人乳头瘤病毒(HPV)是一种小的球形环状双链DNA病毒,能够特异性地引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖,导致多种良性和恶性病变[1]｡疑似子宫病变患者通常表现出阴道分泌物增多､外阴瘙痒､接触性出血等症状,这些症状可能与HPV感染有关[2],对疑似子宫病变患者进行HPV感染情况及亚型分析具有重要的临床价值｡人附睾蛋白4(HE4)是一种新型的肿瘤标志物,在HPV感染及子宫病变中,HE4的水平变化可能反映疾病的进展[3];同时,辅助性T细胞1型(Th1)和辅助性T细胞2型(Th2)在免疫调节中起着重要作用,其平衡状态与多种疾病的发生和发展密切相关[4],对于HPV感染是否与HE4和Th1/Th2水平存在相关性,依然存在疑问,故本研究对此进行分析,进一步了解HPV感染的免疫机制,为免疫治疗提供新思路｡

1、对象与方法

1.1研究对象回顾性选取2018年6月至2019年6月唐山市某医院收治的820例疑似子宫病变患者作为研究对象,均行HPV检测｡纳入标准:均符合临床特征———阴道流血､阴道分泌物增加､宫腔积液或积脓､合并感染有脓血性排液[5]｡排除标准:妊娠期妇女,哺乳期妇女,未进行化疗的肿瘤患者,依从性差的患者,艾滋病患者｡本研究中所有研究对象及家属均知情,签署知情同意书,并经过唐山市协和医院伦理委员会审批(伦理号:201805620)｡

1.2方法

1.2.1HPV水平检测使用一次性宫颈细胞采样刷,指导被检者仰卧在检查床上后子宫颈内放置检查刷,轻轻旋转检查刷后获得足够的脱落细胞,之后将细胞刷取出,将所得样本放置于宫颈脱落细胞保存液中,在此过程中快速摆动细胞刷以促使所采集的样本脱落至保存液中,4℃环境下做DNA提取处理,通过实时荧光定量聚合酶链式反应检测HPV病毒载量,首先细胞标本双链解链,采用RNA探针行杂交处理,生成杂交体与特异性抗体结合,根据发光强度､大小定量测定,计算负荷量,若HPV–DNA≥1.0pg/ml,则判断为阳性[6]｡

1.2.2细胞因子检测抽取患者的空腹静脉血5ml,离心半径6cm,以3000r/s离心1min,分离上层血清,-66℃环境下保存备用,采用酶联免疫吸附法检测血清HE4(瑞典康乃格诊断公司,货号:32874:2)､INF-γ(深圳市科普生物,货号:JL18256)､IL-2(深圳十点半贸易,货号:KH-01)､IL-4(北京冬歌博业生物科技,货号:DG10308H-48T)和IL-10(北京奇松生物科技,货号:QS450711-48T)水平｡

1.3统计学方法采用SPSS20.0统计软件进行分析处理｡符合正态性和方差齐性的计量资料采用x珋±s描述,两组间比较采用独立样本t检验,采取Bonferroni法校正检验水准,检验水准α=0.05;计数资料通过[n(%)]表示,HPV亚型感染､临床特征比较采用χ2检验;HPV感染与HE4､Th1/Th2的相关性采用Pearson相关性分析｡以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1疑似子宫病变病理学筛查结果及HPV亚型感染情况比较820例疑似子宫病变患者经子宫病变病理学筛查和HPV筛查,结果显示,子宫内膜癌患者376例,HPV感染的135例(HPV感染组),未检测到HPV感染的241例(非HPV感染组);子宫肌瘤患者236例,HPV感染的121例,未检测到HPV感染的115例;其他病变208例,HPV感染的130例,未检测到HPV感染的78例｡子宫内膜癌患者中,HPV感染组患者年龄35~59岁,平均年龄(44.65±8.05)岁,HPV16型感染的52例,HPV52型感染的49例,其他亚型HPV感染的34例;非HPV感染组患者年龄36~60岁,平均年龄(45.60±12.02)岁｡子宫内膜癌HPV感染组､非HPV感染组患者年龄比较,差异无统计学意义(t=0.821,P=0.412)｡子宫内膜癌患者HPV16型､HPV52型感染率高于子宫肌瘤及其他子宫病变患者,其他亚型HPV感染率低于子宫肌瘤及其他子宫病变患者,差异有统计学意义(χ2=8.200､9.067､29.723,P=0.017､0.011､<0.001)｡见表1｡

表1不同子宫病变HPV亚型感染情况比较[n(%)]

2.2HPV亚型感染与子宫内膜癌患者临床特征的关联性HPV16型､HPV52型､其他亚型HPV感染分别与子宫内膜癌患者不同分化程度､肌层浸润深度､淋巴结转移､临床分级､病理类型有关联性(χ2=6.462､15.385､5.538､9.846､26.000,P=0.040､<0.001､0.019､0.002､<0.001;χ2=10.531､4.939､4.939､9.184､6.898,P=0.005､0.026､0.026､0.002､0.009;χ2=6.971､15.059､11.529､9.941､8.471,P=0.031､<0.001､0.001､0.002､0.004)｡见表2｡

表2HPV亚型感染与子宫内膜癌患者临床特征的相关性[n(%)]

2.3子宫内膜癌患者血清HE4和Th1/Th2细胞因子比较HPV感染组HPV及HE4､INF-γ､IL-2､IL-4､IL-10水平均高于非HPV感染组,差异有统计学意义(t=180.820､32.581､8.649､13.053､5.902､10.607,均P<0.001)｡见表3｡

表3子宫内膜癌患者血清HE4､Th1/Th2细胞因子比较(x珋±s)

2.4子宫内膜癌患者HPV与HE4､Th1/Th2相关性分析Pearson相关性分析显示,子宫内膜癌患者HPV感染与HE4水平正相关(r=0.555,P=0.001),HPV感染与INF-γ水平正相关(r=0.416,P=0.001),HPV感染与IL-2水平正相关(r=0.408,P=0.001),HPV感染与IL-4水平正相关(r=0.506,P=0.001),HPV感染与IL-10水平正相关(r=0.420,P=0.001)｡见图1｡

图1子宫内膜癌患者HPV与HE4､Th1/Th2的Pearson相关性分析

3、讨论

目前HPV有150多种,不同的HPV具有不同的致病性[7]｡HPV可引起寻常疣､扁平疣､尖锐湿疣､鲍温样丘疹病､喉乳头状瘤､下生殖道上皮内病变､宫颈癌变等多种疾病[8]｡HPV感染有致癌的风险,一般高级别的上皮内病变有着癌变的风险,可随时发生癌变[9]｡子宫内膜癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,主要通过手术进行治疗[10]｡王凯等[11]研究显示,子宫内膜癌发生与多种因素有关,而HPV-DNA含量､巨细胞病毒DNA含量增高均是其发生的危险因素｡本研究显示,HPV16型､HPV52型在子宫内膜癌患者中感染率较高,表明HPV16型､HPV52型感染与子宫内膜癌的发生具有一定关联性,并且HPV16型､HPV52型感染与子宫内膜癌患者不同分化程度､肌层浸润深度､淋巴结转移､临床分级､病理类型等因素相关｡推测HPV16型､HPV52型感染可能在子宫内膜癌发生发展中具有一定作用,仍需进一步研究加以证实｡加强对HPV16型､HPV52型感染人群的监测已成为预防各种女性生殖道肿瘤的重要措施,对于提高恶性肿瘤早期检出率有积极意义｡HE4是一种卵巢癌肿瘤标志物,可作为子宫内膜癌的检测指标,能很好地反映出患者的疾病状态[12]｡HE4具有较高的特异性及敏感性,可预测子宫内膜癌的分期,可对术前评估的检测及治疗效果的预测提供帮助,尤其是对要求保留生育功能的患者,疾病临床分期的准确性更加重要,HE4水平的高低也是影响子宫内膜癌患者的预后因素[13-14]｡本研究通过酶联免疫吸附实验检测HE4水平,结果显示子宫内膜癌患者HPV感染组血清中HE4水平高于非HPV感染组,HPV感染与HE4水平呈正相关｡表明HE4可能参与HPV感染以及子宫内膜癌的发生与发展,在临床上可能具备预测疾病由HPV感染进展为子宫内膜癌的价值｡

Th1主要对抗细胞内原虫和细菌的免疫反应,增强吞噬细胞介导的抗感染免疫｡Th2是一种可以分泌Th2型细胞因子并参与体液免疫的因子,Th2细胞的前体细胞是辅助性T细胞0型(helperTcell0,Th0)细胞,主要效应是辅助B淋巴细胞活化,其分泌的细胞因子可促进B淋巴细胞分化与增殖,并促进抗体生成,可使B淋巴细胞大量增殖并进一步分化､产生抗体[15-16]｡INF-γ为二型干扰素,主要为有丝分裂原刺激T淋巴细胞产生,是一种高效的抗病毒生物活性物质,也是一种具有广泛免疫调节作用的淋巴因子[17]｡IL-2是免疫系统中的一类细胞生长因子,可以调控免疫系统中的白细胞活性,参与机体造血､抗体反应及肿瘤监视[18]｡IL-4为趋化因子家族中的细胞因子,是由多种细胞产生的一类细胞因子,白细胞介素可以调节并激活免疫细胞,引起细胞增殖与分化,细胞的增殖和分化在机体炎症反应中均有重要作用｡IL-10是一种多功能､多细胞源的细胞因子,可参与机体的免疫反应并调节细胞分化和生长,在机体感染过程中发挥重要作用[19]｡为探索HPV感染患者INF-γ､IL-2､IL-4和IL-10水平变化,本研究检测结果显示,子宫内膜癌患者HPV感染组INF-γ､IL-2､IL-4和IL-10水平均高于非HPV感染组,差异有统计学意义(t=180.820､32.581､8.649､13.053､5.902､10.607,均P<0.001)｡这主要是由于肿瘤细胞的转化进程受炎症等多种因素的共同调控,而细胞因子在肿瘤细胞转化过程中作为介导“炎-癌转化”的信号分子,在肿瘤的发生与发展过程中发挥着重要作用｡INF-γ､IL-2､IL-4､IL-10等炎症因子可由Th1细胞分泌,当机体免疫功能异常时,Th1过表达导致INF-γ､IL-2､IL-4､IL-10等分泌紊乱,促进癌细胞的发生发展[20]｡本研究结果显示,子宫内膜癌患者HPV感染与HE4和Th1/Th2水平之间均呈现正相关,提示HE4､Th1/Th2可能共同参与疾病的发生发展｡临床可根据患者血液中HE4､Th1/Th2水平对HPV感染的子宫内膜癌进行诊断[21]｡

综上所述,子宫内膜癌患者HPV16型､HPV52型感染率较高,HPV感染与疾病分化程度､肌层浸润深度､淋巴结转移､临床分级､病理类型等因素相关,与HE4､INF-γ､IL-2､IL-4和IL-10水平呈正相关｡临床上应加强对HPV感染的筛查和早期治疗｡本研究的局限之处:①未对免疫细胞进行全面的检测,今后应进一步就HPV感染引起子宫内膜癌的分子机制进行探究;②本研究为单中心样本研究,未设置健康对照组,结果可能存在局限性｡

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基金资助:2022年度河北省医学科学研究课题(20220220);

文章来源:朱秀军,陈燕,白惠,等.子宫病变患者HPV感染情况及影响因素分析[J].医学动物防制,2025,41(07):719-723.