（美国Ohaus Corp.Brock.WJ.，型号：AR-1140；梅特勒-托利多仪器有限公司，型号：AL204），多功能酶标仪（德国Perkin Elmer，型号：Enspire），超声雾化器（江苏鱼跃医疗设备股份有限公司，型号：402A），电子台称（大阳衡器有限公司，型号：TCS-100），兽用电子体温计（临海医疗仪器厂，型号：D-10）。

2、方法

2.1 剂量设计

根据现有品种成人用量，采用4种换算方法均得到1～12岁小儿用量在5～18 m L·d-1内[10,11]，即0.4～0.8 m L·kg-1·d-1；实验中扩大剂量范围共设置0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 m L·kg-1·d-1 6个剂量，按照体表面积换算公式换算为小鼠剂量为1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 m L·kg-1·d-1；家兔剂量为0.3、0.6、1.2、1.8、2.4、3.0 m L·kg-1·d-1。

2.2 动物分组

幼龄ICR小鼠饲养于中国中医科学院中药研究所生物安全Ⅱ级实验室，室温：（22±3）℃，相对湿度：55%～60%，自由摄食饮水。实验前按体质量等级随机分为正常对照组、模型对照组、磷酸奥司他韦（达菲）对照组、小儿肺热咳喘对照组、羚羊感冒口服液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 m L·kg-1·d-1 6个剂量组，每组10只。幼龄家兔饲养于北京金牧阳实验动物有限公司，室温（22±2）℃，相对湿度：55%～65%，自由摄食饮水。分别在实验前2 d及实验当天监测体温，筛选体温值在（39.4～40.0）℃间且波动在0.5℃以内的家兔。取体温合格的家兔60只，根据实验当天基础体温值均匀分组，分别为正常对照组、模型对照组、复方氨酚美沙对照组、小儿热速清口服液对照组及羚羊感冒口服液0.3、0.6、1.2、1.8、2.4、3.0 m L·kg-1·d-1 6个剂量组，每组6只。

2.3 对流感病毒FM1株感染幼龄小鼠致肺炎模型的治疗作用

除正常对照组外，各组小鼠轻度麻醉，滴鼻感染流感病毒液FM1株，感染后2 h灌胃给药，正常对照组及模型对照组同等条件下灌胃蒸馏水，连续4 d。于第5天称量记录小鼠体质量，处死后取肺组织称量记录肺重，按照下列公式计算肺指数和肺指数抑制率[12]。

2.4 对冰醋酸致幼龄小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

造模前各给药组小鼠灌胃给药，0.2 m L·10 g-1，正常对照组及模型对照组在同等情况下给蒸馏水，连续3 d。最后1次灌胃给药1 h后，每只小鼠腹腔注射1%冰醋酸溶液0.15 m L、尾静脉注射0.5%伊文思兰溶液0.2 m L,20 min后脱颈处死小鼠，用生理盐水冲洗腹腔，每只4 m L并收集腹腔液，在1 000 r·min-1离心5 min，取上清液，用多功能酶标仪在590 nm处测定吸光度，以t检验进行统计学处理，比较模型对照组与给药组是否有统计学差异[13]。

2.5 对氨水致幼龄小鼠咳嗽模型的止咳作用

幼龄ICR小鼠以25%氨水超声雾化喷雾引咳15 s，观察小鼠从喷雾开始到出现腹肌收缩张嘴时间，1.5 min内不出现咳嗽的弃去。将经过筛选的合格小鼠按“2.2”方法分组，各给药组灌胃给药，0.2 m L·10 g-1，每日1次，连续3 d，模型对照组在同等情况下给蒸馏水。于第3天给药1 h后，各小鼠以25%氨水超声雾化喷雾引咳15 s，以小鼠腹肌收缩或缩胸，同时张大嘴为咳嗽指标，观察各组小鼠自喷雾开始至出现咳嗽的潜伏期及3 min内的咳嗽次数，结果进行统计学处理[14]。

2.6 对冰醋酸致幼龄小鼠疼痛模型的影响（扭体实验）

幼龄ICR小鼠造模前灌胃给药，模型对照组在同等情况下给蒸馏水，于第3天给药后1 h，每只腹腔注射1%冰醋酸溶液0.15 m L制作小鼠疼痛模型，正常对照组注射生理盐水。注射冰醋酸5 min后立即观察小鼠扭体情况，记录15 min内扭体次数。

2.7 对脂多糖致幼龄家兔发热模型的解热作用

幼龄家兔按5 m L·kg-1灌胃给药1次，正常对照组和模型对照组在同等情况下灌胃蒸馏水。灌胃1 h后，除正常对照组外，其余各组按体重值耳缘静脉注射脂多糖250 ng·kg-1·d-1进行造模。分别测定造模后1、2、3、4、5 h的体温，以不同时间体温与造模前体温之差值为体温变化的指标，结果采用组间比较t检验进行统计学处理[15]。

2.8 统计学方法

采用SPSS 25.0数据处理软件，计量资料采用t检验，以表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

3、结果

3.1 对流感病毒FM1株感染幼龄小鼠致肺炎模型的治疗作用

感染流感病毒FM1株后，小鼠肺组织出现炎症、水肿、充血，肺重增加，体重下降，肺指数明显增高，与正常对照组比较有统计学差异（P<0.01）；羚羊感冒口服液各剂量组均可一定程度上降低小鼠肺指数，其中0.4～0.8 m L·kg-1·d-1 3个剂量组抑制率在30%左右，尤其0.8 m L·kg-1·d-1剂量组肺指数抑制率为39.66%，与模型对照组比较有统计学差异（P<0.05）（表1）。

3.2 对冰醋酸致幼龄小鼠腹腔毛细血管通透性的影响

小鼠腹腔注射冰醋酸后引起急性炎症反应，导致腹腔毛细血管通透性增加，引起伊文思蓝渗出增多，腹腔液中伊文思蓝含量增加，吸光度值增大。羚羊感冒口服液在所试剂量范围内均可减少冰醋酸引起的小鼠毛细血管通透性，其中1.0、0.8、0.6、0.1 m L·kg-1·d-1 4个剂量组，腹腔液OD值与模型对照组比较有统计学差异（P<0.01,P<0.05）（表2）。

3.3 对氨水致幼龄小鼠咳嗽模型的止咳作用

氨水属于化学刺激物，雾化后作用于小鼠呼吸道的感受器反射性引起咳嗽，是研究药物止咳作用的常用模型之一[16]。根据本实验方法学，此项研究内容可不设立正常对照组[1,2,3]。与模型对照组比较，羚羊感冒口服液1.0、0.8、0.6 m L·kg-1·d-1 3个剂量组均可显著延长咳嗽潜伏期，1.0、0.8 m L·kg-1·d-1 2个剂量组可明显减少氨水引起的小鼠咳嗽次数（P<0.05、P<0.01）（表3）。  

表1 羚羊感冒口服液对流感病毒FM1株感染幼龄小鼠致肺炎模型的治疗作用    

表2 羚羊感冒口服液对幼龄小鼠腹腔毛细血管通透性的影响  

3.4 对冰醋酸致幼龄小鼠疼痛模型的影响（扭体实验）

扭体实验是评价药物镇痛作用的常用模型，根据本实验方法学，此项研究内容可不设立正常对照组[1,2]。本实验中将1%醋酸直接腹腔注射，刺激腹膜引起疼痛，使小鼠出现扭体反应，表现为腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起等。羚羊感冒口服液所试0.1、0.8 m L·kg-1·d-1 2个剂量组均可明显减少醋酸致小鼠疼痛的扭体次数，与模型对照组比较有统计学差异（P<0.05,P<0.01）（表4）。

3.5 对脂多糖致幼龄家兔发热模型的解热作用

脂多糖是革兰氏阴性杆菌释放的一种内毒素，可直接作用于下丘脑的体温调节中枢，或作用于粒细胞或单核巨噬细胞，使之释放白细胞致热原，白细胞致热原进入中枢神经系统后，可作用于体温调节中枢，使体温定点上调，引起产热增加、散热减少，体温升高[17]。本实验中采用耳缘静脉注射脂多糖1 h后，即引起家兔体温上调，形成发热模型。所有家兔实验前基础体温均一，实验期间正常对照组动物体温保持在正常范围内，模型对照组动物体温呈平稳升高状态，各时间点与正常对照组比较有统计学差异（P<0.01）。羚羊感冒口服液0.4～1.0 m L·kg-1·d-1剂量组对给药后4 h和5 h的体温有明显降低作用。0.1～0.2 m L·kg-1·d-1剂量组在给药后4 h显著降低家兔体温差值，与模型对照组比较有统计学差异（P<0.01,P<0.05）（表5）。

3.6 儿童用法用量推荐

总体研究结果显示，羚羊感冒口服液在0.4～0.8 m L·kg-1·d-1剂量范围内产生稳定有效的抗病毒、抗炎、止咳、镇痛及解热作用。以0.4、0.6、0.8 m L·kg-1·d-1为羚羊感冒口服液成人稳定剂量，按照成人用量与儿童用量换算公式（公式3）计算羚羊感冒口服液儿童用药范围，得出4.8、7.2、9.6 m L·d-1为1～3岁儿童稳定剂量，7.2、10.8、14.4 m L·d-1为4～6岁儿童稳定剂量，10.8、16.2、21.6 m L·d-1为7～12岁儿童稳定剂量，为临床研究提供参考。  

表3 羚羊感冒口服液对氨水致幼龄小鼠咳嗽模型的止咳作用    

表4 羚羊感冒口服液对冰醋酸致幼龄小鼠疼痛模型的影响  

4、结论

儿童用药特指专门针对儿童患者设计生产的药品，用于儿科治疗[18]。儿童患者是特殊用药群体。一方面，儿童机体免疫机制尚未发育完善，抵抗力较成人低，易患流感等感染性疾病；另一方面，儿童是多样化群体，年龄范围包含广，涵盖新生儿、婴儿、儿童等不同群体，个体之间差异大，其体质量范围、生理机能存在较大的差异。因此，儿童对药物敏感性较强，较成人更易发生药物损害[19]。世界卫生组织数据显示，患病儿童占患病人口总数20%，每年因用药不当造成67%的5岁以下儿童死亡[20]。然而目前探究儿童适应证相关的药效学及药动学临床试验少，儿童用药并不完全依托说明书，说明书存在滞后性[21]。这些均可能造成儿童用药不当。因此，为儿童患者选择合适的用药剂量，可以更好地满足儿童临床用药需求，为儿童合理用药提供依据。

羚羊感冒口服液由《温病条辨》[22]名方“银翘散”加羚羊角化裁而来，由羚羊角、金银花、牛蒡子、荆芥、淡竹叶、桔梗、淡豆豉、连翘、薄荷脑、甘草组成，功能主治为清热解表。方中羚羊角、金银花为君药，可清热、镇惊、解毒、平肝熄风；牛蒡子、连翘、薄荷为臣药，可清热解毒、疏散外邪；淡竹叶、淡豆豉、荆芥、桔梗为佐药，可清热解表除烦、宣肺利咽祛痰；甘草为使药，调和诸药，药物组成符合中医“君臣佐使”的配伍原则，共同发挥清热解表、镇惊熄风的功效[23]。目前，羚羊感冒口服液在临床广泛用于儿童急性上呼吸道感染[5]、预防小儿热性惊厥发生及复发[6]等，可有效减轻患儿病情。

本次研究中，根据羚羊感冒口服液成人用量，采用成人用量换算儿童用量的4种方法，设定0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 m L·kg-1·d-1 6个给药剂量组，建立5种与功能主治相应的动物模型，对设定剂量的有效性进行评价，并筛选羚羊感冒口服液的儿童最佳用药量。动物选择时考虑动物周龄，同时保证动物体重的均一性。结果表明，羚羊感冒口服液在所试剂量范围内均可在一定程度上降低小鼠肺指数、抑制小鼠毛细血管通透性、减少小鼠咳嗽次数及扭体次数、降低家兔体温，其中发挥稳定药效的剂量为0.4～0.8 m L·kg-1·d-1，换算成不同年龄小儿临床推荐用量为1～3岁：每次5 m L、每日1～2次；4～6岁：每次5 m L、每日1～3次；7～12岁：每次5 m L、每日2～4次，但最终用法用量需结合临床试验确定。

在解热实验中，羚羊感冒口服液各剂量组对家兔发热4～5 h体温均有显著的降低作用，与临床报道具有较好地治疗和预防小儿高热惊厥发生及复发的临床特点相符合。小儿高热惊厥是儿科常见急症之一，起病急，病势凶，一般出现患儿意识丧失、两眼上翻、全身性或局限性抽搐，发生时间数秒至数分钟[24]，如不能及时有效救治，可导致患儿脑组织细胞损伤，反复发作者可引起癫痫等后遗症。因此有效控制高热惊厥、预防惊厥反复发作是儿科临床工作的重点。WANG等[25]通过临床试验发现羚羊感冒口服液可预防小儿热性惊厥复发，延长复发时间，且不良反应较小；LU等[5]用羚羊感冒口服液治疗儿童上呼吸道感染，结果表明联合服用羚羊感冒口服液，患儿退热时间快，症状减轻较快；SHI等[6]研究结果表明羚羊感冒口服液对小儿惊厥的复发次数、时间、发热程度等情况与地西泮片效果相当。本实验结果可为羚羊感冒口服液在预防小儿高热惊厥发作及复发的临床应用方面提供动物实验数据支持，并为临床用法用量提供科学参考。 

表5 羚羊感冒口服液对脂多糖致幼龄家兔发热模型体温差值的影响  

基金资助:国家自然科学基金资助项目(82104500);中国中医科学院科技创新工程项目(CI2021B015);

文章来源:孙绮悦,赵荣华,包蕾等.基于多动物模型药效评价体系研究羚羊感冒口服液儿童用药剂量[J].中国药物警戒,2024,21(02):121-126.