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基于抗菌肽LL-37探讨乳痈方治疗哺乳期乳腺炎的效果

2025-04-18 51 上传者：管理员

摘要：目的基于抗菌肽LL-37探讨乳痈方治疗哺乳期乳腺炎的效果｡方法选取2021年8月至2023年10月该院就诊的哺乳期乳腺炎患者50例为研究对象,根据随机信封法将其分为对照组(25例)和观察组(25例)｡对照组给予常规治疗,观察组在此基础上予以乳痈方治疗,均治疗7d｡比较两组临床疗效､安全性及治疗前后临床症状体征变化､乳汁细菌阳性率､乳汁菌群含量､乳汁抗菌肽LL-37表达｡结果观察组治疗总有效率(96.00%)与对照组(76.00%)比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组乳房肿块､乳房胀痛､乳汁欠畅､局部皮肤颜色变化及灼热评分低于对照组(P<0.05);治疗前后,两组乳汁细菌阳性率及葡萄球菌､乳酸杆菌､链球菌含量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组LL-37mRNA及LL-37蛋白水平低于对照组(P<0.05);观察组不良反应发生率(12.00%)与对照组(8.00%)比较,差异无统计学意义(P>0.05)｡结论乳痈方治疗哺乳期乳腺炎安全有效,可通过调节抗菌肽LL-37mRNA和蛋白表达,调节患者乳汁菌群平衡,从而促进患者临床症状体征改善｡

关键词：
LL-37
乳痈方
哺乳期乳腺炎
抗菌肽
疗效
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哺乳期乳腺炎是哺乳期女性常见的乳腺组织和周围结缔组织的炎症性疾病,主要由乳汁淤积和细菌感染等原因引起,多出现在产后3~4周,其典型症状包括乳房疼痛､红肿､发热､乳房硬块或乳腺脓肿,常导致患者提前回乳,因而造成母乳喂养率降低,对婴儿的健康也可能造成不良影响[1-2]｡目前,临床仍缺乏哺乳期乳腺炎的特效治疗方法,主要使用解热镇痛､消炎药物等进行对症处理,虽在一定程度上能缓解疼痛和发热等症状,但存在耐药性问题､不良反应及影响婴儿肠道菌群平衡的风险,不利于疾病治愈[3]｡既往研究发现,乳腺菌群失调是哺乳期乳腺炎的发病机制[4],而陶颖娜等[5]发现,乳痈方治疗哺乳期乳腺炎疗效显著,且对乳汁菌群具有一定调节作用｡此外,随着研究的不断进展,有学者发现人类唯一的Cathelicidins家族抗菌肽LL-37在多种感染性疾病中展现出良好的抗菌､杀菌活性,能通过电荷吸引破坏微生物的细胞膜结构,该作用在多种动物模型中已得到证实[6-8],然而其在人类哺乳期乳腺炎中的表达及影响尚未得到系统研究｡因此,本研究提出增高抗菌肽LL-37水平调控乳汁菌群平衡是乳痈方治疗哺乳期乳腺炎临床疗效的生物学基础的科学假说,拟运用乳痈方干预哺乳期乳腺炎,比较治疗前后抗菌肽LL-37在人类乳汁中的表达差异,探讨乳痈方调控抗菌肽LL-37治疗哺乳期乳腺炎的效果,旨在验证乳痈方在哺乳期乳腺炎治疗中的潜在机制,以期为提高哺乳期乳腺炎的治疗效果提供新的思路和方法｡

1､资料与方法

1.1一般资料

选取2021年8月至2023年10月本院收治的50例哺乳期乳腺炎患者｡纳入标准:(1)产后或哺乳期女性,均具有哺乳意愿;(2)符合哺乳期乳腺炎诊断标准[9];(3)处于急性期,血常规检查显示白细胞计数､中性粒细胞比例增加,需接受药物治疗者;(4)年龄20~40岁｡排除标准:(1)乳腺雷诺氏症;(2)重度乳腺炎,即乳腺脓肿形成;(3)其他乳腺病理学疾病;(4)合并心脑血管疾病;(5)合并肝肾功能障碍;(6)造血系统功能异常;(7)合并精神性疾病;(8)对本研究药物过敏;(9)具有乳腺手术史;(10)近2周有抗菌药物使用史｡根据随机信封法将所有患者分为对照组(25例)､观察组(25例),两组患者一般资料比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性,见表1｡所有受试者签署知情同意书｡本研究经本院医学伦理委员会审核批准(审批号:2021064-001)｡

表1两组临床疗效比较

1.2方法

两组均严格遵循勤哺乳､多吸吮､按需喂养的喂养原则,适当按摩､热敷乳房｡对照组采用常规治疗,给予布洛芬缓释胶囊(0.3g,云鹏医药集团有限公司,国药准字H20123416)治疗,口服,0.3克/次,2次/天;局部使用红霉素软膏(1%,安徽国森药业有限公司,国药准字H34024072),出现全身性感染时,给予阿莫西林胶囊(0.5g,四川峨嵋山药业有限公司,国药准字H20113499)治疗,口服,0.5克/次,早晚各1次,或头孢氨苄片(0.25g,黑龙江龙德药业有限公司,国药准字H23021842)治疗,口服,0.25~0.50克/次,4次/天,持续治疗7d｡观察组在对照组基础上,采用乳痈方治疗,药物组成:漏芦12g,丝瓜络12g,柴胡12g,王不留行15g,黄芩15g,路路通9g,牡丹皮12g,全瓜蒌30g,赤芍12g,橘核叶9g,蒲公英30g,皂角刺15g,栀子9g,制香附9g,由本院中药房提供,中药汤剂由雷允上药厂煎制,常规煎煮为300mL,口服,2次/甜,150毫升/次,持续治疗7d｡

1.3观察指标

1.3.1临床症状体征

比较两组治疗前后乳房肿块､乳汁欠畅､乳房胀痛､恶寒发热､乳腺局部皮肤颜色变化及灼热症状体征变化｡(1)乳房肿块:无肿块为0分,肿块长径≤2cm为1分,2cm<肿块长径≤4cm为2分,肿块长径>4cm为3分｡(2)乳汁欠畅:乳汁排出顺畅为0分,乳汁排出略显不畅为1分,乳汁排出不畅为2分,乳汁无法排出或形成淤积结块为3分｡(3)乳房胀痛:无胀痛为0分,轻微胀痛为1分,明显胀痛为2分,胀痛难忍为3分｡(4)恶寒发热:无为0分,有为1分｡(5)乳腺局部皮肤颜色变化及灼热:皮肤颜色正常､无异常热感为0分,皮肤颜色正常､轻微发热感为1分,皮肤颜色微红､有灼热感为2分｡

1.3.2临床疗效

治愈:肿块完全消散,排乳正常,症状完全消失;显效:肿块消散≥60%,排乳基本通畅,60%≤症状体征积分降低<90%;有效:肿块消散≥30%~<60%,排乳部分通畅,30%≤症状体征积分降低<60%;无效:症状体征积分降低<30%或症状加重｡总有效率=100%-无效率｡

1.3.3乳汁细菌阳性率及乳汁菌群含量测定

分别于治疗前后采集患者患侧乳汁3mL,取0.5mL采用一般细菌培养法培养细菌,剩余-80℃冻存｡计算乳汁细菌阳性率(%),阳性率=培养出细菌病例数/总病例数×100%｡采用TRIzol法提取剩余乳汁样本总RNA,逆转录为cDNA,2×实时荧光定量PCR(qPCR)SYBR®GreenMasterMix染料进行qPCR,定量检测葡萄球菌､链球菌､乳酸杆菌数量,以log10表示｡

1.3.4乳汁抗菌肽LL-37表达

参考1.3.3中方法提取乳汁总RNA,采用qPCR检测LL-37mRNA表达水平,以2-ΔΔCt计算;采用酶联免疫吸附试验检测LL-37蛋白表达水平,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(A)值,计算LL-37蛋白水平｡

1.3.5安全性

比较两组治疗期间食欲不振､恶心呕吐､肠胃胀气发生率｡

1.3.6复发率

随访1个月,统计比较两组复发率｡

1.4统计学处理

采用SPSS22.0分析数据｡计数资料以频数或百分率表示,组间比较行χ2检验,符合正态分布的计量资料以x±s表示,组间比较行t检验｡P<0.05为差异有统计学意义｡

2､结果

2.1两组临床疗效比较

两组治疗总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05),见表2｡

2.2两组治疗前后临床症状体征变化比较

治疗后,两组乳房肿块､乳房胀痛､乳汁欠畅､恶寒发热及乳腺局部皮肤颜色变化及灼热评分较治疗前均降低(P<0.05),且观察组乳房肿块､乳房胀痛､乳汁欠畅､局部皮肤颜色变化及灼热评分均低于对照组(P<0.05),见表3｡

2.3两组治疗前后乳汁细菌阳性率及菌群含量比较

治疗前后组内比较与组间比较,两组乳汁细菌阳性率及葡萄球菌､乳酸杆菌､链球菌含量差异均无统计学意义(P>0.05),见表4｡

2.4两组乳汁抗菌肽LL-37表达比较

治疗后,两组LL-37mRNA及LL-37蛋白水平较治疗前均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05),见表5｡

表2两组临床疗效比较例

表3两组治疗前后临床症状体征比较

表4两组治疗前后乳汁细菌阳性率及菌群含量比较

表5两组乳汁抗菌肽LL-37表达比较

2.5两组安全性比较两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05),见表6｡

表6两组不良反应发生率比较

3､讨论

哺乳期乳腺炎是哺乳期常见的疾病,其发生率约为33%[10]｡一方面,产妇哺乳经验不足等原因可能导致乳汁排泄不通,淤积成块,为细菌的生长提供了有利条件;另一方面,产妇长时间哺乳或婴儿反复咬含乳头等原因,可能导致其局部损伤,细菌(如金黄色葡萄球菌､链球菌等)通过损伤部位侵入乳腺组织,导致乳腺炎的发生｡天然免疫系统是机体抵抗微生物的第一道防线[11],而抗菌肽是该防线中的重要效应分子,人体抗菌肽主要分为Cathelicidin家族､Defensins家族和富含组氨酸蛋白家族三大类,Cathelicidin家族是哺乳类动物特有的抗菌肽,而LL-37是该家族在人体内的唯一成员[12]｡中性粒细胞是LL-37的主要合成部位,具有两亲性α螺旋结构,可通过电荷吸引,与细菌细胞膜结合,导致其内容物流出死亡｡动物实验结果发现,患有感染性乳腺炎的奶牛乳汁中Cathelici-din水平增加[13]｡另有研究表明,抗菌肽能抑制金黄色葡萄球菌活性,在小鼠模型中,对由金黄色葡萄球菌引起的乳腺炎表现出了良好的治疗效果[14]｡

哺乳期乳腺炎属于中医外科学的“外吹乳痈”范畴,乳头和乳房分别属厥阴肝经､阳明胃经,故凡忧思恼怒,或恣食辛辣厚味,或火热邪毒内侵,或乳房不洁,均可导致乳络闭阻,气血瘀滞,从而腐肉酿脓而成乳痹[15]｡乳痈方是在瓜蒌牛蒡汤基础上加减裁化而来,方中漏芦清热解毒､消肿排脓;路路通利水通经､祛风活络;丝瓜络通络活血;全瓜蒌宽胸散结､清热涤痰;柴胡疏肝解郁､升阳举陷;王不留行消肿下乳､通经活血;黄芩解毒泻火､燥湿清热;牡丹皮凉血清热､化瘀活血;橘核叶理气散结;蒲公英清热解毒､消肿散结;制香附理气宽中､疏肝解郁;赤芍凉血清热､止痛散瘀;皂角刺消肿排脓;栀子清热泻火､凉血解毒;纵观此方,具有疏肝解郁､清热解毒､活血通络､消肿散结之功效｡本研究结果显示,与对照组比较,治疗后观察组临床症状体征明显改善,可见乳痈方治疗哺乳期乳腺炎疗效较好,与既往文献研究结果一致[5]｡此外,本研究发现,与对照组比较,治疗后观察组治疗总有效率虽略有升高,但组间比较,差异无统计学意义(P>0.05),考虑可能与本研究样本量小有关｡

前期研究通过对采集的208例健康乳汁､172例细菌感染乳汁进行定性､定量检测发现,健康乳汁中含有乳酸杆菌､双歧杆菌､葡萄球菌和链球菌,对细菌进行定量检测发现,益生菌数量高于致病菌数量,相同宿主双侧乳腺菌群数量一致,健康乳汁菌群的各细菌间具有相关性,进一步证明健康乳汁是一个菌群平衡的环境[16]｡然而,一旦乳汁菌群失衡,则乳腺导管上皮内壁细菌明显增多,部分细菌释放大量内毒素,引起乳腺炎症反应｡本研究对患侧乳汁进行细菌定性培养及qPCR检测,结果显示,治疗后两组乳汁细菌阳性率及葡萄球菌､乳酸杆菌､链球菌含量较治疗前均略有降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)｡考虑其原因可能为:(1)培养出的细菌可能是定植菌,并非致病菌;(2)细菌培养假阴性;(3)外吹乳痹患者症状较轻,细菌感染程度较轻;(4)样本量过小｡

细菌感染会引起机体的免疫反应,包括局部炎症应答,作为宿主防御的一部分,抗菌肽LL-37可通过其直接的杀菌作用和间接的免疫调节功能来抑制这一复杂的生物过程,通常表现为抗菌肽LL-37水平的升高｡然而,细菌为逃避宿主的免疫攻击和抗菌药物的治疗,会在表面形成一层生物膜继而产生耐药｡常规抗菌药物通常对游离细菌或生物膜表面的附着细菌产生效果,然而,一旦细菌形成成熟的生物膜,常规抗菌药物就很难穿透生物膜到达细菌,从而无法有效清除细菌[17],但抗菌肽LL-37却能通过与磷壁酸及脂多糖结合,破坏细菌生物膜完整性,进而杀灭细菌,发挥类似抗菌药物的作用｡李俊等[18]在研究中也指出,LL-37对多重耐药铜绿假单胞菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌展现出显著的抗菌活性｡本研究结果发现,治疗后两组LL-37mRNA与蛋白表达均低于治疗前,且观察组低于对照组,提示乳痈方有利于抑制局部炎症应答,从而降低内源性抗菌肽LL-37的表达｡此外,与对照组相比,观察组不良反应发生率无明显升高,可见该方案安全性良好｡

综上所述,乳痈方治疗哺乳期乳腺炎能有效改善患者临床症状体征,并通过调节抗菌肽LL-37的mR-NA和蛋白表达调节乳汁菌群平衡,发挥其抗菌作用｡本研究未观察到明显的不良反应,表明该方案具有良好的安全性｡然而由于本研究样本量较小,某些试验数据可能存在偏差｡因此,未来需开展更大规模､设计严谨的临床研究,以进一步验证乳痈方的疗效和长期安全性｡

参考文献:

[1]秦博,陈诚,黄银,等.哺乳期乳腺炎患者的用药与哺乳[J].医药导报,2020,39(1):47-50.

[3]步玉辉,史立波,韩晓琳,等.冷敷联合布洛芬治疗哺乳期乳腺炎及对患者生活质量的影响[J].河北医药,2023,45(7):1061-1064.

[5]陶颖娜,万华,仲姗姗,等.乳痈方调节乳腺菌群治疗哺乳期乳腺炎的临床研究[J].上海中医药杂志,2018,52(5):46-50.

[6]刘敬,李薇,孙国文.人源抗菌肽LL-37对柯萨奇B3病毒诱导的病毒性心肌炎小鼠病毒复制及炎症反应的影响[J].岭南心血管病杂志,2022,28(4):349-354.

基金资助:上海市虹口区卫生健康委科研计划项目(HKQGYQY-ZYY-2022-18);同济大学附属上海市第四人民医院学科助推计划项目(SY-XKZT-2021-1011);

文章来源:钱晨,孙雯,薛佩佩,等.基于抗菌肽LL-37探讨乳痈方治疗哺乳期乳腺炎的效果[J].国际检验医学杂志,2025,46(07):884-888.