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结直肠癌组织中ARPC4的表达意义及其对侵袭能力的影响

2020-06-19 434 上传者：管理员

摘要：目的探讨肌动蛋白相关蛋白2/3复合体4(ARPC4)在结直肠癌组织中的表达及其对侵袭能力的影响。方法选择结直肠癌患者78例，取所有患者手术切除的癌灶组织标本(病灶组)与癌旁结肠粘膜组织(癌旁组)，采用免疫组化法检测ARPC4表达水平，调查患者的一般资料、病理特征并进行相关性分析。结果在78例患者中，病灶组的ARPC4表达阳性率为80. 8%，显著高于癌旁组的28. 2%(P <0. 05)。不同肿瘤大小、临床分期、局部侵袭、淋巴结转移等患者的ARPC4表达阳性率对比差异有统计学意义(P <0. 05)。Pearson直线相关性分析显示:临床分期、局部侵袭、淋巴结转移与患者的ARPC4表达阳性率存在显著相关性(P <0. 05)。COX回归分析显示:临床分期、淋巴结转移、ARPC4表达阳性率为导致局部侵袭的影响因素(P <0. 05)。结论 ARPC4在结直肠癌组织中呈现高表达状况，与患者的临床特征密切相关，且可影响结直肠癌的局部侵袭能力。

关键词：
局部侵袭
淋巴结转移
结直肠癌
肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)复合体4
肿瘤
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结直肠癌(Colorectal Cancer;CRC)是最常见的消化道恶性肿瘤之一[1,2]。已有研究显示结直肠癌的发生是个多基因、多步骤、多阶段性的演变过程，在其癌变过程中涉及到许多基因的表达异常[3,4]。肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)复合体(ARPC)4是Arp2/3复合体的1个亚基，是由7个亚单位组成的椭球状复合体，包括两个肌动蛋白相关蛋白Arp2和Arp3亚基，以及5个附属亚基[5]。ARPC4介导的肌动蛋白核化在细胞的多种生理活动中发挥重要作用，能够促进肌动蛋白单体核化装配形成微丝，在维持细胞形态、构成细胞骨架及运动等方面发挥调节作用[6]。并且RPC4可介导PI3K/Akt和TGF-β等相关通路的调控，促进肺癌、卵巢癌细胞的增殖、侵袭及迁移[7,8]，但是在结直肠癌的作用特征还不太明确。本文具体探讨了ARPC4在结直肠癌组织中的表达及其对侵袭能力的影响，希望为阐明结直肠癌发生发展提供1个新的思路。现总结报告如下。

1、材料与方法

1.1 研究对象

2017年2月至2019年6月选择在我院收治的结直肠癌患者78例，纳入标准:临床与病理学资料完整;患者年龄20～70岁;病理取样前均未接受化疗、放疗及生物治疗;医院伦理委员会批准了此次研究;病理确诊为结直肠癌。排除标准:合并其它肿瘤;临床与病理资料缺乏者。

在78例患者中，男性40例，女性38例;年龄≥60岁52例，<60岁26例;体重指数≥26 kg/m215例，<26 kg/m263例;肿瘤大小≥5 cm 36例，<5 cm 42例;病理类型:鳞癌45例，腺癌33例;临床分期:Ⅰ期35例，Ⅱ期25例，Ⅲ期18例;局部侵袭22例;淋巴结转移32例。

1.2 标本采集

取所有患者手术切除的癌灶组织标本(病灶组)与癌旁结肠粘膜组织(距肿瘤边缘≥3 cm，癌旁组)。

标本离体后立即经4%的中性甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋。通过查阅电子和纸质版病例档案，收集患者的年龄、性别、肿瘤大小、病理类型、临床分期、局部侵袭、体重指数、远期转移等资料。

1.3 ARPC4表达检测

SP-9001免疫组化染色试剂盒购自中杉金桥公司，抗ARPC4抗体购自美国Sigma公司。标本制成5μm厚切片供定位染色，在切片上典型位置做好标志后将相应供体蜡块对应部位确定为取材位点，采用微阵列仪打孔，采样长度约0.8 cm，采样针直径1.5 mm。然后将组织切片脱蜡、水化并进行抗原修复，去除内源性过氧化物酶，在切片上滴加适量山羊血清工作液封闭，室温20 min。配制ARPC4一抗稀释液(1∶400稀释);倒去组织切片上封闭血清后放入湿盒中，滴加适抗稀释液，4℃孵育过夜;PBS洗4次，每次5 min;滴加适量酶标羊抗兔二抗(1∶2000稀释)，室温20 min。DAB显色、苏木精复染与封片，在免疫镜下观察。

ARPC4主要定位于细胞胞质，阳性呈棕黄色或褐色颗粒。采用半定量的方法进行阳性判断，细胞染色百分率:0分:无阳性细胞，1分:1%～25%阳性细胞，2分:26%～50%阳性细胞;3分:51%～75%阳性细胞，4分:≥75%阳性细胞;细胞染色强度:0分:未染色，1分:弱染色(浅棕黄色)，2分:中等染色(棕黄色)，3分:强染色(棕褐色)。以细胞染色百分率×细胞染色强度为染色记分，强阳性(9～12分)，弱阳性(4～8分)，阴性(0～3分)，(强阳性+弱阳性)/本组例数×100.0%=阳性率。

1.4 统计学方法

应用SPSS 22.00软件完成数据分析，计量资料的对比采用t检验，计数数据的对比采用卡方χ2检验或者方差分析，相关性分析采用Pearson直线相关性分析，采用COX回归分析相关因素，检验水准为α=0.05。

2、结果

2.1 ARPC4表达阳性率对比

在78例患者中，病灶组的ARPC4表达阳性率为80.8%(63/78)，显著高于癌旁组的28.2%(22/78)(χ2=31.151,P=0.000,P<0.05)。

2.2 ARPC4表达阳性率与临床特征的相关性

在78例患者中，不同性别、年龄、体重指数、病理类型等患者的ARPC4表达阳性率对比差异无统计学意义(P>0.05)，而不同肿瘤大小、临床分期、局部侵袭、淋巴结转移等患者的ARPC4表达阳性率对比差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1结直肠癌不同临床特征患者ARPC4表达对比(例，%)

Pearson直线相关性分析显示:临床分期、局部侵袭、淋巴结转移与患者的ARPC4表达阳性率存在显著相关性(P<0.05)，见表2。

表2 ARPC4在结直肠癌组织中的表达与临床特征的相关性

2.3 影响因素分析

在78例患者中，以局部侵袭作为因变量，以临床特征与ARPC4表达作为自变量，COX回归分析显示临床分期、淋巴结转移、ARPC4表达阳性率为导致局部侵袭的影响因素(P<0.05)。见表3。

表3影响结直肠癌患者局部侵袭的因素分析

3、讨论

结直肠癌是我国癌症相关死亡的主要原因之一，虽有该病的治疗方法比较多，但是其预后生存率一直比较低[9]。并且部分患者首次诊断时已是局部晚期或转移性疾病，失去了根治性手术切除的机会[10]。结直肠癌的侵袭性比较强，其中细胞恶性增殖和肿瘤血管形成是结直肠癌发生与发展的基础，特别是结直肠癌是个血供丰富的肿瘤，为此了解结直肠癌血供发生的机制具有重要的价值[11]。

ARPC蛋白包括7个亚单位，各7单位之间相互联系，可形成1个“C”形的钳状结构。其中具有3个高亲水性的线性表位，抗原表位在蛋白表面的空间位置，均位于蛋白质分子表面，易被特异性抗体所识别和结合，对抗原与抗体的结合有较大的影响[12]。ARPC能够促进结恶性肿瘤在基质中的运动性，进而为肿瘤细胞的浸润提供更适合的环境。并且ARPC可通过磷酸化来发挥它的生物学活性，磷酸化降低了ARPC蛋白的稳定性，从而使ARPC能够发挥生物学功能[13]。ARPC通过抑制p53蛋白和Bax蛋白表达，使线粒体膜通透性降低，从而与细胞周期和细胞增殖活性相关，抑制细胞凋亡或者通过抑制caspase-3蛋白的活性，抑制细胞凋亡，促进细胞增殖[14,15]。本研究显示在78例患者中，病灶组的ARPC4表达阳性率为80.8%，显著高于癌旁组的28.2%;不同肿瘤大小、临床分期、局部侵袭、淋巴结转移等患者的ARPC4表达阳性率对比差异有统计学意义，表明结直肠癌患者伴随有ARPC4高表达，且与患者的临床特征显著相关。当前也有研究显示ARPC4在肺癌、头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、肝细胞癌、肺癌多种肿瘤中存在高表达，也可促进肿瘤细胞的脑转移和肺转移[16]。

结直肠癌患者的手术后复发和侵袭是导致结直肠癌患者最终死亡的关键因素，因此及早发现和诊断结直肠癌可以为患者提供良好的治疗机会，改善患者的预后[17]。内皮细胞的黏着连接在机体生命过程中都是极其重要的，通过与肌动蛋白微丝细胞骨架的相互作用来调控，其中catenin与cadherin结合并形成catenin/cadherin复合体，进而维持细胞之间的黏附性[18,19]。而ARPC4够抑制catenin/cadherin复合体的形成，促进细胞周期相关基因并调节侵袭转移相关基因的转录，使得catenin在细胞质内大量聚集，并进一步入核，促进肿瘤细胞侵袭和转移[20]。并且ARPC4是组成Arp2/3复合体的亚单位，可以促进微丝合成，从而在肿瘤侵袭中发挥重要作用[21]。本研究Pearson直线相关性分析显示结直肠癌患者的临床分期、局部侵袭、淋巴结转移与患者的ARPC4表达阳性率存在显著相关性;COX回归分析显示临床分期、淋巴结转移、ARPC4表达阳性率为导致局部侵袭的影响因素。还有研究发现ARPC4在具有双向调节作用，在黑色素瘤细胞中，适当下调该基因的表达可以诱导细胞的恶性转移，但大量减少缺没有逆转这一效应[22]。本研究也存在一定的不足，没有具体分析ARPC4的作用机制，也没有进行体内模型分析，将在后续研究中进行分析。

总之，ARPC4在结直肠癌组织中呈现高表达状况，与患者的临床特征密切相关，且可影响结直肠癌的局部侵袭能力。

参考文献：

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