首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 肿瘤科论文 > 宫颈癌论文 > β-catenin、LEF1在宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变中的表达及临床意义

β-catenin、LEF1在宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变中的表达及临床意义

2023-07-10 302 上传者：管理员

摘要：观察宫颈鳞状细胞癌(SCC)及鳞状上皮内病变组织中β连环蛋白(β-catenin)、淋巴增强子结合蛋白1(LEF1)的表达并探讨其临床意义。方法:选取宫颈SCC组织55例、低级别鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)组织42例、高级别鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)组织34例、正常宫颈组织21例，对上述组织进行β-catenin、LEF1免疫组化检测，分析两者在宫颈鳞状上皮病变中的表达、二者与病变的相关性及其与SCC临床病理参数的关系。结果:SCC、HSIL、LSIL、正常宫颈组织中β-catenin细胞质表达率分别为32.7%、29.4%、23.8%、4.8%,差异有统计学意义(P=0.003);在以上病变中，β-catenin细胞核表达率分别是41.8%、32.4%、28.6%、9.5%,差异有统计学意义(P=0.002);LEF1阳性率分别为69.0%、50.0%、26.2%、9.5%,差异有统计学意义(P<0.001)。β-catenin的异常表达与SCC分化程度(P=0.036)、淋巴结转移(P=0.033)相关，LEF1的表达与FIGO分期(P=0.020)及淋巴结转移(P=0.024)相关。β-catenin(rs=0.375,P<0.001)及LEF1(rs=0.443,P<0.001)的表达情况与宫颈病变发展呈正相关，β-catenin与LEF1的表达在各组病变中呈正相关(rs=0.403,P<0.001)。结论:宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变中β-catenin和LEF1蛋白异常表达，并与宫颈鳞状细胞癌的分化、淋巴结转移及FIGO分期相关。

关键词：
LEF1
β-catenin
低级别鳞状上皮内病变
宫颈鳞状细胞癌
高级别鳞状上皮内病变
加入收藏

宫颈癌在全球范围内是女性三大常见恶性肿瘤之一，每年约有529 800新增病例和275 100死亡病例[1],在我国，宫颈癌发病率和死亡率呈逐年上升趋势[2],手术切除和放疗是治疗宫颈癌的最佳选择，但是仍有30%～35%的晚期肿瘤患者治疗失败，因此寻找新的生物学治疗靶点及预后生物标志物迫在眉睫。浸润性鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)是宫颈癌最常见的组织学亚型，占浸润性癌的70%～80%。宫颈鳞状上皮病变除了SCC还包括低级别鳞状上皮内病变(low grade squamous intraepithelial lesion, LSIL)和高级别鳞状上皮内病变(high grade squamous intraepithelial lesion, HSIL)[3],绝大部分宫颈SCC由HSIL发展而来。SCC病因复杂，分子学、临床及流行病学研究发现高危型人类乳头状瘤病毒(HPV)的持续感染是导致宫颈癌的主要危险因素[4,5]。有研究表明，β-catenin促进了高危型HPV16在转基因小鼠中的致癌作用[6],此外感染了高危型HPV的鳞状上皮细胞通过激活Wnt信号通路进行细胞无限增殖[7],当经典型Wnt/β-catenin信号激活时，去磷酸化的(活化型)β-catenin在胞浆内异常蓄积并进入细胞核，与细胞核内的LEF/TCF(淋巴细胞增强因子/T细胞因子)转录因子结合，进而促进下游靶基因的转录。已有研究证实，Wnt/β-catenin信号通路在乳腺癌[8]、结肠癌[9]、恶性黑色素瘤[10]等肿瘤中被异常激活，并与疾病预后不良相关。目前，Wnt/β-catenin信号通路在宫颈鳞状上皮病变中的具体作用机制尚不清楚，需要进一步研究。本实验采用免疫组化方法对Wnt信号通路的核心蛋白β-catenin、转录因子LEF1在宫颈鳞状上皮病变中的表达进行了检测，探讨β-catenin及LEF1在SCC、LSIL、HSIL中的表达变化及其临床应用价值，为宫颈癌的治疗提供新依据。

1、资料与方法

1.1临床资料

收集2020年1月-2022年1月我院病理科宫颈鳞状细胞癌标本55例，均为根治性手术切除标本；年龄≤60岁21例，>60岁34例；肿瘤直径≤5 cm者41例，>5 cm 14例；FIGO Ia期12例，FIGO Ib期29例，FIGO IIa期14例；伴淋巴结转移22例，无淋巴结转移33例；组织学高-中分化26例，低分化29例。LSIL标本42例，HSIL标本34例，正常宫颈组织21例。纳入标准：(1)所有病例均经2名高年资病理医生采用双盲法阅片，以病理结果作为诊断依据；(2)所有患者均未接受过放疗、化疗及生物免疫治疗。排除标准：(1)合并其它恶性肿瘤性疾病；(2)合并重度器官功能衰竭。本研究获得医院伦理委员会批准。

1.2方法

本实验采用SP免疫组织化学染色方法[11],所有手术或活检标本固定于10%中性福马林溶液，经梯度酒精脱水、石蜡包埋以后，由组织切片机制成3～4μm厚的组织学切片，接下来的操作在瑞士罗氏全自动多功能组织病理检测Benchmark XT上进行，本实验使用PBS溶液代替一抗作为阴性对照，具体实验步骤严格按试剂盒说明书进行。β-catenin鼠单克隆抗体(MX043)购自福州迈新公司，LEF1单克隆抗体(ZA-0619)购自北京中杉金桥生物技术有限公司，二抗及检测试剂盒均购自DAKO公司。根据CHENG等人的文献[12],β-catenin可表达于细胞膜、细胞质及细胞核，免疫组化判读标准是在相应位置出现棕黄色或棕褐色颗粒，当细胞膜阳性>75%为正常表达，当细胞膜表达率<75%或细胞核、细胞质表达率>10%且中等强度以上时，结果判读为异常表达；LEF1表达于细胞核，当肿瘤细胞表达率>10%且中等强度以上时，结果判读为阳性。

1.3统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行分析。采用χ2检验统计计数资料，相关性分析采用Spearman等级相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1β-catenin在宫颈SCC、LSIL、HSIL及正常宫颈组织中的表达

免疫组化结果显示，β-catenin在正常宫颈组织中呈完整的细胞膜强阳性表达，在LSIL、HSIL以及SCC中细胞膜表达强度减弱，异常表达于细胞质/细胞核，如图1所示。β-catenin在正常宫颈、LSIL、HSIL以及SCC的细胞膜表达率分别是85.7%、47.6%、38.2%、25.5%,在正常宫颈、LSIL、HSIL以及SCC的细胞质表达率分别4.8%、23.8%、29.4%、32.7%,在以上病变中的细胞核表达率分别是9.5%、28.6%、32.4%、41.8%。由此可见，在各组宫颈病变中，β-catenin的细胞膜表达率呈逐渐下降趋势，在细胞质及细胞核中表达率呈上升趋势，β-catenin细胞质与细胞膜的表达情况在各组宫颈病变中的差异具有统计学意义(χ2=13.798,P=0.003),对β-catenin在细胞核与细胞膜中的表达进行统计学分析，同样发现差异有统计学意义(χ2=14.936,P=0.002),但在各组病变中，细胞质及细胞核中β-catenin的表达无统计学意义(χ2=0.244,P=0.970),见表1。

2.2 LEF1在宫颈SCC、LSIL、HSIL及正常宫颈组织中的表达

免疫组化结果显示，LEF1蛋白表达于细胞核，在90.5%的正常宫颈组织中LEF1呈阴性表达，在LSIL、HSIL以及SCC组织中，中到强阳性表达于细胞核，阳性内对照是各切片内的淋巴细胞，如图2所示。LEF1在正常宫颈、LSIL、HSIL以及SCC的阳性率分别是9.5%、26.2%、50.0%、69.0%,见表2。在各组宫颈病变中，LEF1的阳性率随着疾病进展呈上升趋势，差异有统计学意义(χ2=29.952,P<0.001)。

2.3β-catenin及LEF-1的表达与宫颈SCC临床病理参数的关系

免疫组化研究发现：β-catenin异常表达与宫颈SCC的组织学分化(χ2=4.396,P=0.036)、淋巴结转移(χ2=4.56,P=0.033)相关，而与患者年龄(χ2=0.174,P=0.677)、肿瘤直径(χ2=3.319, P=0.068)、FIGO分期(χ2=0.059 3,P=0.764)无关。LEF1阳性表达与宫颈SCC的FIGO分期(χ2=7.805,P=0.02)、淋巴结转移(χ2=5.123,P=0.024)相关，而与患者年龄(χ2=0.821,P=0.365)、肿瘤直径(χ2=0.79,P=0.374)、组织分化程度(χ2=0.317,P=0.573)无关，见表3。

图1β-catenin在宫颈病变中的免疫组化结果(SP×400)

A:β-catenin强阳性表达于正常宫颈鳞状上皮细胞膜；B:LSIL病变中，β-catenin细胞膜表达强度减弱，部分表达于细胞质及细胞核；C:HSIL病变中，β-catenin细胞膜表达强度减弱，部分表达于细胞质；D:SCC中，β-catenin表达于细胞质及细胞核。

表1β-catenin在各组宫颈病变中的表达

图2 LEF1在宫颈病变中的免疫组化结果(SP×400)

Fig.2 Immunohistochemical results of LEF1 in cervical lesions(SP×400)

A:LEF1在正常宫颈鳞状上皮中呈阴性表达；B:LSIL病变位于宫颈上皮的下1/3处，病变处细胞核LEF1呈强阳性表达；C:HSIL病变位于宫颈上皮下2/3或近全层，病变处细胞核LEF1呈强阳性表达；D:LEF1在SCC中呈弥漫性细胞核中-强表达。

表2 LEF1在各组宫颈病变中的表达

2.4β-catenin与LEF-1的表达与宫颈SCC、LSIL及HSIL的相关性分析

分别以β-catenin(正常表达=0、异常表达=1)和LEF-1(阴性=0、阳性=1)表达情况为因变量，分析其与宫颈病变(正常=0、LSIL=1、HSIL=2、SCC=3)的相关性，结果表明，β-catenin(rs=0.375,P<0.001)及LEF1(rs=0.443,P<0.001)的表达情况与宫颈病变发展呈正相关。进一步分析了β-catenin及LEF-1在各组宫颈病变的相关性，结果显示，β-catenin的异常表达与LEF-1表达呈正相关(rs=0.403,P<0.001)。

3、讨论

本实验探讨了β-catenin、LEF1在宫颈SCC、LSIL及HSIL中的表达，分析了β-catenin、LEF1的表达与宫颈SCC临床病理参数的关系，同时进行了β-catenin、LEF1与上述宫颈病变的相关性分析。结果显示β-catenin及LEF1在SCC及其癌前病变中异常表达。LIANG[13]等人对172例宫颈鳞状细胞癌进行了免疫组化分析，与癌前病变及正常宫颈上皮相比，β-catenin在宫颈鳞状细胞癌中表达上调，异常蓄积于细胞质内，本研究与这一实验结果相一致，本组55例SCC中，β-catenin细胞质表达率为32.7%(18/55 ),细胞核表达率为41.8%(23/55),在LSIL及HSIL中细胞膜表达率分别为23.8%(10/42)、29.4%(10/34),细胞核表达率分别为28.6%(12/42)、32.4%(11/34),而正常宫颈中β-catenin细胞质和细胞核表达率仅有4.8%(1/21)和9.5%(2/21)。β-catenin作为Wnt信号通路的关键蛋白，其在细胞质的浓度直接影响Wnt信号通路的开放或关闭，本研究结果表明，β-catenin在宫颈癌前病变和鳞癌中细胞质及细胞核表达率呈逐渐上升趋势，由此推断β-catenin在癌前病变发展到SCC的过程中起着不可忽视的促进作用。同时，这一实验结果也提示β-catenin具有作为临床病理诊断标志物的可能。

表3β-catenin、LEF-1表达与SCC临床病理参数的关系n(%)

LEF1是T细胞因子(TCF)/LEF家族转录因子中的一员，通过结合DNA调控序列和调节转录复合体来激活或抑制基因转录的一种调控蛋白，LEF1是Wnt/β-catenin信号通路的下游中介，在Wnt/β-catenin信号通路中发挥核效应因子作用，但它也可以独立调节基因转录。LEF1在干细胞维持和器官发育中至关重要，特别是通过激活标志性EMT效应子(包括N-Cadherin、Vimentin和Snail)的转录，在上皮-间充质转化(EMT)中发挥作用。LEF1的异常表达与肿瘤的发生、癌细胞的增殖、迁移和侵袭有关。LEF1在膀胱癌[14]、结肠癌[15]、前列腺[16]、慢性淋巴细胞白血病(CLL)[17]等肿瘤中表达增高，在本实验的55例SCC中，LEF1阳性率为69%(38/55),LSIL及HSIL的阳性率分别为26.2%(11/42)、50%(17/34),显著高于正常宫颈黏膜，以上结果提示β-catenin和LEF1可能在宫颈鳞癌的发生发展中发挥了一定作用，LEF1结合β-catenin具有成为宫颈SCC及上皮内病变病理诊断标志物的可能，但二者在宫颈SCC发病机制中的具体作用仍需进一步研究和探索。现阶段LEF1免疫组化染色用于CLL病理诊断已广泛应用于临床，在成熟B细胞中，LEF1的表达通常是失活的，但与正常B细胞相比，CLL过表达LEF1[17]。

β-catenin、LEF1的异常表达和其促癌作用在其他癌症中也得到证实，但在不同肿瘤中β-catenin、LEF1与肿瘤临床病理参数的相关性具有差异。杨大磊等[18]研究表明β-catenin细胞质内异位表达与肺癌的中低分化和淋巴结转移相关，而与TNM分期无关；郑炎等[19]人实验发现β-catenin异常表达与乳腺癌的临床分期、淋巴结转移相关；LEF1在食管鳞癌[20]中与肿瘤分化和浸润深度有关，与肿瘤大小和淋巴结转移无关；本实验β-catenin的异常表达与SCC的患者年龄、肿瘤大小、FIGO分期无明显相关性，但在组织学分化和淋巴结转移方面存在显著相关性；LEF1的高表达与SCC的FIGO分期和淋巴结转移有显著关联，国内也有学者在宫颈癌的研究中获得类似结果[21]。以上结果提示β-catenin、LEF1的异常表达与宫颈SCC不良预后相关，检测β-catenin、LEF1的表达对宫颈癌预后具有重要的预测价值。此外，针对β-catenin和LEF1复合体的抑制剂有可能成为宫颈癌的治疗靶点。LF3是一种4-硫脲基苯磺酰胺衍生物，它能有力地破坏β-catenin和转录因子LEF1在核内的结合，FANG等[22]人研究发现LF3在结肠癌小鼠移植瘤模型中抑制肿瘤生长并诱导肿瘤细胞分化。

此外，本实验采用Spearman等级相关分析发现在宫颈SCC、LSIL和HSIL病变中，β-catenin与LEF1的相对表达水平呈正相关，并且二者分别与上述疾病的发展趋势呈正相关，提示二者在宫颈SCC及其癌前病变的发展过程中可能存在协同作用。在结肠癌中[23],β-catenin结合TCF1或TCF4,可以激活全长LEF1的启动子，并刺激LEF1的表达，进而激活下游信号分子促进癌细胞增殖和侵袭，但β-catenin与LEF1在宫颈鳞状上皮病变中的相互作用关系及具体作用机制还有待进一步研究。

综上所述，宫颈鳞癌及其癌前病变中，β-catenin和LEF1表达异常，二者的异常表达与SCC的FIGO分期、淋巴结转移及肿瘤细胞分化相关，检测二者的表达有助于监测患者的预后。本研究结果可能有助于确定并开发新的宫颈癌治疗分子靶点，为治疗提供新思路。

参考文献:

[2]丁鑫,王乾印,马亮亮,等.106例宫颈癌患者术后预后生存质量调查及预后COX回归分析[J].中国妇产科临床杂志,2022,23(03):

[5]江星元,刘应南,陶霞.HPVE6/E7在宫颈病变恶性进展或宫颈癌复发中的预测作用[J].中国妇产科临床杂志,2020,21(01)97-99

文章来源:汪钊,王艳峰,关兵兵.β-catenin､LEF1在宫颈鳞状细胞癌及其癌前病变中的表达及临床意义[J].现代肿瘤医学,2023,31(16):3061-3065.