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体外受精率、优胚率以及囊胚形成率与精子DNA碎片率之间的关系

2020-09-09 759 上传者：管理员

摘要：目的：分析体外受精率、优胚率以及囊胚形成率与精子DNA碎片率之间的关系。方法：选择在郑州大学附属洛阳中心医院实施体外受精治疗的120对不孕症夫妇为研究样本,其治疗时间均在2018年1月—2019年1月之间,使用流式细胞仪分别检测每对男性病患精子DNA碎片指数,依据检查结果将其分成组均40对的A组(精子DNA碎片指数小于15.00%)、B组(精子DNA碎片指数在15.00%至30.00%之间)以及C组(精子DNA碎片指数大于30.00%)。观察三组病患受精率、优胚率以及囊胚形成率,比较每组精液参数指标。结果：三组在精子尾部低渗肿胀率以及前向运动精子方面有显著差异(P<0.05);B组与C组在精浆a葡萄糖苷酶方面有显著差异(P<0.05)。在优胚率方面三组有显著差异(P<0.05)。结论：精子DNA碎片率升高会导致体外受精率、优胚率以及囊胚形成率下降,分析精子DNA碎片情况可预测进行辅助生殖技术女性的妊娠结局。

关键词：
优胚率
体外受精
受精率
囊胚形成率
碎片率
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受精过程主要是指携带男性DNA的精子进入女性卵子中，形成受精卵[1]。随着人们对优生、优育的关注度越来越高，临床对精子DNA碎片的研究逐渐深入。有研究显示[2]，导致精子DNA形成碎片的因素较多，可发生在精子生成的各阶段，并且在男性基因转录时也会出现精子DNA损伤；而对于实施辅助生殖技术的病患来说，若精液长时间处于高氧环境中同样也会出现DNA损伤，进而形成精子DNA碎片。为了解精子DNA碎片对妊娠结局的影响，本研究对120对实施体外受精治疗的不孕症夫妇进行精子DNA碎片检查，现将研究过程及研究结果阐明如下。

1、基线资料以及研究措施

1.1 基线资料

选择郑州大学附属洛阳中心医院接收的120对实施体外受精治疗的不孕症夫妇为研究样本，其治疗时间均在2018年1月—2019年1月之间。依据男性精液中DNA碎片指数将其分成A组(40例，精子DNA碎片指数小于15.00%)、B组(40例，精子DNA碎片指数在15.00%至30.00%之间)以及C组(40例，精子DNA碎片指数大于30.00%)。A组、B组及C组男性病患年龄平均值分别是(32.59±3.26)岁、(32.68±3.37)岁、(32.63±3.32)岁；女性年龄平均值分别是(29.88±2.17)岁、(29.92±2.23)岁、(29.95±2.27)岁。将三组基线数据输入统计学软件进行分析，结果显示P>0.05，表示可实施分组探讨研究。

准入标准：(1)全部女性病患均是由于输卵管或盆腔原因而引起的不孕症[3];(2)男性均能在取卵当日提供新鲜精液。排出标准：(1)存在卵巢手术既往史的女性病患；(2)男性存在性功能障碍或输精管有明显异常者[4]。本次研究经医院伦理委员会审核通过，并且病患均已签署知情同意书。

1.2 研究措施

采用流式细胞仪(采购至常州必达科生物科技有限公司)进行检测。嘱男性禁欲3～7d，并在女性取卵当日通过手淫方式取得新鲜精液，将其放置在常温环境下进行液化，采集200μL液化后精液实施常规检查和精子DNA碎片检查。将易溶凝胶管放置在80℃水浴箱中进行20min孵育，待其全部融化后再将其放置在37℃水浴箱中进行备用；使用生理盐水改变液化后精液浓度，确保浓度在1×106/mL至5×106/mL之间，随后采集30ul精液标本，并向内添加溶化后的凝胶管，有效混合后放置在37℃水浴箱中进行下一步孵育。

选择含有低熔点琼脂糖的载玻片，将其放置在2℃至8℃的冰箱中进行5min冷藏，随后在载玻片低熔点琼脂糖部位滴入30ul精子悬液，并放置盖玻片，随后将其置入2～8℃的冰箱中进行5min冷藏，取出后将盖玻片移除；快速将载玻片垂直放置在装有0.09%过氧化氢以及醋酸的反应池中，充分反应7min；之后将载玻片取出，并吸干载玻片上多余溶液，再次快速将其垂直放入装有0.5%十二烷基硫酸钠缓冲液的反应池中，充分反应25min；反应完毕后将载玻片取出，以水平方式放置在纯化水中，放置5min，期间需更换纯化水1～2次；随后将载玻片逐步放置在浓度为70%、90%以及100%的乙醇中分别进行2min脱水处理，取出后放置在室温下，待其干燥；将1～2mL瑞士染液滴在载玻片上，并逐渐添加2～3mL瑞士缓冲液，缓慢将其充分融合，7min后在流动水下冲洗载玻片，并将其放置在37℃的保温箱中进行干燥处理；最后在显微镜下进行观察，计算有DNA碎片的精子数目。

1.3 观察项目

比较每组精液参数情况。观察三组病患受精率、优胚率以及囊胚形成率。有DNA碎片的精子数/观察范围内总精子数×100.00%=精子DNA碎片率[5]。有DNA碎片的精子诊断标准[6]:(1)在较大光晕时，精子头部最小直径小于一侧光晕厚度；(2)小光晕时，精子头部最小直径1/3大于一侧光晕厚度；(3)中等光晕时，处于大光晕与小光晕之间；(4)无光晕。

其中无光晕以及小光晕的精子出现DNA碎片。受精数目/获卵总数量×100.00%即为受精率[7]，优质胚胎数目/可使用胚胎总数量×100.00%即为优胚率[8]，出现囊胚数目/总胚胎数量×100.00%即为囊胚形成率[9]。

1.4 统计学方法

计量资料和计数资料分别以±s和[n(%)]的形式表示，检测方式选择SPSS22.0软件中的t检验和χ2检验，三组计量资料之间比较采用F分析。P<0.05表示差异显著有统计学意义。

2、结果

2.1 比较三组精液参数情况

三组精液在前向运动精子方面、精子尾部低渗肿胀率方面均有显著差异(均P<0.05);B组与C组在精浆a葡萄糖苷酶方面有显著差异(P<0.05)，见表1。

2.2 比较每组受精率、优胚率以及囊胚形成率

三组在优胚率方面比较差异显著(P<0.05)，见表2。

表1三组精液参数情况对比(N=40,±s)

表2每组受精率、优胚率以及囊胚形成率对比[n(%)]

3、讨论

随着人们生活方式以及饮食习惯的改变，患不孕症的人数逐年升高，临床采取辅助生殖技术的人数也不断提升。受精卵质量是决定妊娠结局的重要因素，对于实施辅助生殖技术的病患来说，在受精卵形成的各个阶段均会受到各种因素影响，降低受精卵质量[10]。其中，精子DNA碎片成为近年来临床研究的重点。为改善辅助生殖病患妊娠结局，本文对受精卵质量与精子DNA碎片之间的关系进行探究，以期待为临床治疗提供理论依据。

对于实施辅助生殖的病患来说，当男性提供精液后，无法在短时间内与卵细胞进行有效结合，因此极易受到外界因素影响，从而使其DNA出现碎片[11]。在本次研究中，三组精液在精子尾部低渗肿胀率及前向运动精子方面均有显著差异(均P<0.05);B组与C组在精浆a葡萄糖苷酶方面比较有显著差异(P<0.05)。在优胚率方面，三组比较有显著差异(P<0.05)。通过研究结果可知，当精子DNA碎片越多时，其受精率、优胚率以及囊胚形成率均有明显下降。分析原因可知，当精子受到各种影响因素损伤后，其所具有的受精功能以及促胚胎发育功能相应的出现损伤，从而降低优质胚胎率[12]。

综上，辅助生殖技术受精率、优胚率以及囊胚形成率因精子DNA碎片率的升高而降低，可将精子DNA碎片率作为判断妊娠结局的重要指标之一。

参考文献：

[1]李志斌,米阳,沈云峰,等.4165例体外受精—胚胎移植孕妇妊娠中晚期并发症的回顾性研究[J].中国妇幼保健,2019,34(22):5266-5270.

[2]管荷琴,周洁,徐丹萍.血清抗缪勒管激素水平与免疫性不孕症及体外受精—胚胎移植妊娠结局的相关性[J].中国妇幼保健,2019,34(22):5255-5258.

[3]梁泳娜,谢斯盛,梁见弟,等.精子DNA碎片指数对评估体外受精-胚胎移植患者妊娠结局的临床价值[J].中国优生与遗传杂志,2019,27(1):95-98.

[4]梁晓东,莫淦文,纪鹏,等.精子DNA碎片指数(DFI)与体外受精结局的多因素Logistic回归分析[J].现代检验医学杂志,2019,34(5):59-63.

[5]冯娜,陈欣洁.精液优选对精子DNA碎片的影响及其对体外受精—胚胎移植妊娠结局的影响[J].实用医学杂志,2017,33(17):2885-2888.

[6]刘树沅,韦剑洪,霍骏业,等.精子DNA碎片率与精子核蛋白不成熟度检测在体外受精治疗中的应用研究[J].国际检验医学杂志,2017,38(11):1452-1453,1456.

[7]刘春辉,王志强,王养民,等.少弱精子症患者同型半胱氨酸水平与精子DNA碎片指数相关性研究[J].中华男科学杂志,2018,24(7):662-665.

[8]江伟杰,金帆,周黎明.优选后精子畸形指数､顶体异常率､DNA碎片指数预测IVF受精失败的价值[J].中华男科学杂志,2016,22(2):147-152.

[9]杨斯桀,李婷,刘雯,等.植入前遗传学筛查在高精子DNA碎片指数不育夫妇行ICSI中的应用[J].中华男科学杂志,2018,24(1):39-44.

[10]刘利敏,谢庆东,凌晓辉,等.精浆ROS､PON-1､MDA联合精子DNA碎片指数在男性不育症患者中的研究[J].国际检验医学杂志,2019,40(12):1435-1438.