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SLUG、ZEB1在宫颈癌组织中的表达及与预后的关系

2022-03-08 100 上传者：管理员

摘要：目的:探讨锌指转录因子（SLUG）和锌指E盒结合蛋白1（ZEB1）在宫颈癌组织中的表达及与临床病理特征和预后的关系。方法:选取本院2015年12月至2018年12月期间经手术切除的85例宫颈癌标本,另选92例宫颈低级别上皮内病变（LSIL）患者作为LSIL组,108例良性病变行子宫全切患者作为对照组。采用免疫组化法测定受试者宫颈组织中SLUG和ZEB1表达水平,分析二者表达水平与宫颈癌临床病理特征的关系,对所有术后患者进行随访,分析二者表达水平对宫颈癌患者预后的影响。结果:宫颈癌组织中SLUG和ZEB1阳性表达率分别为85.88%（73/85）和82.35%（70/85）,显著高于对照组、LSIL组,差异有统计学意义（P<0.05）,LSIL组显著高于对照组（P<0.05）。SLUG和ZEB1在宫颈癌组织中的表达水平与宫颈癌的分化程度、临床分期、淋巴转移、浸润程度有关（P<0.05）。术后随访发现,SLUG高表达、ZEB1高表达宫颈癌患者术后生存率均显著低于SLUG低表达、ZEB1低表达患者（P<0.05）。COX多因素分析表明,低分化、有浸润（≥1/2）、SLUG高表达、ZEB1高表达是影响宫颈癌患者不良预后的独立危险因素（P<0.05）。结论:在宫颈癌组织中SLUG和ZEB1表达水平显著升高,与宫颈癌的分化程度、淋巴转移、浸润程度及术后生存率有关,有望成为评定宫颈癌患者预后的临床指标。

关键词：
宫颈癌
细胞转移
锌指E盒结合蛋白1
锌指转录因子
预后关系
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宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，发病率位居女性恶性肿瘤的第二位，是导致女性死亡的第三大癌症，严重威胁着女性的生命安全[1,2]。排液、阴道流血是宫颈癌的早期临床症状，随着病情发展出现贫血、尿毒症、下肢肿痛，给女性身体和心理上带来严重伤害[3]。临床上宫颈癌的治疗以手术、化疗、放疗为主，复发和转移是患者死亡的主要原因[4]。因此研究与宫颈癌发生发展相关的生物分子标志物，对宫颈癌早期发现，患者的生存与预后极为重要。锌指转录因子(SLUG)是Snail锌指转录因子的一员，胚胎发育过程中在上皮向间充质转化起重要作用而被发现，研究表明SLUG能够参与上皮-间质转化(EMT)过程，与E-box结合可下调细胞黏附因子(E-cadherin)表达，降低上皮细胞间黏附力进而促进肿瘤的转移侵袭[5,6]。

锌指E盒结合蛋白1(ZEB1)位于人10号染色体短臂，可编码1108个氨基酸，可调节T淋巴细胞分化、肌细胞分化、中枢神经系统的分化[7]。研究表明ZEB1可通过抑制E-cadherin的表达诱导EMT促进肿瘤转移侵袭，在肿瘤的发生发展中发挥着重要作用[8]。SLUG和ZEB1均可下调E-cadherin表达来促进肿瘤转移侵袭，因而研究其在肿瘤组织中表达水平与联系对肿瘤的发生发展意义重大。本研究拟采用免疫组化法测定宫颈癌组织中SLUG和ZEB1表达水平，探讨二者与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系，以期为宫颈癌的预后提供参考。

1、资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2015年12月至2018年12月期间经手术切除的85例宫颈癌标本，年龄25岁～72岁，平均年龄(50.56±4.31)岁。根据国际妇产科协会分期标准：Ⅰ期46例(其中Ⅰa期20例、Ⅰb期26例)、Ⅱ期39例(Ⅱa期25例、Ⅱb期14例)。纳入标准：①所有患者经病理再次诊断确诊为宫颈癌；②患者术前未曾接受化疗、放疗等治疗手段；③所有患者及家属对本研究知情，并签订临床研究协议书；④患者无手术禁忌。排除标准：①患者资料不全，术后随访困难；②肝、肾、心功能不全者；③患有其它全身疾病。选取同期于本院就诊的92例宫颈低级别上皮内病变(low-gradesquamousintraepitheliallesion,LSIL)患者作为LSIL组，年龄22岁～70岁，平均年龄(47.56±6.34)岁。另选取同期于本院就诊108例良性病变行子宫全切患者作为对照，年龄27岁～74岁，平均年龄(55.56±4.29)岁。三组受试者的基本资料，两两相比差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 实验试剂

兔源人抗SLUG购自美国CellSignaling公司；兔源人抗ZEB1购自美国SantaCruz公司；免疫组化试剂盒，DAB显色剂，通用型羊抗兔二抗购自上海基因科技有限公司。

1.3 实验方法

所取组织均用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋。免疫组化方法：①标本处理，选取石蜡病理标本，制作成厚度3～5μm切片，每个组织切6片，裱于干净的载玻片上，60℃烤箱过夜。②染色步骤，首先将烘干后的切片经二甲苯脱蜡2次，每次10min,之后用乙醇梯度洗脱脱水(75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、无水乙醇),接着用蒸馏水冲洗切片15s,再将切片放入EDTA抗原修复液中，80℃修复30min,冷却至室温后，PBS清洗3次，每次3min,使用3%的H2O2封闭10min,PBS清洗3次，每次3min,滴加试剂盒提供的封闭血清，25℃孵育1h,其中三片滴加兔源人抗SLUG单克隆抗体(稀释比例，1∶100),剩余三片滴加兔源人抗ZEB1单克隆抗体(稀释比例，1∶50),25℃孵2h。之后PBS冲洗三次，滴加通用型二抗，25℃孵育24h,用DAB显色5min,苏木素复染2min,蒸馏水冲洗30min,经无水乙醇脱水，二甲苯处理，最后用中性树胶封固，于显微镜下观察拍照。用已知阳性的病理切片作为阳性对照，PBS代替一抗作为空白对照。

1.4 结果判定

实验结果采用半定量法进行描述，即通过所取样品的阳性染色强度和阳性细胞所占百分比来共同判定。每个实验结果由两位专业人员和一位试验人员独立判断评定，具体评分标准如下，SLUG阳性表达为细胞核或细胞质中出现棕黄色颗粒，ZEB1阳性表达为细胞浆或细胞核中出现棕黄色至棕褐色颗粒。染色强度评分：样品无着色0分，样品呈浅黄色1分，样品为棕黄色2分，样品为棕褐色3分。染色细胞所占百分比评分，在显微镜下观察，每张切片任择3个细胞数相当的视野，评分标准：阳性细胞所占比例<10%记为0分，阳性细胞所占比例10%～50%记为1分，阳性细胞所占比例51%～75%记为2分，阳性细胞所占比例>75%记为3分。将染色强度与阳性细胞所占比例的评分乘积大小，即染色指数将评分结果进行等级划分：0～1分表示为阴性(-),2～3分表示为弱阳性(+),4～6分表示中度阳性(++),7～9分表示强阳性(+++)。其中阴性和弱阳性表示低表达，中度阳性和强阳性表示高表达。

1.5 随访

所有宫颈癌患者术后均接受常规随访，随访时间6～36个月，本次随访截止日期2019年6月，死亡患者以死亡日期作为随访截止时间，本次随访的中位时间16.35个月。观察并记录宫颈癌患者在随访期间生存情况。

1.6 统计学分析

使用SPSS22.0软件进行数据的处理和分析，计数资料以[例(%)]表示，行卡方检验；计量资料以平均数±标准差的形式表示，行t检验。P<0.05说明差异有统计学意义。

2、结果

2.1 SLUG和ZEB1在各类宫颈组织中表达水平

SLUG阳性表达呈现为细胞核或细胞质染色，ZEB1在宫颈癌组织中阳性表达呈现为弥漫性细胞浆或细胞核染色。宫颈癌组织中SLUG和ZEB1阳性表达率分别为85.88%(73/85)和82.35%(70/85),均显著高于对照组、LSIL组，差异有统计学意义(P<0.05)。LSIL组与对照组在宫颈癌组织中SLUG和ZEB1阳性表达率相比差异有统计学意义(P<0.05)。结果见表1和图1、图2。

2.2 SLUG和ZEB1水平与宫颈癌临床病理指标的关系

SLUG和ZEB1在宫颈癌组织中的表达水平与患者的年龄、组织类型无关(P>0.05),与宫颈癌的分化程度、临床分期、淋巴转移、浸润程度有关(P<0.05),结果见表2。

2.3 SLUG和ZEB1表达水平与宫颈癌患者生存率的关系

SLUG高表达、ZEB1高表达宫颈癌患者术后生存率均显著低于SLUG低表达、ZEB1低表达患者(P<0.05)。SLUG高表达、ZEB1高表达宫颈癌患者中位生存时间为23.80个月、17.85个月显著短于SLUG低表达(29.77个月)、ZEB1低表达宫颈癌患者(31.70个月)(P<0.05),结果见图3-4。

2.4 影响宫颈癌患者预后的危险因素

单因素分析表明，临床分期、低分化、有淋巴转移、有浸润(≥1/2)、SLUG高表达、ZEB1高表达均是影响宫颈癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。多因素分析表明，低分化、有浸润(≥1/2)、SLUG高表达、ZEB1高表达是影响宫颈癌患者不良预后的独立危险因素(HR=3.120,95%CI1.237～7.864;HR=2.854,95%CI1.352～6.027;HR=3.050,95%CI1.485～6.264;HR=3.468,95%CI1.935～6.217,P均<0.05),结果见表3。

3、讨论

宫颈癌的发病因素复杂且近年发病年龄趋年轻化，术后易转移和复发，患者死亡率高[9]。因而研究宫颈癌发生发展及预后的生物标志物对保障患者生命健康意义重大，EMT是恶性肿瘤侵袭转移的重要步骤，EMT发生可使上皮细胞丧失去细胞间的紧密连接，与细胞以及细胞周围基质的接触减弱、黏附能力下降，细胞转化成具有迁徙和运动能力的间质细胞，从而增强肿瘤细胞的侵袭和转移能力[10]。

SLUG最早发现于鸡发育的中胚层和胚胎神经嵴中，可直接下调E-cadherin表达以诱导EMT的发生[11]。王子伟等[12]发现SLUG在胆管癌中阳性表达率显著升高，与淋巴转移、动静脉受损有关，说明SLUG可能参与胆管癌的发生发展进程，并在侵袭转移中发挥重要作用。周芳芳等[13]研究说明SLUG表达与食管鳞癌浸润程度、淋巴结转移、临床分期相关，提示SLUG可能通过EMT参与食管鳞癌的发生发展进程。本研究表明宫颈癌组织中SLUG阳性表达率显著高于LSIL组、对照组，LSIL组显著高于对照组，说明SLUG表达水平与宫颈癌有关。另外研究发现在宫颈癌组织中SLUG表达水平与患者的年龄、组织类型无关，与宫颈癌的分化程度、临床分期、淋巴转移、浸润程度有关，提示SLUG可能参与宫颈癌的发生发展进程。进一步分析发现，SLUG高表达宫颈癌患者中位生存时间显著短于SLUG低表达患者，提示SLUG高表达宫颈癌患者预后情况较差。

ZEB1主要结构为N端和C端各有一个锌指结构，可以与目的基因启动子区结合，调节目的基因转录，研究发现，ZEB1可通过JAK/STAT3、Wnt等途径下调E-钙黏蛋白的表达，参与EMT进程[14]。王新根等[15]研究证实ZEB1在组织学类型及有淋巴结转移乳腺癌患者的癌组织中表达水平更高，说明ZEB1可成为评判乳腺癌侵袭性的生物标志物。潘琳[16]研究表明ZEB1在宫颈癌组织中的表达水平显著高于正常宫颈组织，与宫颈癌的临床分期、病理分化程度和淋巴结转移有关，提示ZEB1可能促进宫颈癌的浸润和转移进程，本研究结果表明ZEB1在宫颈癌组织中表达趋势与此基本一致，ZEB1阳性表达率显著高于LSIL组、对照组，LSIL组显著高于对照组，说明ZEB1表达水平与宫颈癌有关。

另外有研究发现在宫颈癌组织中ZEB1表达水平与患者的年龄、组织类型无关[17],与宫颈癌的分化程度、淋巴转移、浸润程度有关，提示ZEB1可能参与宫颈癌的发生发展进程。进一步分析发现，ZEB1高表达宫颈癌患者中位生存时间分别显著短于ZEB1低表达患者，提示ZEB1高表达宫颈癌患者预后情况较差。此外，Pearson分析表明SLUG和ZEB1表达水平呈正相关，提示二者可能通过某种机制共同参与宫颈癌的发生发展进程。最后经COX多因素分析发现，低分化、有浸润(≥1/2)、SLUG高表达、ZEB1高表达是影响宫颈癌患者不良预后的独立危险因素，提示SLUG和ZEB1有望成为判断宫颈癌患者不良预后的临床指标。

综上所述，宫颈癌组织中SLUG和ZEB1表达水平显著升高，与宫颈癌的分化程度、临床分期、淋巴转移、浸润程度及生存率有关，且二者表达水平呈正相关，可能成为宫颈癌患者预后的临床检测指标，但是二者是否通过EMT途径来参与肿瘤发生发展有待进一步研究证实。

参考文献:

[3]闫文静.宫颈癌组织中E钙黏蛋白表达与临床病理特征的关系分析[J].内蒙古医学杂志,2017,49(11):1349-1350.

[4]陈国斌,李卫红,梁文倩,等.缺氧诱导因子-1a和血管生成拟态在宫颈癌中表达的变化及其意义[J].海南医学,2018,29(7):955-957.

[6]陈漫浸,伏晓,脁尧树,等.Slug与头颈部鳞状细胞癌临床病理特征的关系及用于预后判断价值的研究进展[J].浙江医学,2017,39(18)1617-1620.

文章来源：聂伟,马迎萍.SLUG､ZEB1在宫颈癌组织中的表达及与预后的关系[J].现代肿瘤医学,2022,30(08):1454-1458.