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老年急性脑梗死患者神经功能缺损与Fibulin-5miR-210水平的相关性分析

2020-08-26 157 上传者：管理员

摘要：目的观察急性脑梗死患者Fibulin-5、miR-210表达及神经功能缺损情况,分析Fibulin-5、miR-210表达与神经功能缺损的关系。方法选取2016-01―2019-06南阳市中心医院收治的急性脑梗死的老年患者作为本次研究对象(观察组),另选取同期年龄、性别匹配的30例健康老年志愿者纳入对照组。所有研究对象均接受Fibulin-5、miR-210水平检测,参照美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分评价老年患者的神经功能缺损情况,对比2组Fibulin-5、miR-210水平,相关性检验急性脑梗死患者Fibulin-5、miR-210水平与神经功能缺损(NIHSS评分)之间的相关性。结果观察组Fibulin-5水平高于对照组,miR-210水平低于对照组(P<0.05);64例急性脑梗死患者经NIHSS量表评估后显示,NIHSS评分≥15分20例(重度组),8～14分30例(中度组),4～7分14例(轻度组)。不同神经功能缺损的急性脑梗死患者的Fibulin-5水平相比,重度组最高,后由高至低依次为中度组、轻度组,3组miR-210相比,重度组最低,后由低至高依次为中度组、轻度组(P<0.05);经相关性检验结果显示,急性脑梗死患者Fibulin-5与NIHSS呈正相关(r>0,P<0.05),miR-210表达与NIHSS呈负相关(r<0,P<0.05);绘制ROC曲线,Fibulin-5、miR-210单独及联合预测急性脑梗死患者的AUC分别为0.980、0.905、0.983,均>0.9,预测价值较高。结论 Fibulin-5、miR-210在急性脑梗死患者中普遍呈异常表达,其中Fibulin-5过表达、miR-210低表达可能参与了急性脑梗死患者的神经功能缺损进程,且对预测评估患者神经功能缺损进展有一定价值。

关键词：
Fibulin-5
miR-210
急性脑梗死
神经功能缺损
预测评估
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脑梗死是由多种因素共同作用诱发的神经系统性疾病,神经功能缺损是患者常见且严重的并发症,减少神经功能缺损程度是急性脑梗死治疗的重要目标,故深入剖析可反映急性脑梗死患者神经功能缺损程度的生物学指标十分关键[1]。微小RNA(miRNA)属于单链RNA,在诸多疾病诊断及甄别中均有应用,其中miR-210可充分反映脑组织损伤情况[2]。研究过程中还发现,细胞外基质在胚胎发育与微环境的平衡维持中作用显著,尤以fibulin家族最为突出,fibulin可促进细胞外基质复合物合成,并在弹性纤维与基膜形成过程中发挥关键作用[3]。由此考虑,fibulin-5与miR-210是否在脑梗死患者神经缺损病理过程中也扮演重要角色。搜索相关文献发现,miRNA与急性脑梗死相关研究仍处于动物实验或细胞学研究阶段,而关于急性脑梗死患者miRNA表达的相关研究并不多见,加之miRNA种类较多,以miRNA为切入点探寻miR-210在急性脑梗死患者神经功能缺损过程中的表达意义重大。鉴于此,本研究通过观察急性脑梗死患者Fibulin-5、miR-210表达及神经功能缺损情况,并分析Fibulin-5、miR-210表达与神经功能缺损之间的关系,旨在指导未来对老年急性脑梗死患者早期神经功能缺损的评估,可能对指导临床诊治有一定积极意义。

1、资料与方法

1.1一般资料

在获取医院医学伦理委员会审核通过后,选取2016-01―2019-06南阳市中心医院收治的急性脑梗死的老年患者64例为研究对象(观察组),男36例,女28例;年龄60～78(69.25±2.15)岁;合并高血脂症25例,高血压30例,冠心病23例,糖尿病31例(每位患者可不合并或合并单种或多种基础性疾病)。另选取同期在南阳市中心医院门诊体检的30例健康老年志愿者为对照组,男17例,女13例;年龄60～80(69.34±2.17)岁。2组受试者性别、年龄等对比无显著性差异(P>0.05),具有可比性。

1.2纳入、排除标准

纳入标准:(1)脑梗死符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》中相关诊断标准;(2)年龄≥60周岁;头颅CT影像学征象及数据确诊为脑梗死;(3)患者及其家属均知悉本次研究目的并自愿签署知情同意书。排除标准:(1)合并免疫缺陷型疾病、感染、恶病质等疾病;(2)合并其他心脑血管性疾病;(3)既往有脑卒中发病史,且遗留不同程度的神经功能缺损症状;(4)合并重要脏器功能障碍患者;合并精神认知功能障碍患者。对照组实验室检查资料均有存档。

1.3方法

1.3.1神经缺损判定标准:

根据美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)[4]评分评估64例老年急性脑梗死患者神经功能缺损情况,量表评估内容包括11个条目:构音障碍、意识、感觉、视野、上、下肢运动、凝视、忽视症、共济失调、语言、面瘫,共42分,分值越高表明神经受损越严重。根据NIHSS评分判定急性脑梗死患者神经功能缺损情况,NIHSS评分≥15分为神经功能重度缺损,8～14分为神经功能中度缺损,4～7分为神经功能轻度缺损。

1.3.2实验室检查

1.3.2.1miR-210表达:

急性脑梗死患者于入院次日,对照组体检当天,采集空腹肘静脉血5mL,利用TRIzolReagentRNA试剂盒(美国Invitrogen公司)提取血清总RNA,利用美国THERMO公司生产的ND-1000N紫外光光分度计检测miR-210表达情况,通过获取的PCR荧光强度,利用2-△△Ct方法得出miR-210相对表达量。

1.3.2.2Fibulin-5:

急性脑梗死患者于入院次日,对照组体检当天,采集空腹肘静脉血5mL,室温静置30min,以1500r/min速度离心20min,分离上层血清,采用酶联免疫吸附法及衰老关键蛋白5试剂盒(武汉优尔生科技股份有限公司)根据特殊软件系统检测Fibulin-5浓度。上述所有涉及专业的操作均由专业人员按照仪器及试剂盒说明书并在严格质控下完成。

1.4统计学方法

采用SPSS23.0统计分析软件处理数据,所有计量资料均经正态性检验,符合正态分布的计量资料以均数±标准差表示,2组间比较采用独立样本t检验,组间两两比较采用SNK-q检验;计数资料以率(%)表示,2组间比较采用χ2检验,急性脑梗死患者Fibulin-5及miR-210表达与神经功能缺损间的相关性采用双变量Pearson直线相关性分析检验;绘制受试者工作曲线(ROC)得到曲线下面积(AUC),以评价Fibulin-5、miR-210表达对急性脑梗死患者神经功能缺损的预测价值:AUC<0.5无价值,0.5～0.7诊断价值较低,0.7～0.9诊断价值中等,>0.9诊断价值较高。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1老年急性脑梗死患者神经功能缺损情况

64例急性脑梗死患者经NIHSS量表评估后显示,NIHSS评分≥15(28.52±3.35)分20例,纳入重度组;NIHSS评分8～14(11.25±1.13)分30例;NIHSS分值4～7(5.12±0.72)分14例,纳入轻度组。

2.2观察组与对照组整体Fibulin-5及miR-210表达比较

观察组Fibulin-5表达高于对照组,miR-210表达低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.3不同神经缺损程度的急性脑梗死老年患者Fibulin-5及miR-210表达比较

3组急性脑梗死老年患者Fibulin-5相比,重度组表达最高,后由高至低依次为中度组、轻度组;3组miR-210相比,重度组最低,后由低至高依次为中度组、轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.4急性脑梗死患者Fibulin-5及miR-210表达与神经功能缺损(NIHSS评分)相关性分析

经相关性分析显示,急性脑梗死患者Fibulin-5与NIHSS呈正相关(r>0,P<0.05),miR-210表达与NIHSS呈负相关(r<0,P<0.05)。见表3。相关性散点图见图1。

表1观察组与对照组整体Fibulin-5及miR-210表达比较

图1A:Fibulin-5与NIHSS评分相关性散点图;B:miR-210与NIHSS评分相关性散点图

表2不同神经缺损程度的急性脑梗死老年患者Fibulin-5及miR-210表达比较

表3急性脑梗死患者Fibulin-5及miR-210表达与NIHSS评分之间的相关性

2.5Fibulin-5及miR-210表达预测急性脑梗死患者神经功能缺损进展的价值

将急性脑梗死老年患者神经功能缺损状态作为状态变量(1=中重度神经功能缺损,0=轻度神经功能缺损),将Fibulin-5、miR-210表达单独与联合检测结果作为检验变量,绘制ROC曲线(图2)得到Fibulin-5、miR-210单独与联合预测的AUC分别为0.980、0.905、0.983,均>0.9,预测价值较高。见表4。

表4Fibulin-5及miR-210表达预测急性脑梗死患者神经功能缺损进展的价值

图2miR-210与NIHSS评分相关性散点图

3、讨论

急性脑梗死患者普遍伴有不同程度的神经功能缺损,致残率较高[5,6],针对此类患病群体,若未及时采取有效干预,任由病情发展,即使患病个体生命得以挽回,但患者想要重归日常生活或工作难度系数较大,由此可见,早期评估急性脑梗死患者神经功能缺损程度,并及时干预,对促进患者良性预后的重要性[7,8,9,10]。

Fibulin-5是由成纤维细胞、血管平滑肌等多种细胞分泌的细胞外基质糖蛋白,富含诸多氨基酸,在体内发挥诸多生物学作用,主要体现在如下几点:(1)遍布在蛋白丰富的组织中,通过与原纤维蛋白-1、弹性蛋白原等结合辅助并加速弹性纤维合成,发挥促纤维合成作用;(2)Fibulin-5会随弹性纤维形成终结后下调,但当机体弹性纤维组织损伤后而被激活,并参与弹性组织的合成过程;(3)参与内皮细胞增殖与迁徙,促进肉芽组织增生与Ⅰ型胶原合成来达到加速切口愈合的目的[11,12,13,14]。(4)在维持血管稳定方面价值显著:a、整合素与RGD序列结合使得内皮细胞彼此之间及其与细胞外基质之间的黏附力增强,纤连蛋白的重要受体--α5β1整合素可刺激活性氧簇的表达,因此脑缺血性疾病患者体内纤连蛋白表达升高也会连带ROS出现高表达状态;b、Fibulin-5可与α5β1整合素竞争性结合,并抑制ROS低表达,继而降低缺血缺氧条件下神经元与内皮细胞凋亡[15,16,17,18]。一般情况下,Fibulin-5呈低表达,但当机体出现血管损伤、动脉硬化斑块激活,则内皮细胞中Fibulin-5表达将显著升高[19,20,21]。本研究显示急性脑梗死患者Fibulin-5表达较高,表明Fibulin-5表达极有可能参与了急性脑梗死病程进展。

miRNA拥有17～25个核苷酸单链RNA分子,保守性、组织特异性、时序性均较高,可通过诱发靶mRNA翻译与降解抑制,继而调控转录后基因沉默,介导蛋白质表达,在神经系统增殖、分化、发育及疾病进展中均具有举足轻重的地位[22,23,24,25]。miR-210属于一种缺氧激活因子,是体外实验中缺氧条件下唯一一个可被上调的miRNA,并在低氧环境下介导细胞调控过程,在缺血性脑部疾病中具有重要意义[26,27,28]。本研究显示观察组miR-210表达较对照组低,表明急性脑梗死发病可造成miR-210表达降低。分析可能原因,miR-210可被低氧因子诱导,当个体罹患急性脑梗死时,脑组织缺血缺氧,只有miR-210表达降低才能在低氧状态下得以暴露,被低氧诱导因子辨识成功后诱导、转录[29,30,31]。

综合Fibulin-5及miR-210生物学特性推测,在急性脑梗死患者病情进展中,Fibulin-5、miR-210的表达可能与神经功能缺损之间也存在某种密不可分的关系。本研究进一步经相关性检验发现,急性脑梗死患者Fibulin-5与NIHSS评分呈正相关,miR-210表达与NIHSS评分呈负相关,初步证实上述猜测。为进一步验证Fibulin-5及miR-210表达与急性脑梗死患者神经功能缺损的关系,本研究ROC曲线显示,Fibulin-5及miR-210单独及联合预测急性脑梗死患者神经功能缺损程度的AUC分别为:0.985、0.905、0.983,均>0.9,预测价值均较高,最终验证了上述猜测。由此考虑,在未来临床可通过适时检测急性脑梗死患者Fibulin-5及miR-210表达,并以此评估急性脑梗死患者神经功能缺损情况,并对异常表达患者及时给予针对性干预,旨在通过调控急性脑梗死患者Fibulin-5及miR-210表达,以达到延缓急性脑梗死患者神经功能缺损进展的目的[32,33]。本研究在分析急性脑梗死老年患者Fibulin-5、miR-210表达情况与神经功能缺损程度上取得初步进展,但因样本数量有限,加之未对两个主要指标之间的关系进行深入分析,还需在未来展开大样本、前瞻性、长时间的深入性研究加以验证,旨在为改善急性脑梗死患者神经功能缺损提供新的切入点。

Fibulin-5、miR-210在急性脑梗死患者中普遍呈异常表达,其中Fibulin-5过表达、miR-210低表达可能参与了急性脑梗死患者的神经功能缺损进程,且对预测评估患者神经功能缺损进展有一定价值。

参考文献：

[1]雷俊杰,王俊峰,张雷,等.急性脑梗死TOAST分型与同型半胱氨酸及NIHSS评分的关系研究[J].中国实用神经疾病杂志,2017,20(23):9-13.

[5]方立,张淑玲,周艳丽,等.睡眠障碍性呼吸对老年脑梗死患者血压变异性及短期预后的影响[J].中国实用神经疾病杂,2020,23(11):935-939.

[6]郭志强,张娟.血尿酸异常与老年脑梗死认知障碍的关系[J].中国实用神经疾病杂,2019,22(11):1394-2398.

沈雷,张保朝,付国惠.老年急性脑梗死患者Fibulin-5miR-210水平与神经功能缺损的相关性研究[J].中国实用神经疾病杂志,2020,23(16):1418-1423.

基金:河南省医学科技攻关计划(编号:2018020174)