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联苯双酯固体分散体的制备及体外溶出度研究

2020-08-13 243 上传者：管理员

摘要：目的：制备联苯双酯固体分散体,以提高联苯双酯的体外溶出度。方法：以聚乙二醇6000、聚维酮K30和泊洛沙姆188(Poloxamer188,P188)为载体,采用溶剂挥发法制备联苯双酯固体分散体。同时,采用差示扫描量热法、X射线粉末衍射法和红外光谱法等技术对固体分散体进行表征。结果：在三种载体制备的固体分散体中,联苯双酯的体外溶出度明显提高,且三种载体对联苯双酯的增溶效果依次为:P188>PVPK30>PEG6000。DSC、XRPD和IR结果表明,联苯双酯以分子形式或无定型存在于固体分散体中。结论：采用溶剂挥发法制备联苯双酯固体分散体,能明显提高联苯双酯体外溶出度。

关键词：
固体分散体
溶出度
联苯双酯
药剂学
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联苯双酯（bifendate,DDB）是人工合成五味子丙素的中间产物，是我国自主研发的一类保肝护肝药[1]。具有降酶、抗病毒、抗氧化、免疫调节等药理作用，临床上用于治疗慢性、迁延性肝炎伴谷丙氨酸转氨酶升高，也可用于治疗化学毒物、药物引起的谷丙氨酸转氨酶升高[2,3,4,5]。

由于联苯双酯在水中几乎不溶，溶解度约为2.5mg·L-1，导致其口服生物利用度很低，只有约20%～30%，溶解度低已经成为限制联苯双酯应用的首要因素[6]。有实验表明[7,8,9]，联苯双酯具有很好的体内外相关性，即体外溶出度越高，口服生物利用度越高。基于此，本文作者采用溶剂挥发法制备联苯双酯固体分散体，以提高其体外溶出度。

1、仪器与材料

YRE-5299旋转蒸发器（巩义予华仪器有限公司），BSA124S-CW电子分析天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司），DZX-6050B真空干燥箱（上海福玛实验设备有限公司），HITACHI高效液相色谱仪（日本日立公司），RC12AD智能溶出仪（天津天大天发科技有限公司），KQ-250B超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司），PHS-3BWpH计（上海般特仪器制造有限公司），DCS-1差示扫描量热仪（德国梅特勒公司），BrukerD8discoverX射线衍射仪（德国布鲁克AXS有限公司），EQUINOX55傅里叶红外光谱仪（德国布鲁克光谱仪器公司）

联苯双酯原料药（武汉远成共创科技有限公司），十二烷基硫酸钠（天津大茂化学试剂厂），泊洛沙姆188（德国巴斯夫），聚乙二醇6000（湖南尔康制药股份有限公司），聚维酮K30（安徽山河药用辅料股份有限公司），氢氧化钠、二氯甲烷（天津恒兴化学试剂有限公司），磷酸二氢钠（天津大茂化学试剂厂），其他试剂（分析纯，市售）。

2、方法与结果

2.1联苯双酯体外溶出度测定方法的建立

2.1.1溶出介质的选择

由于联苯双酯在水中溶解度很低，因此，需要在溶出介质中加入适量的表面活性剂十二烷基硫酸钠（sodiumdodecylsulfate,SDS），同时，考虑到体内外相关性，最终确定以质量分数为0.5%的SDS磷酸盐缓冲液作为溶出介质。

质量分数0.5%SDS磷酸盐缓冲液的配制：称取磷酸二氢钠6.895g、氢氧化钠0.896g和SDS5.0g，加水溶解并稀释至1000mL，调节pH值至6.8即可。

2.1.2最大吸收波长的确定

精密称取联苯双酯原料药适量，用甲醇稀释成适当质量浓度。以甲醇为空白对照，照《中华人民共和国药典》（2015年版）四部紫外-可见分光光度法（通则0401)[10]，在波长200～400nm内进行扫描。结果见图1。

图1联苯双酯紫外扫描图谱

由扫描结果可知，联苯双酯在波长278nm处有最大吸收，因此选择波长278nm作为联苯双酯溶出度测定的检测波长。

2.1.3色谱条件

色谱柱：KromasilC18(200mm×4.6mm,5μm）；流动相：甲醇-水（体积比70︰30）；检测波长：278nm；流速：1mL·min-1；柱温：30°C；进样量：20µL。

2.1.4线性与范围

精密称取联苯双酯原料药约15mg，置于100mL量瓶中，加甲醇适量，超声使其完全溶解。放冷至室温，用甲醇定容至刻度，即得约150mg·L-1的储备液。精密量取150mg·L-1的储备液适量，用质量分数0.5%SDS磷酸盐缓冲液分别稀释成0.75、1.5、3.0、4.8、6.0、9.0和12.0mg·L-1的系列标准溶液。精密量取系列标准溶液20μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（A）为纵坐标，质量浓度（ρ）为横坐标绘制标准曲线。回归方程为A=3.02×104ρ+1.16×103,r=0.9995，结果表明，质量浓度在0.75～12.0mg·L-1内，联苯双酯峰面积与质量浓度呈良好的线性关系。

2.1.5仪器精密度试验

精密量取150mg·L-1的储备液1mL于50mL量瓶中，用质量分数0.5%SDS磷酸盐缓冲液稀释定容至刻度线，配制成3.0mg·L-1的样品溶液。精密量取3.0mg·L-1的样品溶液20μL，注入高效液相色谱仪，连续进样6次，记录峰面积并计算相对标准偏差（RSD/%）。结果表明，仪器精密度RSD<1.0%，符合《中华人民共和国药典》（2015年版）要求，说明仪器精密度良好。

2.1.6溶液稳定性试验

精密量取150mg·L-1的储备液1mL于50mL量瓶中，用质量分数0.5%SDS磷酸盐缓冲液稀释至刻度线，配制成3.0mg·L-1的样品溶液，室温避光放置，分别于0、2、4、6、8、10和12h，精密量取20µL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积并计算相对标准偏差（RSD/%）。结果表明，RSD为0.28%，说明联苯双酯溶液在室温、避光条件下放置12h，稳定性良好。

2.1.7溶出度测定方法

照《中华人民共和国药典》（2015年版）溶出度与释放度测定法第二法，称取相当于联苯双酯25mg的固体分散体，装于1号胶囊壳中进行溶出度测定。以质量分数0.5%SDS磷酸盐缓冲液1000mL为溶出介质，溶出介质温度恒定在（37±0.5）°C，转速75r·min-1，依法操作，分别在10、20、30、45、60、90和120min取样10mL，同时用空白介质补足10mL。样品经0.45μm滤膜过滤，取续滤液1mL，加甲醇4mL稀释后作为供试品溶液。同时配制约3mg·L-1的对照品溶液。取上述溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算药物的累计溶出度。

2.2联苯双酯固体分散体的制备

2.2.1样品的制备

以常用的水溶性载体聚乙二醇6000(Polyethyleneglycol6000,PEG6000）、聚维酮K30(PovidoneK30,PVPK30）和泊洛沙姆188(Poloxamer188,P188）为载体，制备联苯双酯固体分散体。精密称取联苯双酯及PEG6000、PVPK30和P188适量，按照药物与载体质量比为1︰8的比例将其加入到茄型瓶中，再加入二氯甲烷适量，超声至完全溶解。将溶液于40°C条件下旋转蒸发除去有机溶剂，然后在真空干燥箱中干燥至有机溶剂完全挥干，将样品研磨后过180µm筛，置于干燥箱中备用。

按照药物与载体质量比为1︰8，精密称取联苯双酯及P188适量，采用等量递加法混匀后过180µm筛，作为物理混合物，放置于干燥箱中备用。

2.2.2载体的选择

取上述三种载体制备的联苯双酯固体分散体（相当于联苯双酯25mg），照“2.1.7”溶出度测定方法，考察不同载体对联苯双酯固体分散体溶出的影响。结果见图2。

图2不同载体制备的联苯双酯固体分散体溶出曲线(n=3)

由实验结果可以看出，三种载体制备的联苯双酯固体分散体中，联苯双酯的体外溶出度均高于联苯双酯原料药。其中，三种载体对联苯双酯的增溶效果依次为：P188>PVPK30>PEG6000，因此，选用P188为载体，继续考察不同载药量对联苯双酯固体分散体的影响。

2.2.3载体比例的考察

以P188为载体，按药辅比分别为1︰2、1︰5、1︰8、1︰10和1︰12制备联苯双酯固体分散体。照“2.1.7”溶出度测定方法，考察不同载药量对联苯双酯固体分散体溶出的影响。结果见图3。

图3不同比例P188制备的联苯双酯固体分散体溶出曲线(n=3)

由实验结果可以看出，以P188为载体，不同药辅比制备的联苯双酯固体分散体中，联苯双酯的体外溶出度均大于其原料药和物理混合物，且随着载体比例的增大，联苯双酯溶出度也随之增大。当药辅比为1︰8时，联苯双酯在30min内溶出度即可达到90%以上。

综上，采用溶剂挥发法，以P188为载体，药辅比为1︰8制备联苯双酯固体分散体。

2.3联苯双酯-P188固体分散体的表征

2.3.1差示扫描量热法

分别精密称取联苯双酯原料药、空白载体、物理混合物及固体分散体约3～5mg置于坩埚中，以空坩埚为参比，置于氮气流中，以10°C·min-1的速率升温，从30°C升温至200°C。结果见图4。

图4联苯双酯固体分散体DSC图谱

由扫描结果可知，联苯双酯原料药在180.8°C有吸热峰，P188在57.5°C有吸热峰，物理混合物中存在联苯双酯和P188共同的吸热峰；而在固体分散体中，联苯双酯的吸热峰完全消失，说明联苯双酯以无定型或者分子形式存在于固体分散体中。

2.3.2X射线粉末衍射法

分别取联苯双酯原料药、空白载体、物理混合物及固体分散体适量，进行XRPD分析。CuKa靶石墨单色器衍射束单色比，高压56kV，单流30mA，扫描2θ角度为3～40°，扫描速度为0.2°·s-1。结果见图5。

图5联苯双酯固体分散体XRPD图谱

由扫描结果可知，联苯双酯2θ在6.30°、12.55°、19.85°、23.80°、25.15°和31.00°存在明显的晶体衍射峰，P188在19.35°和23.55°处也存在晶体衍射峰，在物理混合物中存在两者共同的衍射峰，但有部分联苯双酯特征峰强度减弱；而在以P188为载体的固体分散体中，仍然在19.35°和23.55°处存在P188的晶体衍射峰，并不存在联苯双酯的晶体衍射峰，说明联苯双酯以无定型或者分子形式存在于固体分散体中。

2.3.3红外光谱法

分别取联苯双酯原料药、空白载体、物理混合物及固体分散体适量进行IR测定。采用溴化钾压片法进行测定，波长范围4000～400cm-1，分辨率为4cm-1。测定结果见图6。

图6联苯双酯固体分散体IR图谱

由红外图谱可知，联苯双酯在1716.3cm-1处有明显的羰基吸收峰，P188在3454.6cm-1处有明显的羟基吸收峰。在物理混合物中，存在两者的特征峰。在固体分散体中，联苯双酯在1716.3cm-1处的羰基吸收峰强度减弱，同时左移至1721.3cm-1,P188在3454.6cm-1处的吸收峰强度也明显减弱，同时左移至3457.4cm-1，说明联苯双酯与P188之间有氢键形成。

3、讨论

a.联苯双酯属于BCSⅡ类药物，溶解度低是限制其应用的首要因素。基于此，采用溶剂挥发法制备联苯双酯固体分散体，提高其体外溶出度，以期提高其口服生物利用度。

b.溶出试验结果表明，以PEG6000、PVPK30和P188三种载体制备的固体分散体中，以P188为载体制备的固体分散体对联苯双酯增溶作用最强。以P188为载体，不同药辅比制备的固体分散体中，联苯双酯体外溶出度均高于其原料药和物理混合物；且当药辅比为1︰8时，联苯双酯在30min内溶出度即可达到90%以上。DSC、XRPD和IR结果表明，联苯双酯与P188形成了氢键，联苯双酯在固体分散体中以分子形式或无定型存在。

c.对于难溶性药物联苯双酯来说，粒径大小会影响到其体外溶出度，但是，将联苯双酯制备成固体分散体后，联苯双酯在固体分散体中以分子形式或无定型存在，其溶解度会有所提升。因此，后续没有考察粒径大小对联苯双酯固体分散体溶出度的影响。

d.因为联苯双酯对热不稳定，因此不建议采用熔融法或者热熔挤出法等方法制备联苯双酯固体分散体。由于联苯双酯易溶于氯仿、二氯甲烷等有机溶剂，最终是以二氯甲烷为溶剂，采用溶剂挥发法制备联苯双酯固体分散体。对于溶剂残留问题，由于二氯甲烷沸点很低，易于挥发，所以将固体分散体在真空干燥箱中40℃条件下放置24h，尽可能完全的除去有机溶剂。因此，后期将不再对有机溶剂进行检测。

参考文献：

[7]田霞.联苯双酯过饱和自微乳制剂的研究[D].北京:中国人民解放军军事医学科学院,2011.

[8]刘悦.联苯双酯纳米混悬液的研究[D].济南:山东大学,2012.

[9]李慧.热熔挤出技术制备联苯双酯固体分散体的研究[D].沈阳:沈阳药科大学,2009.

[10]国家药典委员会.中华人民共和国药典:四部[M].北京:中国医药科技出版社,2015:38-40.

王群,魏忠莉,李青松,何仲贵.联苯双酯固体分散体的制备及表征[J].中国药剂学杂志,2020,18(02):93-100.