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宫安丽多基因甲基化检测在宫颈癌中的价值

2021-01-07 517 上传者：管理员

摘要：目的：探究宫安丽多基因甲基化检测在宫颈癌筛查风险分层管理中的价值。方法：选取2019年5月—2020年2月核工业四一六医院妇科门诊及住院部200例宫颈病变高风险患者为研究对象,收集患者宫颈脱落细胞标本,采用宫安丽多基因甲基化检测试剂盒检测,并以阴道镜宫颈活检病理结果作为金标准。记录金标准检出宫颈癌、宫颈高级别鳞状上皮内病变(HSIL)、宫颈低级别鳞状上皮内病变(LSIL)、正常/炎症情况。并将宫颈癌、HSIL患者纳入阳性组,LSIL、正常/炎症患者纳入阴性组;比较宫安丽多基因甲基化检测试剂盒检测结果与金标准的差异,评估宫安丽多基因甲基化检测试剂盒的应用价值。结果：200例宫颈病变高风险患者中宫颈癌患者72例(36.00%),HSIL患者69例(34.50%),共141例(70.50%)纳入阳性组;LSIL患者25例(12.50%),正常/炎症者34例(17.00%),共59例(29.50%)纳入阴性组。宫安丽多基因甲基化检测试剂盒将3例LSIL患者及2例正常/炎症者判断为阳性,造成5例假阳性,其他均判断准确;准确率97.50%,灵敏度100.00%,特异度91.53%,阳性预测值96.58%,阴性预测值100.00%,Kappa系数0.938,与金标准一致性极强。结论：宫安丽多基因甲基化检测试剂盒可准确筛查HSIL及其以上病变者,确定癌变风险较高者,在宫颈癌筛查风险分层管理中发挥重要作用,临床应用价值较高。

关键词：
宫安丽
宫颈癌
恶性肿瘤
筛查
风险
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宫颈癌为女性生殖系统常见恶性肿瘤,具有较高的全球发病率,好发于中年女性,随着近年环境污染的加剧及生活节奏的改变,宫颈癌发病呈年轻化趋势,严重威胁女性生命健康[1]。临床研究[2]证实,人乳头状瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染与宫颈癌具有明确的病因学关系,高危型HPV(high-riskHPV,HR-HPV)的持续感染为宫颈癌及宫颈癌前病变的致病因素之一,故对HR-HPV大量筛查成为宫颈癌防控的重要措施。然而,除16型、18型临床最常见的HR-HPV亚型外,还有20多种常见HR-HPV亚型,女性人群HPV感染率为70%～80%,大部分HPV感染为无临床症状的一过性感染,可在2年内消退,仅少数HPV持续感染患者可进展为宫颈癌前病变[3]。宫颈癌自然病程是一个漫长的过程,对于早期筛查呈HR-HPV感染者,常需很长时间的随访,增加患者心理负担[4]。故有效预测宫颈病变高风险患者癌变发生情况十分必要。胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤(cytosine-phophate-guanosine,CpG)二核苷酸甲基化是一种重要的表观遗传修饰,在不改变脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)序列的同时,对基因表达模式和基因组的稳定性发挥一定调控作用,近年在宫颈癌筛查、病变进展、复发的监测中占据重要地位。宫安丽多基因甲基化检测试剂盒是一种基于表观遗传学生物标志物的检测方法,使用多基因组合通过对筛选出的6个与宫颈癌高度相关的基因标志物,利用临床大数据进行加权算法后得出检测结果,大大提高了检测的灵敏度与特异度,在欧美国家已有较好的研究数据,对于宫颈原位鳞癌检测的灵敏度可达到99%以上[5],但在国内较少报道。基于此,本研究选取该院200例宫颈病变高风险患者为研究对象,以评估宫安丽多基因甲基化检测试剂盒在宫颈癌筛查风险分层管理中的应用价值,为宫颈癌的临床筛查提供新思路。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2019年5月—2020年2月核工业四一六医院妇科门诊及住院部200例宫颈病变高风险患者为研究对象。纳入标准:①年龄21～65岁;②经宫颈薄层液基细胞学(liquidbasedcytology,TCT)和HR-HPV联合筛查有至少1项为阳性者为宫颈病变高风险者;③有性生活史;④自愿接受本研究筛查且经本院医学伦理委员会审批。排除标准:①盆腔放化疗史;②宫颈、子宫手术史;③近1周内使用抗生素治疗;④入组时处于月经期。200例宫颈病变高风险患者年龄27～56岁,平均(38.91±7.65)岁;HPV16/18阳性、TCT结果正常107例,其他型HR-HPV阳性伴TCT结果异常54例,HR-HPV阴性伴TCT结果异常28例,HR-HPV阴性、TCT结果正常但临床怀疑宫颈病变11例。

1.2方法

所有受检者在检查前3d不行阴道冲洗或阴道内用药,检查前1d无性生活,使用宫颈细胞采集专用毛刷,采集宫颈脱落细胞标本;在阴道镜下对可疑部位多点取宫颈活组织(取标本时均达一定深度),送病理科检测。记录病理检查结果,其中宫颈癌、宫颈高级别鳞状上皮内病变(high-gradesquamousintraepitheliallesion,HSIL),纳入阳性组,属于宫颈癌高风险级别;宫颈低级别鳞状上皮内病变(low-gradesquamousintraepitheliallesion,LSIL)、正常/炎症需随访,纳入阴性组,属于宫颈癌低风险级别。宫颈脱落细胞行宫安丽多基因甲基化检测试剂盒检测,试剂盒包含ASTN1、DLX1、ITGA4、RXFP3、SOX17、ZNF671共6个标记物,检测过程包括细胞裂解、重亚硫酸氢盐处理和实时荧光聚合酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR)3个步骤;细胞裂解后的DNA经重亚硫酸氢盐处理,使DNA甲基化固定,然后利用6个独立的甲基化特异性实时PCR反应分析模板DNA,选择性扩增甲基化DNA区域,使用实时荧光染料实时检测宫颈癌甲基化标记物及质控标记物;最终判读时,根据6个标记物的Ct值、Tm值及△Ct参考范围分别对各标记物评分,以综合评分≥0.5分判断为甲基化阳性。

1.3统计学方法

数据分析用SPSS19.0软件处理,计量资料以均数±标准差(x¯±s)表示;计数资料以率表示,采用χ2检验;一致性使用Kappa系数分析,将Kappa系数大小划分为6个区段,分别代表一致性强弱的程度,Kappa=0.00提示一致性极差;0.00<Kappa≤0.20,提示一致性微弱;0.20<Kappa≤0.40,提示一致性弱;0.40<Kappa≤0.60,提示一致性中度;0.60<Kappa≤0.80,一致性高度;0.80<Kappa≤1.00,提示一致性极强;检验水准α=0.05。

2、结果

2.1病理检测结果分析

200例宫颈病变高风险患者中宫颈癌患者72例(36.00%),HSIL患者69例(34.50%),共141例(70.50%)纳入阳性组;LSIL患者25例(12.50%),正常/炎症者34例(17.00%),共59例(29.50%)纳入阴性组。

2.2宫安丽多基因甲基化检测试剂盒检测结果分析

宫安丽多基因甲基化检测试剂盒将3例LSIL患者及2例正常/炎症者判断为阳性,造成5例假阳性,其他均判断准确;准确率97.50%,灵敏度100.00%,特异度91.53%,阳性预测值96.58%,阴性预测值100.00%,Kappa系数0.938,与金标准一致性极强。见表1。

表1宫安丽多基因甲基化检测试剂盒检测结果分析(例)

3、讨论

临床研究[6]发现,HPV检测较细胞学检测灵敏度更高,但特异度不高,感染者多为一过性感染,使临床阴道镜转诊率增加,存在过度诊疗等缺点。因此提高宫颈癌筛查的特异性有其必要性,以避免临床过度诊疗。目前对于病理组织学诊断宫颈高级别鳞状上皮内病变需进一步干预,对宫颈低级别鳞状上皮内病变无需临床干预,但需按时随访,检测病变进展情况,因此准确鉴别HSIL及其以上病变,是宫颈病变筛查的重要目标[7]。本研究200例宫颈病变高风险患者中,宫颈癌患者占比36.00%,宫颈高级别鳞状上皮内病变患者占比34.50%,两者占比可达70.50%,提示TCT和HR-HPV联合筛查的宫颈病变高风险者中需要给予临床干预者较多,联合筛查对宫颈病变防控有积极意义[8]。然而仍有29.50%患者无需临床干预,仅需按时随访,其中正常或炎症者占比17.00%,说明TCT和HR-HPV联合筛查的高风险患者中,有29.50%可继续采用非侵入性筛查方案,无需阴道镜转诊,避免过度诊疗。这也初步证实目前联合筛查存在阴道镜转诊率较高的缺点。故探寻筛查更精确的无创方案有其必要性。

宫安丽多基因甲基化检测试剂盒是由德国昂科公司经全基因组CpG岛微阵列筛选出与宫颈癌相关的100个候选基因的CpG甲基化位点,并利用甲基化特异性PCR法进一步验证,最后选出灵敏度、特异度高的6个宫颈癌标志物,同时利用加权算法,提高诊断准确率[9]。Schmitz等[10]也发现宫安丽多基因甲基化检测试剂盒可在组织病理学之前发现患者从前一级别到后一级别的病变,且能提前6～18个月甚至更长的时间,而在宫颈癌筛查中具有重要作用。近年该技术由国药集团上海捷诺生物科技有限公司引进,并在国内生产,现在临床开展应用。本研究也对该院200例宫颈病变高风险者应用宫安丽多基因甲基化检测试剂盒检测,结果显示宫安丽试剂盒诊断准确率为97.50%,与病理结果Kappa系数0.938,一致性极强,表明宫安丽试剂盒可利用宫颈脱落细胞标本,获得与有创检查(病理学检查)一致性较高的结果,在宫颈病变筛查中具有良好应用价值。不仅如此,本研究宫安丽多基因甲基化检测试剂盒未发现假阴性,其灵敏度与阴性预测值均为100.00%。提示宫安丽试剂盒对宫颈高级别鳞状上皮内病变阳性患者无漏诊,可准确筛查出高风险患者,以保证临床及时治疗,与外国学者研究[11]结果一致。

但本研究中宫安丽多基因甲基化检测试剂盒将3例LSIL患者及2例正常/炎症者判断为阳性,造成5例假阳性,其特异度为91.53%,明显高于李肖甫等[12]报道的HPV-16长调控区(LCR)4个E2蛋白结合位点(E2BSs)甲基化检测特异度61.1%～80.6%。提示宫安丽试剂盒也难以避免假阴性,增加阴道镜转诊率,但其特异度处于较高水平,误诊较少,应用价值仍然较高。因此对于宫安丽多基因甲基化检测试剂盒呈阳性的患者,提示高级别病变或向高级别病变的风险很大,应进一步行阴道镜病理学检查,证实宫颈病变;而检测呈阴性者,风险较低,可继续非侵入性筛查方案,避免过度诊疗,也降低受检者心理负担。

综上所述,宫安丽多基因甲基化检测试剂盒在宫颈癌筛查风险分层管理中发挥重要作用,能准确筛查宫颈高级别鳞状上皮内病变,对宫颈癌进行风险分层管理,为临床及时干预提供条件,同时在高危型HPV感染中准确诊断宫颈低级别鳞状上皮内病变者,可减少受检者恐慌情绪,于宫颈癌诊疗有积极意义。

参考文献：

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