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胃癌诊断及预后评估中血清LncRNAMIAT、MMP-2、MMP-9的价值

2020-06-29 332 上传者：管理员

摘要：目的探讨血清长链非编码RNA心肌梗死转录本(LncRNAMIAT)、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9在胃癌诊断及预后评估中的价值。方法选取2014年4月至2016年9月于随州市中医医院确诊的胃癌患者120例为胃癌组,130例胃良性疾病患者为良性病变组,同期体检健康者120例为对照组。比较各组LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9水平;分析LncRNAMIAT、MMP-2、MMP-9水平与胃癌病理特征的关系;分析LncRNA、MMP-2、MMP-9对胃癌的诊断价值、预测价值及对预后的影响。结果胃癌组血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9水平均高于良性病变组与对照组(P<0.05)。血清LncRNAMIAT、MMP-2、MMP-9水平与肿瘤部位无明显关系(P>0.05),与胃癌的TNM分期及组织学类型有关(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9联合检测诊断胃癌的曲线下面积为0.937,灵敏度为79.9%,特异度为94.3%。危险因素分析结果显示,血清LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9是胃癌发生的独立危险因素(P<0.05)。生存曲线分析结果显示,相比低水平LncRNAMIAT患者,高水平LncRNAMIAT患者中位生存时间明显缩短(P<0.05);相比低水平MMP-2患者,高水平MMP-2患者中位生存时间明显缩短(P<0.05);相比低水平MMP-9患者,高水平MMP-9患者中位生存时间明显缩短(P<0.05)。结论血清LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9在胃癌的诊断及预后评估中具有一定价值。

关键词：
基质金属蛋白酶-2
基质金属蛋白酶-9
肿瘤
胃癌
长链非编码RNA心肌梗死转录本
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胃癌是对全球公共卫生造成巨大负担的恶性肿瘤之一。据报道，2018年全球新发胃癌病例约为1033701例，死亡病例约为782685例[1]。有研究发现，长链非编码RNA心肌梗死转录本（LncRNAMI-AT）在多种消化系统肿瘤，如结直肠癌、肝癌等的发生、发展过程中具有重要作用[2,3]。基质金属蛋白酶（MMP)-2和MMP-9均属于蛋白水解酶，在肿瘤侵袭、转移中发挥着重要作用[4,5]。目前，关于LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9在胃癌中的研究较少，故本研究通过探讨LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9水平在胃癌诊断和预后评估中的应用价值，旨在为临床工作提供参考。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2014年4月至2016年9月于随州市中医医院确诊的胃癌患者120例为胃癌组，其中男85例，女35例；年龄42～76岁，平均（54.2±8.4）岁；有吸烟史者73例；有饮酒史者94例；体质量指数（BMI）为（25.3±2.1)kg/m2;TNM[6]分期：Ⅰ～Ⅱ期74例，Ⅲ～Ⅳ期46例；肿瘤部位：胃窦部71例，胃体部37例，胃底部12例；组织学类型：管状腺癌41例，乳头状腺癌36例，黏液腺癌27例，印戒细胞癌16例。选取同期住院治疗的130例胃良性疾病患者为良性病变组，其中男92例，女性38例；年龄40～77岁，平均（55.2±9.1）岁；有吸烟史者69例；有饮酒史者101例；BMI为（24.2±1.3)kg/m2；其中胃平滑肌瘤58例，胃腺肌瘤40例，胃纤维瘤21例，胃神经纤维瘤11例。选取同期体检健康者120例为对照组，其中男82例，女38例；年龄45～71岁，平均（54.8±8.8）岁；有吸烟史者59例；有饮酒史者98例；BMI为（24.8±1.5)kg/m2。3组年龄、性别、吸烟史、饮酒史、BMI等一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。对120例胃癌患者进行为期50个月的随访。

1.2血清MMP-2与MMP-9水平检测

采用酶联免疫吸附试验检测各组血清MMP-2、MMP-9水平，采用美国赛默飞世尔公司NanodropND2000分析仪检测吸光度。

1.3血清LncRNAMIAT水平检测

提取血清总RNA，采用实时荧光定量PCR仪（美国Bio-Rad公司C1000型）进行检测。采用PrimerPremier5.0进行PCR引物设计，引物合成由北京赛百盛基因技术有限公司提供，LncRNAMIAT与GAPDH（内参）引物序列见表1。采用2-ΔCt计算LncRNAMIAT的相对表达水平，结果用对数形式表示。

表1LncRNAMIAT和GAPDH引物序列

1.4统计学处理

采用SPSS19.0软件进行数据分析。计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验；采用Kolmogorov-Smirnov进行正态性检验，正态分布的计量资料以±s表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，多组间两两比较采用SNK-q检验；非正态分布的计量资料以M表示，两组间比较采用Mann-WhitneyU检验；采用受试者工作特征曲线（ROC曲线）进行诊断效能分析；采用Logistic回归进行危险因素分析；采用Kaplan-Meier法进行生存曲线分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1各组血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9水平比较

各组血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9水平比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。其中，胃癌组血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9水平均高于良性病变组与对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2各组血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9水平比较

2.2血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9水平与胃癌病理特征的关系

血清LncRNAMIAT、MMP-2、MMP-9水平与肿瘤部位无明显关系（P>0.05），而与胃癌的TNM分期及组织学类型有关（P<0.05），血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9水平在TNMⅢ～Ⅳ期和印戒细胞癌患者中增高最为明显。见表3。

表3血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9水平与胃癌病理特征的关系

2.3血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9单独及联合检测诊断胃癌的效能

ROC曲线分析结果显示，血清LncRNAMIAT单独检测诊断胃癌的曲线下面积（AUC）为0.887，高于MMP-2和MMP-9单独检测。LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9联合检测的AUC(0.937）高于各项指标单独检测，灵敏度为79.9%，特异度为94.3%。见图1、表4。

图1血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9单独及联合检测诊断胃癌的ROC曲线

表4血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9单独及联合检测诊断胃癌的效能

2.4危险因素分析

将是否患胃癌作为因变量，血清LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9水平作为自变量，进行危险因素分析。单因素分析结果显示，血清LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9是胃癌发生的危险因素（P<0.05）；多因素分析结果显示，血清LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9是胃癌发生的独立危险因素（P<0.05）。见表5。

表5危险因素分析结果

2.5生存曲线分析

50个月的随访完成时，120例胃癌患者中死亡72例，无失访。以胃癌患者血清LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9水平的中位数（LncRNAMIAT为13.4,MMP-2为42.5pg/mL,MMP-9为33.1pg/mL）为界值，将120例患者分为高、低水平LncRNAMIAT，高、低水平MMP-2和高、低水平MMP-9胃癌患者。相比低水平LncRNAMIAT患者（中位生存时间50个月），高水平LncRNAMIAT患者（中位生存时间27个月）中位生存时间明显缩短（P<0.05),Kaplan-Meier生存曲线见图2A；相比低水平MMP-2患者（中位生存时间50个月），高水平MMP-2患者（中位生存时间28个月）中位生存时间明显缩短（P<0.05),Kaplan-Meier生存曲线见图2B；相比低水平MMP-9患者（中位生存时间50个月），高水平MMP-9患者（中位生存时间33个月）中位生存时间明显缩短（P<0.05),Kaplan-Meier生存曲线见图2C。

图2高、低水平血清MIAT、MMP-2和MMP-9胃癌患者的Kaplan-Meier生存曲线分析

3、讨论

LncRNAMIAT作为肿瘤基因参与多种不同类型肿瘤的发展，尤其在消化道肿瘤发病机制中的研究已取得较大进展。在结直肠癌中，LIU等[7]在癌组织、直肠癌LOVO和SW480细胞系中检测到LncRNAMIAT水平较癌旁组织和人正常结肠细胞系HcoEpic中的水平均明显增高，机制研究指出，LncRNAMIAT可通过下调miRNA-132促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭、转移，并抑制细胞凋亡。在胰腺癌中，LI等[8]研究指出，LncRNAMIAT在胰腺癌组织和胰腺癌细胞系PATU-8988、BxPC-3、PANC-1、SW1990和AsPC-1中的表达水平较癌旁组织和人正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7均明显增高，且高表达的LncRNAMIAT与胰腺癌的转移和增殖相关。在胃癌中，研究者发现LncRNAMIAT可通过EGFR信号通路调控细胞的增殖，参与细胞周期阻滞、细胞凋亡、上皮间质转化、细胞迁移和侵袭等过程，其水平在胃癌发生早期即可出现增高趋势[9,10]；另一方面，LncRNAMIAT水平还可在一定程度上反映肿瘤细胞的增殖活性[9]。本研究发现，LncRNAMI-AT在胃癌患者血清中的水平高于良性病变组和对照组，且其水平与胃癌的TNM分期及组织学类型有关，TNMⅢ～Ⅳ期和印戒细胞癌患者的LncRNAMIAT水平升高最为明显，这些发现与SHA等[9]、LI等[10]的研究结果一致。此外，LI等[10]的研究还提示，LncRNAMIAT可以促进胃癌细胞的增殖与侵袭，说明高水平的血清LncRNAMIAT与胃癌的不良预后相关。

MMP-2、MMP-9是肿瘤细胞侵袭、转移过程中的两个关键酶，二者的激活可以形成Ⅳ型胶原酶，降解细胞外基质，破坏完整的基底膜，促进肿瘤细胞浸润周围组织，侵入血管和淋巴管，向远处转移[11,12]。目前，关于MMP-2、MMP-9与胃癌的相关研究已取得较大进展。WANG等[13]对94例胃癌组织标本中MMP-2、MMP-9的水平进行检测发现，MMP-2及MMP-9在胃癌组织中的水平均高于癌旁组织，且二者与胃癌的临床分期相关。O-6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶（MGMT）是重要的肿瘤抑制物，在结直肠癌、食管癌等消化道肿瘤中均有报道[14,15]。机制研究指出，MGMT可通过下调MMP-2的表达而抑制胃癌的进展[16]。LU等[17]的体外研究发现，高表达MMP-2、MMP-9的胃癌细胞可通过p38MAPK信号通路增强细胞的侵袭与转移能力，这可能是高水平MMP-2、MMP-9预示胃癌不良预后的原因之一。本研究发现，胃癌患者血清MMP-2、MMP-9水平高于良性病变组和对照组，且在TNMⅢ～Ⅳ期和印戒细胞癌患者中的增高最为明显，与上述基础研究结果一致[13,17]。

ROC曲线分析结果显示，联合LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9检测诊断胃癌的AUC为0.937，特异度达94.3%，提示3项指标联合检测具有较高的临床应用价值。此外，血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9是胃癌发病的独立危险因素，且高水平LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9患者的预后较低水平患者差，提示血清LncRNAMIAT、MMP-2与MMP-9在胃癌诊断及预后评估中具有重要的临床价值。

4、结论

综上所述，联合检测血清LncRNAMIAT、MMP-2和MMP-9对胃癌的诊断、发病风险预测及预后评估均具有重要意义，有望为胃癌的临床诊疗提供新的途径。

吴波,刘伶俐,聂丹文.血清LncRNAMIAT､MMP-2､MMP-9在胃癌诊断及预后评估中的价值[J].国际检验医学杂志,2020,41(12):1491-1495.