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宫颈HPV E6/E7 mRNA表达与阴道菌群失调的相关性

2024-10-16 118 上传者：管理员

摘要：目的探讨宫颈HPV E6/E7 mRNA表达与阴道菌群失调之间的相关性。方法回顾性分析2021年9月—2022年9月无锡市妇幼保健院妇科门诊初筛的HPV E6/E7 mRNA阳性患者122例（E6/E7阳性组）和HPV E6/E7 mRNA阴性患者109例（E6/E7阴性组）的临床资料。所有患者进行HPV分型检测、阴道镜宫颈组织活检、阴道微生态检测及评价。结果 E6/E7 mRNA阳性组体质量指数（BMI）明显高于E6/E7 mRNA阴性组[（24.97±3.54）kg/m2vs.（23.91±2.96）kg/m2],差异有统计学意义（t=2.441,P<0.05）。E6/E7 mRNA阳性组低度宫颈上皮内瘤变（LSIL）比例（37.7%）最多，E6/E7 mRNA阴性组未见明显上皮内病变或恶性病变（NILM）比例（47.7%）最多，两组阴道镜活检病理结果分布情况比较，差异有统计学意义（χ2=59.588,P<0.05）。两组阴道分泌物可见白细胞数量分布情况比较，差异有统计学意义（P<0.05）。E6/E7 mRNA阳性组阴道菌群失调比例（25.4%vs.13.8%）和Nugent评分[（1.705±2.570）分vs.（1.083±1.968）分]均明显高于E6/E7 mRNA阴性组，差异均有统计学意义（χ2=4.195,P<0.05;t=2.078,P<0.05）。偏相关分析结果提示，Nugent评分与HPV E6/E7 mRNA阳性呈正相关关系(r校正年龄=0.128,P校正年龄<0.05;r校正BMI=0.150,P校正BMI<0.05;r校正年龄×BMI=0.144,P校正年龄×BMI<0.05)。多因素logistic回归分析结果提示，BMI（OR=1.114）和阴道菌群失调（OR=1.706）均是HPV E6/E7 mRNA阳性的独立危险因素（均P<0.05）。结论 E6/E7 mRNA阳性患者阴道菌群失调比例明显升高，BMI和阴道菌群失调是HPV E6/E7 mRNA阳性的独立危险因素。

关键词：
HPV
宫颈HPV E6/E7 mRNA
宫颈癌变
阴道微生态
阴道菌群
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感染HPV是诱发女性宫颈上皮内瘤变甚至宫颈癌变的主要因素。不同分型HPV病毒的致病力存在差异，其中HPV 16和18型为致病力最强且最为常见的高危型HPV分型[1-2]。HPV E6/E7 mRNA是HPV癌基因表达的直接产物，其通过泛素-介导途径启动抑瘤蛋白P53的降解而阻断细胞的凋亡程序，使细胞永生化，并可抑制肿瘤抑制因子pRB活性导致细胞周期缩短而过度增殖等，主导宫颈细胞病变过程[3-4]。因此，进行HPV E6/E7 mRNA筛查可有效评估HPV致癌基因的活动性。呈弱酸性的阴道内菌群环境为宫颈细胞抵御病毒侵害提供了屏障保护作用。但当阴道内菌群失调，乳杆菌受抑制后可导致阴道内黏蛋白降解酶增加，从而破坏宫颈和阴道的免疫功能，减弱宫颈和阴道黏膜的屏障作用，为HPV病毒粘附宫颈、阴道细胞创造条件[5]。因此，宫颈细胞对HPV的易感性及对HPV的清除效力均可能与阴道内菌群弱酸性环境密切相关，阴道菌群失调可能会影响HPV E6/E7 mRNA感染及感染后转阴，但相关分析报道鲜见。本研究通过探讨宫颈HPV E6/E7 mRNA表达与阴道菌群的相关性，进一步了解影响HPV E6/E7 mRNA感染的转归因素，为精准筛查HPV E6/E7 mRNA持续感染人群等提供临床参考。

1、资料与方法

1.1 资料来源

回顾性分析2021年9月—2022年9月无锡市妇幼保健院妇科门诊初筛的HPV E6/E7 mRNA阳性患者122例(E6/E7阳性组)和HPV E6/E7 mRNA阴性患者109例(E6/E7阴性组)的临床资料。纳入标准：①年龄20～50岁；②宫颈组织细胞学提示未见明显上皮内病变或恶性病变(NILM)、非典型鳞状上皮细胞(ASCUS) 、炎性良性反应性改变及低度宫颈上皮内瘤变(LSIL);③既往无HPV感染或治疗史；④避开月经期取样，48 h内无性生活。排除标准：①既往有宫颈手术史；②妊娠期、哺乳期女性；③合并其他恶性肿瘤；④存在生殖道感染的临床表现，或入组前1周存在抗生素治疗史；⑤阴道镜检查前1周内接受过阴道局部栓剂、药物盥洗等相关处置。本研究获得医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 一般资料收集

收集所有纳入患者的一般情况，包括筛查年龄、初次性生活年龄、生育数量、性伴数量及体质量指数(BMI)等。

1.2.2 HPV分型检测

对HPV E6/E7 mRNA感染者行HPV分型检测，以专用毛刷取标本后将毛刷充分散开置入保存液中，送至本院病理科进行检测HPV分型检测。

1.2.3 阴道镜宫颈组织活检 HPV E6/E7

mRNA阳性患者在阴道镜图像异常区多点取活检(无异常区则于3、6、9、12点取活检),若为Ⅲ型转化区同时行宫颈管搔刮。

1.2.4 阴道微生态检测和评价

使用无菌棉式子涂取阴道侧壁上1/3处分泌物，涂片行革兰染色观察阴道微生态状况，检测pH值并记录。阴道微生态评价参考中华医学会妇产科学分会感染性疾病协作组指定的《阴道微生态评价的临床应用专家共识》(2016版)[6],满足以下条件可诊断阴道微生态正常，包括阴道菌群密集度Ⅱ～Ⅲ级，菌群多样性Ⅱ～Ⅲ级，优势菌为革兰阳性大杆菌(形态类似乳杆菌),阴道pH值3.8～4.5。阴道菌群失调包括细菌性阴道病(BV)型菌群异常，非BV型菌群异常和需氧菌性阴道炎(AV)型菌群异常[6]。其中，阴道菌群中优势菌为非革兰阳性大杆菌，Nugent评分为4～10分，则诊断为BV型菌群异常；阴道菌群中优势菌为非革兰阳性大杆菌，Nugent评分为0～3分，则诊断为非BV型菌群异常。阴道分泌物显微镜下Donders评分≥3分，并有临床症状即诊断为AV型菌群异常。阴道乳杆菌分级依据Hay-Ison评分[4],具体包括Ⅰ级：镜下见大量不同形态乳杆菌，无其他细菌；Ⅱa级：镜下存在主要为乳杆菌的各种不同菌群；Ⅱb级：镜下分泌物中各种不同的菌群明显多于乳杆菌；Ⅲ级：乳杆菌严重减少或消失，其他细菌过度增加，其中Ⅰ～Ⅱa级为正常，Ⅱb～Ⅲ级为异常。

1.3 统计学分析

运用SPSS 24.0软件对数据进行统计学分析，以

表示计量数据、[例(%)]表示计数数据，计量数据、计数数据比较分别采用t检验和χ2检验。通过Spearman相关性分析比较不同参数与HPV E6/E7 mRNA阳性之间的相关性。进一步通过偏相关分析，分别校正年龄、BMI及年龄×BMI。首先通过单因素logistic回归分析比较不同指标与HPV E6/E7 mRNA阳性的关系，根据结果，选择阳性指标，校正年龄，进行多因素logistic回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1 两组一般临床资料比较

E6/E7 mRNA阳性组BMI水平明显高于E6/E7 mRNA阴性组，E6/E7 mRNA阳性组LSIL比例最多，E6/E7 mRNA阴性组NILM比例最多，差异均有统计学意义(均P<0.05)。两组筛查年龄、初次性生活年龄、生育数量及性伴侣数量等方面比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。E6/E7 mRNA阳性组中HPV 16或18阳性患者25例(44.64%),仅有其他HPV亚型患者23例(41.07%)。见表1。

表1两组一般临床资料比较

2.2 两组患者阴道微生态结果比较

两组阴道分泌物可见白细胞数量分布比较，差异有统计学意义(P<0.05)。E6/E7 mRNA阳性组阴道菌群失调比例和Nugent评分均明显高于E6/E7 mRNA阴性组，差异均有统计学意义(均P<0.05)。两组患者阴道微生态结果比较见表2。

2.3 偏相关分析

通过Spearman相关性分析比较不同参数与HPV E6/E7 mRNA阳性之间的相关程度，结果显示与HPV E6/E7 mRNA阳性的相关性前3位的是白带白细胞分级、白带清洁度分级及阴道菌群失调(均P<0.05)。进一步通过偏相关分析，分别校正年龄、BMI及年龄×BMI后，相关性前3位的是依然是白带白细胞分级、白带清洁度分级及阴道菌群失调。此外，经过年龄、BMI和年龄×BMI校正后，Nugent评分与HPV E6/E7 mRNA阳性的相关性逐步提高且差异均有统计学意义(均P<0.05)。见表3。

2.4 单因素和多因素logistic回归分析

首先通过单因素logistic回归分析发现BMI、阴道分泌物白细胞(+++和++++)、清洁度(Ⅲ)、阴道菌群失调和Nugent评分对于HPV E6/E7 mRNA阳性的OR值差异均有统计学意义(均P<0.05)。进一步通过多因素logistic回归分析可见，校正年龄后，BMI和阴道菌群失调均是HPV E6/E7 mRNA阳性的独立危险因素(均P<0.05)。见表4。

表2两组患者阴道微生态结果比较[例

表4单因素和多因素logistic回归分析

3、讨论

宫颈癌居全球女性癌症发病率第4位，85%以上新发和死亡病例出现在发展中国家[7-8]。1989年Keerti Shah发现99.7%的宫颈癌与HPV感染有关，证实宫颈癌与HPV感染具有直接关系[9]。WHO指出，高危型HPV的持续性感染是宫颈癌的主要病因，HPV16、18的近期和远期风险均高于其他高危HPV型别[10],而HPV的感染与阴道局部菌群环境密切相关。

阴道菌群平衡为宫颈和阴道细胞抵御病毒感染提供了天然屏障。因此，部分HPV感染患者可依靠自身免疫力清除，但HPV16和HPV18致病性较强。当检测HPV E6/E7 mRNA为阳性时，提示HPV病毒已经与宫颈细胞整合[11]。因此，E6/E7 mRNA是HPV致癌基因活跃状态的指标。本研究发现，E6/E7 mRNA阳性组BMI水平明显高于E6/E7 mRNA阴性组，E6/E7 mRNA阳性组LSIL比例最多，E6/E7 mRNA阴性组NILM比例最多，两组阴道镜活检病理结果分布存在明显差异。关于HPV E6/E7 mRNA与体质量之间的相关性研究报道较少。国外的相关研究[12]发现，在感染HPV16方面，肥胖患者比正常体质量患者的感染风险升高约2.4倍。

女性阴道内具有一个复杂而动态变化的微生态体系，阴道菌群是维持该生态体系的关键内容。关于阴道菌群与宫颈病变的关系已有相关报道，但是研究结论依然存在争议。有研究[13-14]认为宫颈病变与阴道菌群多样性增加和乳酸杆菌减少有关。但也有研究[15]提示阴道菌群多样性增加与HSIL无明显相关性。本研究认为阴道菌群影响不同分型的HPV感染，可能是阴道微环境影响宫颈病变的一个重要途径。本研究发现E6/E7 mRNA阳性组阴道菌群失调比例和Nugent评分明显高于E6/E7 mRNA阴性组。生殖道自下而上均存在菌群，其具有相互转化的关系。有研究[16]发现下生殖道菌群(子宫颈菌群)的多样性明显高于上生殖道(阴道菌群),高危型HPV感染者存在明显的子宫颈菌群变化，这种菌群变化可能是导致高危型HPV感染相关的因素之一。但是，由于条件和感染分析角度，下生殖道菌群检测风险和难度更大，不利于临床开展。

由于宫颈直接暴露在阴道，因此阴道内环境对于宫颈的影响最大。当阴道菌群失调时，其内环境平衡被破坏，造成宫颈自身免疫保护机制紊乱，为HPV感染创造机会。本研究发现经过年龄、BMI及年龄×BMI校正后，Nugent评分与HPV E6/E7 mRNA阳性的相关性逐步提高且差异有统计学意义。通过单因素和多因素logistic回归分析可见 BMI和阴道菌群失调是HPV E6/E7 mRNA阳性的独立危险因素。有研究[17]发现中老年慢性宫颈炎伴HPV感染的患者多合并阴道菌群紊乱和微生态失调，而出现阴道菌群紊乱的患者阴道内慢性炎症反应更为严重，高危HPV感染比例更高。本研究观察患者以中青年为主，观察人群为高危HPV E6/E7 mRNA感染患者，进一步证实阴道菌群与HPV感染有关系。

综上所述，E6/E7 mRNA阳性患者阴道菌群失调比例明显升高，BMI和阴道菌群失调是HPV E6/E7 mRNA阳性的独立危险因素。

参考文献:

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