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梅毒螺旋体颗粒凝集试验国产试剂与进口试剂的比对分析

2025-06-24 65 上传者：管理员

摘要：目的对日本富士瑞必欧株式会社和我国珠海丽珠试剂股份有限公司生产的梅毒螺旋体抗体检测试剂盒（凝集法）（TPPA）性能进行比对研究。方法使用两个试剂分别对301份不同临床时期梅毒确诊患者以及非梅毒感染患者样本进行平行检测，比较阴阳性符合率，并选取其中的30份样本进行效价一致性评价，最后使用珠海丽珠试剂评价11位患者治疗随访样本的效价变化。结果两个试剂对301份样本的阴阳性符合率为100%。配对t检验显示两个试剂对30份样本的效价检测结果无差异，而且一期梅毒样本TPPA效价显著低于其余时期。治疗随访样本的效价变化呈现先升高后降低趋势，并和TRUST滴度变化相关。结论国产TPPA试剂在样本阴阳性符合率以及效价检测方面和进口原装试剂的性能一致。

关键词：
TPPA试剂
TP血清试验检
临床分期
梅毒
试剂比对
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自21世纪初以来,梅毒发病率大幅回升,在一些国家激增了300%以上,尤其是一期和二期梅毒的报告数显著增加[1-3]｡然而梅毒无有效疫苗进行预防,防控主要依靠早期诊断以发现传染源并进行系统驱梅治疗｡目前梅毒实验室检测方法主要为血清学检测,又分为梅毒螺旋体(TP)血清试验和非TP血清试验[4-6]｡其中TP血清试验检测针对其特有抗原的抗体,依据检测操作方法分为手工试验和全自动检测,主要包括了TP颗粒凝集试验(TPPA)､酶联免疫吸附试验(ELISA)､化学发光免疫试验(CLIA)､免疫层析试验以及荧光螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS)等｡

TPPA试剂最初是由日本富士瑞必欧株式会社生产,是基于用超声裂解的Nichols株抗原致敏彩色明胶颗粒,然后和样本中的特异性的抗TPIgM和IgG抗体结合,静置后产生肉眼可见的红色凝集反应,阴性反应的明胶颗粒呈现出钮扣或小环状形态｡2024年2月8日美国疾病与预防控制中心发布的《梅毒实验室检测建议》中分析TPPA试剂在一期､二期､三期以及潜伏期梅毒,灵敏度可分别达94.5%､100%､100%和100%,特异性可达94%~100%,并指出TPPA试剂是手工密螺旋体试验的首选,其在梅毒各个感染阶段具有较高的特异性和灵敏度[7]｡目前国内外越来越多的实验室首选使用全自动化的密螺旋体试剂进行梅毒筛查,此逆向筛查程序如果出现和非TP血清试验不一致的结果需要使用手工的TP血清试验进行复核,一般也是推荐使用TPPA试剂｡因此TPPA试剂被认为是梅毒的标准确认试剂,国内许多大型传染病医院对梅毒血清样本也是直接使用TPPA试剂进行检测｡

由日本富士瑞必欧株式会社生产的TPPA试剂最早是由珠海丽珠试剂股份有限公司进行代理在国内注册,用于体外定性检测人血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体及其效价｡目前日本公司实行原料销售模式,其TPPA试剂生产工艺全部转让给珠海丽珠公司,实现国产化｡珠海丽珠试剂股份有限公司生产的TP抗体检测试剂盒(凝集法)于2023年获得国家药品监督管理局批准,用于体外定性检测人血清和血浆中的TP抗体及其效价｡基于TPPA试剂在临床梅毒血清学检测的重要作用,本研究对国产与进口TPPA试剂检测性能进行比对,以评估国产试剂能否满足临床需要｡

1、材料与方法

1.1评价样本

不同临床时期梅毒确诊患者以及非梅毒感染患者样本由广西壮族自治区皮肤病医院提供,共计324份,均为检验科剩余样本｡年龄分布范围为8~79岁,年龄中位数为35岁,样本其他信息见表1｡

1.2评价试剂

日本富士瑞必欧株式会社以及珠海丽珠试剂股份有限公司生产的TPPA试剂,注册证号分别为国械注进20173406813和国械注准20233400829｡

1.3评价方法

1.3.1阴阳性符合率评价

选取梅毒确诊患者样本156份,非梅毒感染患者样本145份,严格按照两个试剂的说明书进行样本检测和结果判定,本次试验由长期从事性病实验室检测工作的专业人员一人在同一时间同一实验室进行平行检测和结果判读,以保证操作手法和人工结果判读的一致性｡

表1收集样本临床信息

1.3.2效价检测一致性评价选取30份梅毒不同感染时期样本,包括一期梅毒8例,二期梅毒11例,神经梅毒1例,隐性梅毒10例,严格按照两个试剂的说明书进行样本效价检测,将显示反应图像为(+)时的最终稀释倍数作为抗体效价｡本次试验由长期从事性病实验室检测工作的专业人员一人在同一时间同一实验室进行平行检测和结果判读,以保证操作手法和人工结果判读的一致性｡

1.3.3梅毒随访患者效价检测选取5位二期梅毒患者和6位隐性梅毒患者治疗前后以及随访样本共计26份,使用珠海丽珠试剂股份有限公司生产的TPPA试剂按照说明书进行效价检测,比较治疗过程中抗体滴度的变化｡

1.4数据分析两个试剂对各个时期临床样本检测效价差异使用IBMSPSS软件(版本26)进行配对t检验和独立样本t检验,以P<0.05为差异有统计学意义｡

2、结果

2.1阴阳性符合率结果

两个试剂对156份梅毒确诊患者样本检测均为阳性,对145份非梅毒感染患者样本检测均为阴性,两个试剂的阴阳性符合率为100%｡

2.2效价检测一致性结果

两个试剂对30份梅毒不同感染时期样本效价检测一致样本共计9份;有2份样本日本富士试剂检测效价高于珠海丽珠试剂,均相差2倍;其余样本均为珠海丽珠试剂检测效价高于日本富士试剂,其中15份样本相差2倍,2份样本相差4倍,2份样本相差8倍,配对t检验双尾P值为0.083,显示两个试剂检测结果无差异(图1)｡以日本富士TPPA试剂检测结果为标准,一期､二期､神经梅毒和隐性梅毒效价几何均值分别为538､2404､10240和3378(图2),经独立样本t检验,一期梅毒样本效价显著低于其余三个时期,而二期､三期和隐性梅毒样本效价间无显著性差异｡

图1日本富士和珠海丽珠TPPA试剂检测30份梅毒不同感染时期样本效价

图2日本富士TPPA试剂检测30份不同临床时期梅毒样本效价

2.3梅毒随访患者效价变化

1位二期梅毒和1位隐性梅毒患者的随访样本分别为3份和5份,效价均为先升高后降低,其余9位随访患者均只收到2份样本,其中有2位患者效价无变化,3位患者效价升高,其余4位患者效价均降低｡具体见表2｡

表211位患者随访样本效价检测结果

3、讨论

TPPA试剂在梅毒血清学诊断中的重要价值已得到国内外广泛认可,评估国产TPPA试剂和原产国外试剂的性能差异情况为国产试剂在全球销售提供了技术支撑｡

依据产品说明书中的方法1,该试剂用于检测血清中的TP抗体,是用于定性检测,本研究首先选取了临床确诊的梅毒感染样本156份,包括了不同感染时期以及梅毒随访人员;非梅毒感染者样本145份,囊括了常见皮肤疾病感染者和正常体检人群,两个TPPA试剂对此具有广泛代表性的301份样本检测的阴阳性结果100%一致,说明国产TPPA试剂在定性检测和进口试剂的质量相当｡而依据产品说明书的方法2,该试剂还可用来测定抗体效价｡虽然传统认为TP抗体一经产生,终生维持阳性,但近些年发现一些极早期梅毒感染者接受系统治疗后,特异性的TP抗体也会降低或转阴[8-9],而且也有研究表明血清TPPA效价下降和神经梅毒脑脊液正常化有关[10-11],因此TPPA效价滴度变化的检测在TP血清学诊断中的价值也越发凸显｡本研究选取了30份不同临床时期样本使用两个试剂进行效价检测,30%的样本效价检测一致,63%的样本使用国产试剂检测效价高于进口试剂,但是大部分样本只相差一个稀释倍数,可能和人工操作､肉眼判读误差等有关系,所以经配对样本t检验,两个试剂对30份样本的效价检测结果无显著性差异,进一步论证了国产TPPA试剂和进口原装试剂的性能一致性｡将日本富士TPPA试剂对30份不同临床时期的样本效价检测结果进行横向比较,效价几何均值随着感染时间的延长而升高,这和机体对TP的免疫应答反应一致,经独立样本t检验,一期梅毒效价显著低于其余时期,说明早期感染阶段机体的免疫反应处于较低水平,此时要警惕血清学检测阴性结果的随访或者使用TP病原学检测方法如核酸检测进行补充｡隐性梅毒感染时间很难明确,其效价水平稍高于二期梅毒,说明感染时间要长于二期梅毒｡

为了观察治疗前后TP特异性抗体变化情况,本研究对11位患者的治疗随访样本进行效价检测,有1例二期梅毒患者为首次就诊接受治疗,其TRUST滴度随着每个月的随访逐渐降低,说明治疗有效,TPPA效价出现先升高后降低趋势｡1例隐性梅毒首次就诊接受治疗患者连续三个月5次采集样本的TRUST滴度均为2,处于血清固定状态,但TPPA效价也出现先升高后降低的趋势｡说明在治疗阶段,机体免疫应答先启动,待梅毒螺旋体清除后再下降,维持在一定水平｡其余9位患者均只收到2份样本,其中一位隐性梅毒患者初次就诊3个月后TRUST滴度4倍升高,说明治疗无效或者再感染,也同时发现该患者TPPA效价4倍增长;另有2位隐性梅毒患者的2份随访样本TRUST检测为阴性,伴随TPPA效价无变化,说明TP在机体内已清除;另有1位二期梅毒和1位隐性梅毒患者在随访第二年,TRUST滴度转阴,但TPPA效价有2倍升高;另外4位患者的2份随访样本TRUST检测均为阴性,伴随TPPA效价均降低｡不一致的结果是否是因为手工实验误差引起,还需要加大样本量持续研究观察｡总体来看,本研究入组的11位随访患者的TPPA效价值和TRUST滴度变化结果较一致｡随着治疗随访时间的延长,TP特异性抗体先升高后降低,然后维持稳定的趋势,究竟是针对所有TP外膜蛋白的抗体均有降低还是某一种外膜蛋白抗体有下降还需要进行持续评估,尤其是观察到有患者在治疗阶段出现了血清固定现象,所以寻找对治疗反应更一致的靶标能为梅毒治疗效果的监控提供科学指导｡

参考文献:

[5]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.WS273—2018梅毒诊断[S].2018.

[6]尹跃平.性传播疾病实验室检测指南[M].北京:人民卫生出版社,2019.

文章来源:朱邦勇,夏德菊,甘泉,等.梅毒螺旋体颗粒凝集试验国产试剂与进口试剂的比对分析[J].中国医药生物技术,2025,20(03):339-342.