宫颈癌作为临床常见妇科生殖系统恶性肿瘤之一,其发病率､死亡率较高,近年其发病趋势向年轻化群体发展,对女性生命健康安全造成严重威胁｡据相关研究[1-2]指出,宫颈癌的发病全过程较为复杂化,多认为宫颈癌的发生发展与机体内基因､分子等水平的高低变化具有紧密关系｡而机体内的淋巴管道途径,是肿瘤疾病恶性化发展的一种主要的转移途径[3]｡而宫颈癌患者自身情况与该疾病预后之间存在较为紧密的关联,而临床研究得出,宫颈癌患者出现淋巴结转移情况,对于患者治疗方案､生存情况等,起到较为关键性的作用[4-5]｡还有研究[6]证实,患者进行早期的检查,能够显著提升宫颈癌的治愈率,但由于该疾病在早期无较为明显的临床症状,这对早期的诊断会带来相应难度,以此加大宫颈癌患者发生淋巴结转移的概率｡CK19属于细胞角蛋白中重要成员,在机体中存在于上皮细胞内,是细胞骨架系统中的重要成分,因其自身在间叶组织中无较为显著的表达,所以已经成为临床上皮性肿瘤细胞的标志物,而CK19在正常的淋巴结中表达较低,在出现淋巴结转移情况中表达异常升高[7]｡因此,本研究通过检测CK19表达,来预测宫颈癌患者淋巴结转移的临床价值｡

1、资料与方法

1.1资料来源收集2021年4月—2022年4月岱山县第一人民医院收治的宫颈癌患者60例,所选取患者均接受手术以及淋巴结清扫治疗,术后经病理学证实,其中30例患者出现淋巴结转移情况,分为转移组,其余30例分为未转移组｡所纳入患者年龄35~71岁,平均年龄(57.45±3.49)岁,体质量指数(BMI)20~24kg/m2,平均BMI(22.45±1.57)kg/m2,对患者进行临床分期,其中ⅠB1+ⅡA1患者25例,ⅠB2+ⅡA2患者35例;高分化患者34例,中､低分化患者26例;存在脉管浸润患者36例,不存在脉管浸润患者24例,以上一般资料比较差异均无统计学意义(均P>0.05),具有可比性｡纳入标准:①符合中国抗癌协会对宫颈癌的诊断标准[8];②患者自身不存在手术禁忌证;③心､肝､肾功能均为正常者;④既往未进行过相关手术者;⑤所纳入患者及家属均知晓本研究,并签署知情同意书｡排除标准:①合并其他妇科疾病者;②术前进行过相关放化疗治疗者;③既往存在其他肿瘤疾病者;④自身依从性较差者;⑤临床资料不齐全者｡

1.2方法

1.2.1CK19表达检测受试者于清晨空腹并坐位抽取静脉血5ml,采用RT-PCR法测定CK19表达量,采用CK19提取分离试剂盒(上海信裕生物科技有限公司)提取血液内RNA,用RTFQ-PCR试剂盒进行反转录反应,将cDNA,产物进行PCR扩增｡条件参数为预火95℃预变性10n,取出降温至85℃,变性5s,迅速降温至60℃,退火15s,温度保持50℃,延伸45s,35个循环,重复试验3次｡内参GAPDH上游引物:5'-GTCAAGGCTGAGAACGGGAA-3',下游引物:5'-AAATGAGCCCCAGCCTTCTC-3';CK19上游引物:5'-AACGGCGAGCTAGAGGTGA-3',下游引物:5'-GGATGGTCGTGTAGTAGTGGC-3'｡以GAPDH为内参,采用2-ΔΔCt方法计算CK19相对表达量｡

1.2.2临床相关指标水平检测采用电化学发光免疫法检测AFP､CEA､CA199､CA125及CK19水平｡置于非抗凝试管中,静置30min,3000r/min离心10min,分离出血清可于-20℃冰箱保存､待检｡仪器选用德国罗氏公司生产的Elecsys170电化学发光免疫分析仪｡试剂为德国罗氏公司提供｡严格按照说明书操作,由检验科专业人员完成｡计算出AFP､CEA､CA199､CA125及CK19水平｡

1.2.3不良事件和临床转归记录患者住院期间不良事件发生情况及临床转归,包括尿潴留､最高KPS评分住院时间等情况｡

1.3统计学分析采用SPSS25.0软件进行数据分析｡计量资料采用Shapiro-Wilk检验判断,符合正态分布以(x±s)表示,组间两两对比采用独立样本t检验,不符合正态分布以中位数[M(P25,P75)]表示,组间比较采用秩和检验,计数资料以[例(%)]表示,数据组间比较采用χ2检验｡采用受试者特征曲线(ROC)分析CK19对宫颈癌淋巴结转移患者的预测价值,采用柱状图分析CK19与淋巴结转移的发生频数的相关性,以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1临床一般资料情况两组患者年龄､病理类型､临床分期､分化程度及肿瘤直径情况比较差异无统计学意义(P>0.05),与未转移组相比,转移组存在脉管浸润情况的例数较多,并且AFP､CEA､CA199､CA125及CK19表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)｡见表1｡

表1两组一般资料情况[M(P25,P75),例(%)]

2.2两组患者不良事件及临床转归比较与非转移组对比,转移组患者尿潴留例数呈现升高趋势;最高KPS评分则降低,住院时间则升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)｡两组患者不良事件及临床转归比较见表2｡

表2两组患者不良事件及临床转归比较[例(%),M(P25,P75)]

2.3宫颈癌淋巴结转移的多因素logistic回归分析以宫颈癌患者是否发生淋巴结转移作为因变量(0=否,1=是),其中病理类型､临床分期､分化程度､肿瘤直径､脉管浸润､AFP､CEA､CA199､CA125､CK19为自变量,建立logistic回归模型,并对其年龄等混杂因素进行校正,最终显示CA199(OR=1.426,95%CI:1.212~1.723)､CA125(OR=1.389,95%CI:1.146~1.663)､CK19(OR=1.565,95%CI:1.212~1.995)是宫颈癌淋巴结转移患者的独立危险因素｡宫颈癌淋巴结转移的多因素logistic回归分析见表3｡

表3宫颈癌淋巴结转移的多因素logistic回归分析

2.4各独立因素对宫颈癌淋巴结转移的预测价值分析ROC分析CA199､CA125及CK19预测宫颈癌淋巴结转移的曲线下面积(AUC)分别为0.811(95%CI:0.693~0.928,P<0.05)､0.789(95%CI:0.664~0.915,P<0.05)､0.899(95%CI:0.798~0.999,P<0.05)｡见表4､图1｡

表4各独立因素对宫颈癌淋巴结转移的预测价值分析(x±s)

图1各独立因素对宫颈癌淋巴结转移的ROC曲线分析

2.5CK19对宫颈癌淋巴结转移的预测价值分析ROC分析CK19预测宫颈癌淋巴结转移的灵敏度为86.67%,特异度为66.67%,曲线下面积(AUC)为0.899(95%CI:0.798~0.999,P<0.05)｡见图2｡

图2CK19对宫颈癌淋巴结转移的ROC曲线分析

2.6CK19与宫颈癌淋巴结转移的相关性分析CK19水平行四分位数分组,Q1组为0.76~1.46ng/ml,Q2组为1.47~2.12mg/L,Q3组为2.15~2.67mg/L,Q4组为2.67~3.22mg/L,通过绘制柱状图发现CK19与宫颈癌淋巴结转移的发生频数之间呈正相关关系｡

3、讨论

宫颈癌在女性群体中属于高发频率的恶性肿瘤,发病率和死亡率较高,且每年呈现递增趋势｡近几年开始趋于年轻化方向发展,对女性生命健康造成严重威胁[9-10]｡而临床中宫颈癌疾病的转移情况仍然是治疗宫颈癌的难点之一[11]｡据临床相关研究[12]表明,如果宫颈癌患者为ⅠB-ⅡA期患者,并且不在转移的情况,则患者后续的5年生存率会高达到92%左右｡而当ⅠB-ⅡA期患者出现转移情况,则患者后续的5年生存率会直线下降至45%左右｡而导致宫颈癌患者出现转移情况,其最主要的转移途径就是淋巴结转移[13]｡而临床经过研究[14]还得出,在对未出现淋巴结转移的患者进行手术治疗后,其术后也会较大概率的复发和转移｡通过这一点可以说明,当下临床现存的如:超声､CT､病理学检查等手段,不能够较为精准地对宫颈癌患者出现淋巴结转移情况的检查[15]｡于此,构建灵敏度､特异度较高的检测手段,对于宫颈癌的检查,具有显著的临床推动意义,从而显著减少淋巴结转移情况,改善患者预后[16]｡因此,本文旨在研究CK19在宫颈癌患者淋巴结转移中的表达及意义｡

CK19属于细胞角蛋白家族中重要成员之一,CK19均只存在于机体的上皮细胞以及起源的肿瘤细胞内[17]｡CK19是对上皮细胞进行包绕,因其自身在间叶组织中无较为显著的表达,所以已经成为临床上皮性肿瘤细胞的标志物,而CK19在正常的淋巴结中表达较低,在出现淋巴结转移情况中表达异常升高[18-19]｡而CK19在肝癌､乳腺癌以及肠癌等多种肿瘤疾病中均进行参与,并且与转移及预后情况之间具有一定相关性[20-22]｡据相关研究[23]发现,CK19在宫颈癌淋巴结转移患者体内呈显著异常升高状态,并与该疾病的病情严重程度之间具有较为密切的关联,CK19可以作为宫颈癌淋巴结转移的诊断指标之一｡还有研究[24-25]指出,CK19在宫颈癌前哨淋巴结转移中,呈现出异常高表达,而出现CK19高表达的宫颈癌患者,其发生淋巴结转移的患者占多数,因此得出,CK19与淋巴结转移之间可能存在较为紧密的关联｡本研究应用RT-PCR法检测30例宫颈癌患者淋巴结转移及30例未出现淋巴结转移患者CK19表达的情况,RT-PCR法在临床中被认为是最敏感的检测手段,是因为该检测手段能够使酶体外在其肿瘤细胞的DNA内进行大量扩增｡肿瘤细胞中DNA研究结果提示宫颈癌患者淋巴结转移及未出现淋巴结转移患者中均可表达CK19,但宫颈癌患者淋巴结转移中CK19含量明显高于非淋巴结转移患者,提示CK19表达含量可用于评估宫颈癌患者淋巴结转移的发病风险｡

本文通过ROC发现,CK19诊断宫颈癌淋巴结转移的灵敏度为86.67%,表明CK19表达升高与宫颈癌淋巴结转移的发生风险相关｡且柱状图显示,CK19与宫颈癌淋巴结转移的发生频数成正相关｡但本文纳入样本较少,后续需多中心､大样本的进行研究｡

综上所述,CK19在宫颈癌淋巴结转移中表达异常,其表达水平的是宫颈癌患者淋巴结转移的风险预测因子,为临床宫颈癌淋巴结转移早期诊断提供临床依据｡

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基金资助:浙江省自然科学基金项目(LQ19H160028);

文章来源:孙佳男,蒋沛月,孙玉敏.细胞角蛋白19表达预测宫颈癌患者淋巴结转移的价值[J].中国妇幼保健,2025,40(10):1870-1874.