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尿毒症患者miR-130a、miR-223表达与桡动脉组织钙化的相关性

2025-08-26 26 上传者：管理员

摘要：目的研究miR-130a、miR-223在尿毒症患者中表达及其与桡动脉组织钙化的相关性。方法选取80例尿毒症患者为尿毒症组，另选取同时间进行胃切除术的20例肾功能正常患者为对照组。运用苏木素-伊红(HE)、Masson、钙盐染色液(vonKossa)染色观察桡动脉组织病理变化，免疫组化检测miR-130a、miR-223表达，反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-130a、miR-223表达。结果两组年龄、性别、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)水平、合并糖尿病、高血压、高脂血症无统计学差异(P>0.05);两组血磷、血钙、钙磷乘积、全段甲状旁腺素(iPTH)、C反应蛋白酶(CRP)水平有统计学差异(P<0.05)。不同血管钙化程度组年龄、iPTH、TC、TG、LDL水平无明显差异(P>0.05);不同血管钙化程度与血磷、血钙、钙磷乘积、CRP水平、miR-130a及miR-223表达差异显著(P<0.05)。miR-130a在无钙化组、轻中度钙化、重度钙化组的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05);miR-223在无钙化组、轻中度钙化、重度钙化组的阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。miR-130a与血管钙化严重程度呈正相关(r=0.367,P<0.001),miR-223与血管钙化严重程度呈负相关(r=-0.384,P<0.001)。miR-130a、miR-223、血钙、CRP是血管钙化的影响因素(P<0.05)。miR-130a对血管钙化诊断的灵敏度为92.31%,特异度为82.47%,曲线下面积(AUC)为0.750,miR-223对血管钙化诊断的灵敏度为93.41%,特异度为78.62%、曲线下面积(AUC)为0.760。结论尿毒症患者miR-130a表达增加和miR-223表达降低对血管钙化的诊断具有一定价值。

关键词：
miR-130a
miR-223
尿毒症
心脑血管疾病
桡动脉组织学改变
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研究发现，血管内皮细胞功能异常是尿毒症患者发生心脑血管疾病的重要因素〔1，2〕。近年来，由心脑血管疾病所造成的死亡率高达50%以上〔3〕。相关报道发现，尿毒症患者较健康人更易患心血管疾病，同时心血管不良事件的发生率同样较高〔4〕。在临床上，血管钙化导致心血管疾病的风险被逐渐发现，并认为其是导致患者死亡的重要因素。在多种心血管疾病中，如动脉硬化等疾病中均发现有血管钙化，且具有可逆性〔5〕。而在这一过程中，血管平滑肌细胞既向软骨样细胞和成骨样细胞分化，又向骨细胞分化〔6〕。研究表明，miＲNA参与多种细胞的生物学行为及病理过程，在人类的发育和疾病中具有重要作用〔7，8〕。研究发现，在动脉粥样硬化中，miＲ-130a呈现低表达，并与疾病严重程度呈负相关〔9〕。而miＲ-223最早是在血液系统中被发现的，其在粒细胞、单核细胞和骨髓造血细胞中均高表达，并与髓系细胞的分化密切相关〔10〕。当前有关miＲ-223和miＲ-130a在尿毒症中的作用及对桡动脉的影响还鲜有研究。本文探讨尿毒症患者miＲ-130a、miＲ-223表达与桡动脉组织钙化的相关性。

1、对象和方法

1.1研究对象和分组

选取2019年5月至2021年5月深圳市龙华区人民医院80例尿毒症患者为尿毒症组，符合慢性肾脏病筛查诊断及防治指南，血液透析＜2w。尿毒症患者根据不同血管钙化程度分为重度钙化组(18例)、轻中度钙化组(20例)、无钙化组(42例)。纳入标准:①临床资料完整;②年龄≥45岁;③规律进行血液透析≥6个月(4～5h/次、2～3次/w)。排除标准:①恶性肿瘤患者;②联合腹膜透析;③近3个月内急慢性感染;④应用免疫抑制剂、糖皮质激素及抗癫痫药物者。另选取同时间于医院进行胃切除术的20例肾功能正常患者为对照组。入组患者均知情并签署同意书。

1.2血管标本

手术时取2.0～3.0cm桡动脉，去除多余组织，磷酸盐缓冲液(PBS)清洗。将上述标本均与甲醛溶液中固定24h，后进行石蜡包埋、常规切片，放置于载玻片上，37℃烤15min，4℃冰箱备用。

1.3血液标本

抽取静脉血2ml，采用全自动生化分析仪检测血磷、血钙、C反应蛋白酶(CＲP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、全段甲状旁腺素(iPTH)等生化指标。

1.4苏木素-伊红(HE)、Masson、钙盐染色液(vonKossa)染色观察桡动脉组织病理变化

HE染色:取各组石蜡组织脱蜡，切片。苏木素染色，PBS清洗，盐酸(1%)处理，伊红复染，脱水，封片，观察组织形态。Masson染色:丽春红酸性品红液染5～10min，2%醋酸处理1min;磷钼酸水溶液(1%)处理，复染，常规处理光镜下观察结果。vonKossa染色:组织脱蜡、脱蜡，硝酸银(5%)浸染，暴晒40min，PBS冲洗后硝酸银继续处理2min，冲洗，伊红(0.5%)复染;PBS清洗、脱水、透明、封片，光镜下观察。根据参考文献〔11〕，由2位病理医师独立完成后取平均值，＜1.0分为无钙化;1.0～2.5分为轻、中度钙化;＞2.5分为重度。

1.5免疫组化检测miＲ-130a、miＲ-223表达

取各组石蜡组织切片，脱蜡至水，PBS清洗，将修复液煮开，放入组织后煮沸、冷却、封闭过夜，PBS冲洗;加miＲ-130a、miＲ-223一抗(1∶500)，孵育过夜，加辣根过氧化物酶二抗(1∶1000)，孵育4h，二氨基联苯胺(DAB)显色，蒸馏水终止显色;脱水，透明，封片，光学显微镜下观察。

1.6反转录-聚合酶链反应(ＲT-PCＲ)检测miＲ130a、miＲ-223表达

取各组石蜡组织切片，裂解液裂解后离心，重悬，冲洗后，根据TaKaＲa公司反转录试剂盒的操作说明书进行实验操作，随机引物合成cDNA之后，再将试剂加入PCＲ管中，PCＲ条件:预变性95℃15s，95℃5s，60℃30s，总计45个循环，用2－△△Ct法计算基因相对表达水平，引物序列为:miＲ-223正向5'-AGCCCAGTACTTTAGTTACA-3'，反向5'-CATAGGAATTCTTTACTAGC-3';miＲ-130a正向5'-CAGAGCCCTTTTTCTGTTGT-3'，反向5'-ATTAAAAGGGCATTGGCTGG-3';GAPDH正向5'-AGTACGCTGTGAGTATCACC-3'，反向5'-TACTGACTCGCTCTTCACAG-3'。

1.7统计学方法

采用GraphPadPrism8.0软件进行单因素方差分析、独立样本t检验、χ2检验、Pearson相关性分析多元线性回归分析，受试者工作特征(ＲOC)曲线评价miＲ-130a、miＲ-223对血管钙化的诊断预测效能。

2、结果

2.1两组临床资料对比

两组年龄、性别、TG、TC、LDL水平、合并糖尿病、高血压及高脂血症无统计学差异(P＞0.05)。两组血磷、血钙、钙磷乘积、iPTH、CＲP水平差异有统计学意义(P＜0.001)。见表1。

2.2HE、Masson、vonKossa染色观察桡动脉组织病理变化

HE染色:重度钙化组桡动脉组织部分内膜脱落、细胞间质增加。轻中度钙化组内膜光滑，内弹性层完整，中膜可见增厚，细胞间质增加，经vonKossa染色证实为中度钙化。对照组、无钙化组血管内膜及弹力板完整、光滑，无钙化。Masson染色:重度钙化组血管中、内膜胶原蛋白增加，有纤维化产生;轻中度钙化组胶原蛋白含量有所降低，无纤维化产生。vonKossa染色:重度钙化组主要为管腔周围有黑色颗粒沉积;轻中度钙化组血管平滑肌层有黑色颗粒沉积。见图1。

表1两组临床及生化指标比较(x±s)

图1不同钙化组桡动脉组织病理

2.3临床指标在不同钙化程度中的表达

不同血管钙化程度组年龄、iPTH、TC、TG、LDL水平无统计学差异(P＞0.05)，血磷、血钙、钙磷乘积、CＲP水平、miＲ-130a及miＲ-223表达差异显著(P＜0.05)。见表2。

2.4免疫组化检测miＲ-130a、miＲ-223在不同程度血管钙化中的表达

miＲ-130a在无钙化组、轻中度钙化、重度钙化组阳性表达率分别为45.24%(19/42)、65.00%(13/20)、88.89%(16/18)，差异有统计学意义(P＜0.05)。miＲ-223在无钙化组、轻中度钙化、重度钙化组阳性表达率分别为80.95%(34/42)、60.00%(12/20)、22.22%(4/18)，差异有统计学意义(P＜0.05)。见图2。

表2临床指标在不同钙化程度患者中的表达

图2miＲ-130a、miＲ-223在不同程度血管钙化患者中的表达

2.5miＲ-130a、miＲ-223水平与血管钙化的关系

miＲ-130a与血管钙化严重程度呈正相关(r=0.367，P＜0.001)，miＲ-223与血管钙化严重程度呈负相关(r=－0.384，P＜0.001)。见图3。2.6多元线性回归分析影响血管钙化的危险因素miＲ-130a、miＲ-223、血钙、CＲP是血管钙化的影响因素(P＜0.05)。见表3。

表3尿毒症患者血管钙化影响因素的回归分析

图3尿毒症患者中miＲ-130a、miＲ-223与血管钙化程度的相关性

2.7miＲ-130a、miＲ-223对血管钙化的诊断价值

miＲ-130a对血管钙化诊断的灵敏度为92.31%，特异度为82.47%，曲线下面积(AUC)为0.750。miＲ223对血管钙化诊断的灵敏度为93.41%，特异度为78.62%，AUC为0.760。提示miＲ-130a、miＲ-223对血管钙化具有一定的诊断价值。见图4。

图4miＲ-130a、miＲ-223诊断尿毒症患者血管钙化的ＲOC曲线

3、讨论

血管钙化是尿毒症等慢性肾脏病致死率高的主要原因。组织学等证实，慢性肾病患者均存在血管钙化。流行病学提示〔12〕，血管钙化与心血管疾病的产生联系密切。血管钙化是由于钙盐于血管中沉积所致。常见于两种不同类型的动脉钙化，一种累及大、中动脉内膜，常见于动脉硬化中;另一种为动脉中膜钙化，见于尿毒症和糖尿病患者。血管钙化对尿毒症患者临床治疗效果存在影响，主要体现在该类患者是否能够进行透析治疗。研究表明，血管钙化会导致血管壁厚度增加，管腔狭小及脆性加大，在患者穿刺后易形成血栓而不利于临床治疗的顺利进行〔13〕。在内瘘手术过程中出现的白色颗粒样物质可沉积于血管壁，导致术后吻合困难，并可增加手术失败风险。本研究结果与易建伟〔14〕的报道相似。由此可知，血管钙化会导致心脏负荷增加脏器缺血等并发症产生，因此对于尿毒症的治疗早期干预至关重要，此外对于评估和检测尿毒症患者桡动脉钙化产生的可能性，同样重要。

血管平滑肌细胞的过度增殖是影响血管钙化的主要原因之一。报道发现〔15〕，miＲ-130a通过调控相关因子促进血管平滑肌细胞增加，加快肺动脉高压病程。另外，任应国等〔16〕研究发现，抑制miＲ-130a表达，可促进大鼠脑基底动脉平滑肌细胞凋亡。miＲ-223是机体代谢标志物之一，参与机体炎症、免疫等过程。近年来，其在心血管方面的研究逐渐增加。已有研究证实〔17〕，miＲ-223在慢性肾病大鼠及患者中均呈现低表达，增加miＲ-223表达可逆转血管钙化。Shi等〔18〕在对脐静脉内皮细胞的实验中提出，转染miＲ-223模拟物会促进细胞凋亡并抑制血管内皮生长因子等表达，抑制miＲ-223表达后，可促进小鼠视网膜毛细血管生成。Dai等〔19〕在对缺血心肌微血管内皮细胞的研究中发现，相比阴性对照组，缺血心肌微血管内皮细胞中miＲ-223-3p表达水平明显增加。Ulbing等〔20〕研究提示，miＲ-223-3p是慢性肾脏疾病的标志物，在骨代谢、血管钙化和血管平滑肌细胞潜在分化中具有重要作用;miＲ-223-3p对矿物质具有一定的影响并参与成骨细胞及血管平滑肌细胞的分化过程。上述实验均证实了miＲ-223、miＲ-130a可参与血管钙化的产生，对尿毒症桡动脉血管钙化具有一定的诊断价值。

综上，尿毒症患者桡动脉miＲ-130a表达增加、miＲ-223表达降低，并与疾病严重程度具有一定相关性。miＲ-130a、miＲ-223对血管钙化具有一定的诊断价值。但本文未针对桡动脉钙化与心脏及大血管钙化间的相关性进行细致研究，在今后的实验中应进一步完善实验内容。

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基金资助:深圳市龙华区医疗卫生机构区级科研项目(2020064);

文章来源:莫怡浩,王丽,胡明亮,等.尿毒症患者miR-130a､miR-223表达与桡动脉组织钙化的相关性[J].中国老年学杂志,2025,45(16):3910-3915.