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TLR4基因多态性与宫颈癌及癌前病变的相关性分析

2025-04-17 42 上传者：管理员

摘要：目的探讨TLR4基因多态性与宫颈癌及癌前病变的相关性。方法采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术，对80例宫颈癌患者(宫颈癌组)和30例宫颈癌前病变患者(对照组)样本的rs4986790、rs10759931、rs11536889位点进行基因分型。结果两组年龄、孕次、产次比较，P>0.05,两组初婚年龄比较，P<0.05;TLR4基因不同SNPs位点等位基因和基因型分布进行比较，P<0.01,而rs1927911的基因型分布2组间比较，P>0.05。校正初婚年龄后，rs4986790的AG基因型、rs10759931的GG基因型和rs11536889的CC基因型与宫颈癌的发病风险增加有关(P<0.05),单倍型G-A-G-T、G-A-C-C和A-A-C-T与宫颈癌的发生发展相关(P<0.05)。结论 TLR4基因多态性可能作为宫颈癌前病变和宫颈癌的潜在预测标志物，可为宫颈癌的早期诊断和预防提供一定的依据。

关键词：
HPV
人乳头状瘤病毒
宫颈癌
宫颈癌前病变
恶性肿瘤
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宫颈癌是全球女性常见的恶性肿瘤之一,尤其在发展中国家仍然是一个严重的公共卫生问题[1]｡根据世界卫生组织的数据[2],每年全球约有53万例宫颈癌新发病例,约有26万例死亡病例其中,发展中国家的宫颈癌发病和死亡人数占全球总数的85%以上｡尽管宫颈癌的发生和发展与多个因素相关,但高危人乳头状瘤病毒(HPV)的感染被广泛认为是宫颈癌的主要致病因素[3]｡尽管HPV感染在宫颈癌的发展中起着重要作用,但并不是所有感染HPV的女性都会发展为宫颈癌,这表明其他遗传和环境因素可能对宫颈癌的发病起到重要作用[4-5]｡TLR4(Toll样受体4)是一种重要的免疫调节分子[6],其参与调控宿主免疫应答和炎症反应｡TLR4基因存在多个多态性位点,这些位点的基因型和等位基因的分布差异可能导致免疫应答的差异,进而影响宫颈癌的进展和发病[7]｡近年来,越来越多的研究关注TLR4基因多态性与肿瘤的关联,并且在多种肿瘤中发现了与TLR4基因多态性相关的风险因子[8-9]｡然而,TLR4基因多态性与宫颈癌前病变和宫颈癌的相关性仍然存在争议,且目前关于TLR4基因多态性与宫颈癌的研究相对较少｡因此,本研究旨在探讨TLR4基因多态性与宫颈癌前病变和宫颈癌的相关性,为宫颈癌的早期预防､诊断和治疗提供新的分子标志物和治疗靶点,内容如下｡

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2021年1月至2023年12月在本院收治的宫颈癌患者80例(宫颈癌组)以及宫颈癌前病变患者30例(CIN组)｡纳入标准:年龄在18岁以上,女性;经阴道宫颈涂片､宫颈生物检测或宫颈组织活检诊断为宫颈癌或CIN;宫颈癌组病例为初诊或复发,未接受放化疗､手术或免疫治疗;CIN组病例为CIN1-3级,未接受治疗或CIN复发患者;病例有完整的临床资料和基本信息｡排除标准:孕妇或哺乳期女性;有其他原发性肿瘤或严重的基础疾病;曾接受过放化疗､手术或免疫治疗;无完整的临床资料和基本信息｡

1.2方法

1.2.1样本基因组DNA提取宫颈癌组和CIN组患者每个人收集2ml外周静脉血,将血液样品置于EDTA抗凝血管内,并于24小时内进行基因组DNA提取｡基因组DNA的提取使用Qiagen血液DNA提取试剂盒(Qiagen,USA)操作,按照提供的指南进行｡提取过程中会测量DNA浓度和纯度,并进行质量控制｡提取出的基因组DNA将被用作后续基因检测的模板｡

1.2.2SNP位点的选择和基因分型选取与TLR4基因多态性密切相关的四个SNP位点:rs4986790､rs10759931､rs11536889和rs1927911进行研究｡每个位点的基因型分布将使用PCR扩增和RFLP分析｡PCR反应条件包括:模板DNA1μl､10XPCR缓冲液2.5μl､MgCl21.5μl､dNTP0.5μl､引物(10μM)0.5μl､TaqDNA聚合酶0.5μl和去离子水17.5μl,总体积为25μl｡PCR反应条件为:95℃预变性2min,94℃变性30秒,引物退火温度,延伸72℃,最后延伸5min｡扩增产物用于RFLP在特定位点的限制酶切割并进行凝胶电泳,以检测目标SNP位点不同等位基因的分布情况｡同一实验中同时进行阳性对照和阴性对照｡最后,基因型的分析将由两个独立的评估者进行,重复率在20%以上｡为了保证结果的准确性,检测结果将在两个独立实验中复核｡

1.3统计学方法

应用SPSS27.0和Haploview4.2分析｡计量资料以均数±标准差(x±s)表示,采用独立样本t检验;计数资料以率(%)表示,采用χ2检验,Hardy-Weinberg平衡检验采用拟合优度χ2检验,连锁平衡检验和单倍型分析采用Haplo-view4.2分析｡

2、结果

2.1两组临床资料比较两组临床资料在年龄､孕次､产次方面比较,P>0.05,两组初婚年龄比较,P<0.05,见表1｡

表1两组临床资料比较(x±s)

2.2平衡性校验结果

SNPs位点的基因型频率在群体中保持稳定｡同时,对于这两组群体中的三个SNP位点,它们之间的基因型分布不受互相影响,不存在连锁遗传现象｡见表2｡

表2平衡性校验结果

2.3不同SNPs位点等位基因与宫颈癌和CIN的相关性分析

TLR4基因不同SNPs位点等位基因和基因型分布2组比较,P<0.01,而rs1927911的基因型分布2组间比较,P>0.05｡校正初婚年龄后,rs4986790的AG基因型､rs10759931的GG基因型和rs11536889的CC基因型与宫颈癌疾病的进展有关(P<0.05),见表3｡

表3SNPs位点等位基因､基因型分布与宫颈癌和CIN的相关性分析

2.4宫颈癌单倍型分布与疾病发病的关系研究

以A-A-G-C作为对照,单倍型G-A-G-T､G-A-C-C和A-A-C-T与宫颈癌的疾病进展均有关(P<0.05),见表4｡

表4宫颈癌单倍型分布与疾病发病的关系研究

3、讨论

TLR4基因是人类基因组中的一种,编码Toll样受体4(Toll-likereceptor4)蛋白｡Toll样受体是一类能够识别病原体模式的蛋白质,它们在免疫应答中具有重要作用[10]｡TLR4是Toll样受体家族中的一员,它能够识别革兰氏阴性菌的内毒素(LPS),从而触发免疫反应[11]｡TLR4在人体中的表达分布广泛,包括巨噬细胞､树突状细胞､内皮细胞和多种上皮细胞等[12]｡研究表明[13],TLR4和多种免疫相关疾病(如感染､自身免疫性疾病､癌症等)相关联｡TLR4基因在宫颈癌的发生和发展过程中具有重要的作用｡宫颈癌是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的,而TLR4能够识别HPV感染所释放的病毒颗粒或病毒DNA,激发免疫反应,从而清除病毒[14]｡研究表明[15],TLR4基因发生多态性突变(SNP)与宫颈癌发病风险有关｡此外,TLR4的表达也可能受到HPVE6和E7蛋白的调控影响,从而影响宫颈癌的发生和发展[16]｡因此,研究TLR4基因与宫颈癌的关系,有助于深入理解宫颈癌的发病机制,为其治疗和预防提供新的靶点和策略｡

该研究发现TLR4基因的不同SNP位点等位基因和基因型分布在比较,P<0.01,说明这些位点数量较大,且具有较高的多态性｡这也与前期的研究结果一致,表明TLR4在宫颈癌的发病和发展中发挥了重要作用｡该研究发现rs1927911位点基因型分布在两组间比较时没有显著差异(P>0.05),这可能说明该位点不太可能与宫颈癌的发病相关｡该研究还发现,在校正初婚年龄后,rs4986790的AG基因型､rs10759931的GG基因型和rs11536889的CC基因型与宫颈癌的发病风险增加有关(P<0.05)｡多项研究均证实了TLR4基因与宫颈癌疾病发病风险有关,如TLR4rs4986790位点的G等位基因和AG基因型[17]､rs11536889杂合基因型GC[18]､3-UTR区的SNPs(rs11536889)的G等位基因等[19]｡另外一项指出[20],在波兰女性群体中,rs10759931变异则对宫颈癌发病起保护作用｡这些结果进一步表明TLR4基因多态性是宫颈癌发病风险的一个重要因素,但在不同群体中可能存在差异｡因此,在进行宫颈癌风险评估时,需要考虑不同基因位点的多态性和可能存在的人种差异｡以A-A-G-C作为对照,单倍型G-A-G-T､G-AC-C和A-A-C-T与宫颈癌发病风险增加相关(P<0.05),进一步提示了TLR4基因的不同单倍型与宫颈癌的发生和发展相关,对宫颈癌遗传风险因素的更深入理解,有助于更好地开发预防和治疗策略｡

综上所述,TLR4基因多态性可能作为宫颈癌前病变和宫颈癌的潜在预测标志物,为宫颈癌的早期诊断和预防提供了一定的依据｡但是本次研究也存在局限性,首先,这些研究结果是在特定样本群体中得出的,并不能直接推广到其他人群中｡其次,TLR4基因的多态性只是宫颈癌风险的一部分,还存在许多其他因素(如感染HPV病毒､遗传易感性和环境因素等)可能对宫颈癌的发生和发展起重要作用｡因此,在进行宫颈癌的风险评估时,应该综合考虑多个因素｡最后,尽管研究发现了TLR4基因多态性与宫颈癌风险的相关性,但其具体的生物学机制尚不清楚,需要进一步的研究来解析其作用机制｡

参考文献:

[3]舒婷,兰志鹏,巫霞,等.宫颈癌筛查妇女高危型人乳头瘤病毒感染现状及影响因素研究:基于成都市45万人群〔J〕.中国全科医学,2025,28(2):213-219.

[4]张晓敏,杨年红.HPV感染与ERK信号通路关键因子在宫颈癌中的交互效应及临床意义〔J〕.河北医学,2023,29(6):957-962.

[12]鲁历历.TLR4､HIF-1α及炎症指标与宫颈癌临床病理学因素及放化疗疗效间的相关性研究〔D〕.甘肃:兰州大学,2023.

[13]石喆,任珊,杨立,等.乳腺癌组织中HPV感染与TLR4､NF-κB蛋白表达的关系及其临床意义〔J〕.中国医药导报,2022,19(8):11-15.

[18]于晓,肖艳,杨柳.高危型HPV感染人群TLR2､TLR4基因多态性与罹患宫颈癌风险的相关性〔J〕.实用癌症杂志,2023,38(6):888-891.

文章来源:贾灿灿,张瑞涛,崔继敏.TLR4基因多态性与宫颈癌及癌前病变的相关性分析[J].实用癌症杂志,2025,40(04):537-540.