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壶腹癌组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2的表达特点

2024-10-14 117 上传者：管理员

摘要：目的探讨壶腹癌组织中人内源性逆转录病毒H长末端重复缔合蛋白2抗体（HHLA2）、埃滋蛋白（Ezrin）、人B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）的表达特点。方法选取壶腹癌患者52例。从胰十二指肠切除术后的标本中取适量的壶腹癌组织和距离肿瘤病灶约2 cm处的癌旁组织，免疫组化法检测组织标本中HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达情况。收集患者的人口学特征及肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤病理分期、淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润；出院后对患者进行3 a随访，记录生存情况。结果壶腹癌组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织（P<0.01）。HHLA2阳性率在不同分化程度、肿瘤病理分期、淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润情况的壶腹癌患者中比较差异具有统计学意义（P<0.05）;HHLA2阳性率在不同性别、年龄、肿瘤大小的壶腹癌患者中比较差异无统计学意义（P>0.05）。Ezrin、Bcl-2阳性率在不同淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润的壶腹癌患者中比较差异具有统计学意义（P<0.01）;Ezrin、Bcl-2阳性率在不同性别、年龄、分化程度、肿瘤大小、肿瘤病理分期的壶腹癌患者中比较差异无统计学意义（P>0.05）。52例壶腹癌患者3 a生存率为71.15%（37/52）。HHLA2、Ezrin、Bcl-2阳性的壶腹癌患者3 a生存率明显低于HHLA2、Ezrin、Bcl-2阴性的胃癌患者（log-rank χ2分别为13.528、16.705、12.911,均P<0.01）。ROC曲线分析显示，HHLA2、Ezrin、Bcl-2在预测壶腹癌患者生存情况中具有较高的应用价值（P<0.05）,其中，各指标联合检测对壶腹癌患者生存情况的预测价值最高（AUC=0.950,95%CI:0.895～0.983,P<0.001）。结论壶腹癌组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2高表达，且与病理参数和生存情况相关，联合检测对患者生存情况具有较高的预测价值。

关键词：
人B细胞淋巴瘤因子2
人内源性逆转录病毒H长末端重复缔合蛋白2
埃滋蛋白
壶腹癌
恶性肿瘤
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壶腹癌是一种发生在胆总管下端的恶性肿瘤，通常表现为黄疸、腹痛、消化道症状等。我国壶腹癌的发病率相对较低，但随着人们生活水平的提高和饮食结构变化，发病率呈逐渐上升趋势[1]。壶腹癌的治疗方案包括手术、放射治疗、化学治疗、靶向治疗和支持性治疗等，其中，手术切除是首选治疗方法，根据肿瘤位置和扩散程度，选择部分切除、全切除、根治性手术，旨在尽可能完整地切除肿瘤，减少肿瘤残留和侵袭[2]。壶腹癌患者治疗方案的制定需要综合考虑肿瘤特点、患者个体差异、治疗风险和收益等多个因素，准确评估患者预后具有重要参考价值[3]。HHLA2是一种新发现的共刺激因子，过表达与肿瘤进展相关[4];Ezrin是一种负责细胞黏附和侵袭的蛋白，过表达与恶性肿瘤发生、转移有关[5];抗凋亡蛋白Bcl-2过表达可导致肿瘤细胞的抗凋亡性增强，从而促进肿瘤生长和扩散[6]。上述3种蛋白在肿瘤组织中的异常表达可作为肿瘤诊断和治疗标志物[7]。本研究主要探讨壶腹癌组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2的表达特点及对患者预后的预测价值。

1、对象与方法

1.1 研究对象

选取2019年11月—2023年9月黑龙江省医院收治的壶腹癌患者52例，其中，男31例，女21例；年龄48～76岁，平均(59.21±6.43)岁；分化程度：低分化10例，中分化28例，高分化14例；肿瘤大小：≤2 cm 21例，>2 cm 31例；肿瘤病理分期：Ⅰ～Ⅱ期32例，Ⅲ～Ⅳ期20例；淋巴结转移32例，十二指肠浸润38例，胰腺浸润35例。本研究经医院医学伦理委员会审核通过，患者知情同意。

纳入标准：行胰十二指肠切除术后病理诊断为壶腹癌；术前无抗肿瘤治疗史；能够持续配合完成随访。

排除标准：合并心脏、肝脏等其他重要器官功能障碍者；由于并发症需要行二次手术者；只接受姑息性手术的患者。

1.2 方法

1.2.1 壶腹癌组织和癌旁组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2的表达

从胰十二指肠切除术后的标本中取适量的壶腹癌组织和距离肿瘤病灶约2 cm处的癌旁组织，使用多聚甲醛固定后进行石蜡包埋，4 μm切片，固定在载玻片上，进行脱脂、脱水、去蜡等处理，以保证蛋白的稳定性。将样本浸泡在热缓冲液中，恢复组织中的抗原活性。涂抹一抗(兔抗人HHLA2单克隆抗体(1:800稀释)、兔抗人Ezrin单克隆抗体(1:300稀释)、兔抗人Bcl-2单克隆抗体(1:1 000稀释));与目标蛋白结合，加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG,反应2 h; 加入DAB底物进行显色反应，用蒸馏水冲洗载玻片以停止显色反应；显微镜下观察并拍摄。染色强度评估：0(无染色)、1+(弱阳性染色)、2+(中等阳性染色)、3+(强阳性染色);阳性细胞比例评估：0(<10%)、1+(10%～30%)、2+(31%～60%)、3+(>60%)。计算以上两项评分的乘积，>3分为阳性表达。

1.2.2 资料收集与随访

收集患者的人口学特征及肿瘤分化程度、肿瘤大小、肿瘤病理分期、淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润。出院后对患者进行3 a随访，每月随访1次，随访方式包括电话、上门拜访、门诊复查，与患者沟通，了解患者恢复及生存状况。

1.3 统计学分析

应用SPSS 25.0对数据进行处理与统计学分析。计数资料以例数、百分率(%)表示，组间比较进行χ2检验，患者生存情况进行Kaplan-Meier生存曲线分析；HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达对患者生存情况的预测价值进行ROC曲线分析。P<0.05为差异具有统计学意义。

2、结果

2.1 不同组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2的表达情况

本研究结果显示，壶腹癌组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2蛋白表达阳性率为71.15%、92.31%、80.77%,明显高于癌旁组织(P<0.01),见表1。

表1 不同组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2的表达情况

2.2 HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达与壶腹癌临床病理参数的关系

本研究结果显示，HHLA2阳性率在不同分化程度、肿瘤病理分期、淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润的壶腹癌患者中比较差异具有统计学意义(P<0.05);HHLA2阳性率在不同性别、年龄、肿瘤大小的壶腹癌患者中比较差异无统计学意义(P>0.05)。Ezrin、Bcl-2阳性率在不同淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润的壶腹癌患者中比较差异具有统计学意义(P<0.01);Ezrin、Bcl-2阳性率在不同性别、年龄、分化程度、肿瘤大小、肿瘤病理分期的壶腹癌患者中比较差异无统计学意义(P>0.05),见表2。

表2 HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达与壶腹癌临床病理参数的关系

2.3 HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达与壶腹癌患者生存情况的关系

本研究结果显示，52例壶腹癌患者3 a生存率为71.15%(37/52),HHLA2、Ezrin、Bcl-2阳性的壶腹癌患者3 a生存率明显低于HHLA2、Ezrin、Bcl-2阴性的胃癌患者(log-rankχ2分别为13.528、16.705、12.911,均P<0.01),见图1。

图1 不同HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达的壶腹癌患者Kaplan-Meier生存曲线

图2 HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达对壶腹癌患者生存情况预测价值的ROC曲线

2.4 HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达对壶腹癌患者生存情况的预测价值

以HHLA2、Ezrin、Bcl-2预测壶腹癌患者生存情况的敏感度为纵坐标，以1-特异度为横坐标，曲线下面积(AUC)用来衡量模型的性能，AUC越大模型性能越好。结果显示，HHLA2、Ezrin、Bcl-2在预测壶腹癌患者生存情况中具有较高的应用价值，其中，各指标联合检测对壶腹癌患者生存情况的预测价值最高(AUC=0.950),特异度、阳性评估值均明显高于各指标单独检测，见图2、表3。

表3 HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达对壶腹癌患者生存情况的预测价值

3、讨论

我国壶腹癌的发病年龄主要分布在50岁以上，男性发病率略高于女性，其流行趋势可能受到饮食习惯、遗传因素、环境暴露、医疗条件等多种因素影响[8]。近年来随着我国各地医疗机构积极开展肿瘤筛查项目，推广健康知识，加强公众的防癌意识，壶腹癌的检出率不断提高[9]。病理学检查在壶腹癌诊断和治疗中具有极高价值，通过分析肿瘤组织样本可以确诊壶腹癌及其分化程度。此外，壶腹癌手术治疗、辅助治疗等治疗选择也依赖于病理学检查结果[10]。在治疗过程中，定期进行病理学检查可以监测治疗效果，有助于及时调整治疗方案。近年来，壶腹癌临床治疗的首选方法是手术，化疗和放疗作为手术的补充治疗也被临床广泛使用[11];对于不适合手术的患者，内镜下胆管扩张和支架放置等内镜下治疗也能缓解症状和延长患者生存时间[12]。随着精准医疗的发展，针对特定分子靶点的药物治疗和免疫治疗也为壶腹癌患者提供了新的治疗选择[13]。壶腹癌的诊断和治疗依赖于综合多学科力量，准确预测患者预后具有重要参考价值。

HHLA2是一种与肿瘤发生、发展密切相关的分子，在结肠癌、肺癌等恶性肿瘤中HHLA2高表达，HHLA2可能参与了肿瘤的增殖、转移、侵袭过程[14]。此外，HHLA2还可能与肿瘤的免疫逃逸机制有关，影响肿瘤细胞的免疫反应[15]。Ezrin属于细胞骨架蛋白，在细胞形态维持、细胞极性、细胞运动、细胞间连接及细胞信号转导中发挥重要作用[16]。Ezrin的过表达或异常定位与肿瘤细胞的侵袭、转移有关，可通过促进细胞之间及细胞与基质之间的黏附增强肿瘤细胞的迁移能力；Ezrin还作为信号分子的接头参与细胞内信号转导，影响细胞增殖、分化[17]。Bcl-2在调节程序性细胞死亡中发挥关键作用，通过调节细胞凋亡的途径控制细胞生存和死亡，参与维持正常细胞周期[18]。在肿瘤中，Bcl-2的异常表达与多种癌症发展和治疗抵抗性有关，过度表达通常会导致细胞凋亡抑制，使癌细胞能够逃避程序性死亡，从而促进肿瘤生长、侵袭和转移[19];此外Bcl-2的过度表达还与化疗和放疗的抵抗性有关，增加肿瘤治疗难度[20]。

本研究结果显示，壶腹癌组织中HHLA2、Ezrin、Bcl-2蛋白表达阳性率明显高于癌旁组织(P<0.01),提示HHLA2、Ezrin、Bcl-2蛋白高表达可能参与壶腹癌的发生与发展。HHLA2表达与壶腹癌分化程度、肿瘤病理分期、淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润密切相关；Ezrin、Bcl-2表达与淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润密切相关。肿瘤的分化程度是指肿瘤细胞与其原始组织细胞之间的相似度，分化程度越低，肿瘤细胞与原始组织细胞的差异越大；肿瘤病理分期是根据肿瘤大小、侵犯深度、局部淋巴结转移及是否有远处器官转移等评估，有助于决定治疗方案和预测患者预后。HHLA2表达可用于评估壶腹癌分化程度和病理分期，为病情评估提供参考依据。HHLA2、Ezrin、Bcl-2蛋白表达与淋巴结转移、十二指肠浸润、胰腺浸润相关，提示其可用于肿瘤诊断、治疗和预后评估。Kaplan-Meier生存曲线分析显示，HHLA2、Ezrin、Bcl-2阳性的壶腹癌患者3 a生存率明显低于阴性表达患者(P<0.01);ROC曲线分析显示，HHLA2、Ezrin、Bcl-2在预测壶腹癌患者生存情况中具有较高的应用价值，其中，各指标联合检测的预测价值最高，提示HHLA2、Ezrin、Bcl-2表达与壶腹癌患者生存情况密切相关，联合检测可为患者治疗方案的合理制定提供参考。

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