首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 妇产科论文 > 妊娠期糖尿病论文 > 胎盘生长因子在妊娠期糖尿病患者中的表达及与胎盘滋养层细胞的关系

胎盘生长因子在妊娠期糖尿病患者中的表达及与胎盘滋养层细胞的关系

2023-07-31 85 上传者：管理员

摘要：探究讨胎盘生长因子(PLGF)在妊娠期糖尿病患者中表达及其与胎盘滋养层细胞的关系。方法选择2017年2月—2019年2月天津市第三中心医院收治的83例妊娠期糖尿病患者为研究组，50例同期口服葡萄糖耐量试验阴性孕妇为对照组，检测并比较研究组与对照组血清PLGF水平、胎盘组织中PLGF蛋白水平及胎盘中滋养层细胞凋亡率。体外培养人绒毛滋养细胞HTR-8/SVneo,将其分为control组、高糖组、PLGF干预组，control组不作任何处理，高糖组使用30 mmol/L高糖进行处理，PLGF干预组使用10 ng/ml PLGF预处理HTR-8/SVneo滋养细胞24 h后再加入30 mmol/L高糖继续处理，检测并比较control组、高糖组、PLGF干预组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率。结果研究组患者血清PLGF水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05);研究组胎盘组织中PLGF蛋白水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05);研究组胎盘中滋养层细胞凋亡率显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05);高糖组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率显著高于control组，差异有统计学意义(P<0.05);PLGF干预组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率显著低于高糖组，差异有统计学意义(P<0.05);PLGF干预组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率显著高于control组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PLGF在妊娠期糖尿病患者中表达上调，妊娠期糖尿病患者胎盘中滋养细胞凋亡明显减少，PLGF能够抑制高糖所致HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡。PLGF表达上调可能是导致妊娠期糖尿病患者胎盘中滋养细胞凋亡减少的因素之一，这可为降低妊娠期糖尿病患者胎儿过度发育提供新的干预靶点。

关键词：
妊娠期糖尿病
糖代谢异常
胎盘滋养层细胞
胎盘生长因子
表达水平
加入收藏

妊娠期糖尿病是妊娠期间发生的糖代谢异常，也是导致母体和围产儿并发症的主要原因[1]。孕期孕妇血液内过多的葡萄糖会通过胎盘进入胎儿体内而导致巨大儿产生，从而造成分娩难度增大，严重危害母婴安全[2]。有研究发现[3]妊娠期糖尿病患者巨大儿产生是由胎盘中滋养细胞凋亡减少引起胎儿过度发育所致。胎盘生长因子(Placental growth factor, PLGF)是一种肝素结合酸性蛋白，主要由合体滋养层细胞合成，具有促滋养细胞增殖、促滋养细胞侵袭、促胎盘血管生长等生物功能[4]。有研究表明[5]PLGF可抑制子痫前期孕妇胎盘滋养细胞凋亡，但PLGF是否参与妊娠期糖尿病患者胎盘滋养细胞的凋亡目前报道较少。因此，本研究就PLGF因子在妊娠期糖尿病患者中表达及其与胎盘滋养层细胞的关系进行了探讨，以期为临床早期预防和控制妊娠期糖尿病提供理论依据。

1、资料与方法

1.1资料来源

经天津市第三中心医院医学伦理委员会批准，前瞻性选择2017年2月—2019年2月本院收治的83例妊娠期糖尿病患者为研究组，另选50例同期口服葡萄糖耐量试验阴性孕妇为对照组，两组年龄、孕周、体质指数、收缩压、舒张压等一般资料差异无统计学意义(P>0.05),见表1。纳入标准：①符合妊娠期糖尿病诊断标准[1];②均为单胎孕妇；③年龄22～35岁；④无严重感染性疾病且凝血功能正常；⑤自愿参与本研究并签署知情同意书。排除标准：①合并严重内分泌疾病；②合并严重精神疾病；③肝肾功能异常；④合并艾滋病、乙型肝炎等传染性疾病。

1.2方法

①检测并比较研究组与对照组孕妇血清PLGF水平：采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测，操作如下：采集研究组与对照组孕妇空腹静脉血4 ml,采用离心机(美国BECKMAN公司)以3 000 r/min离心10 min分离血清，采用由上海恒远生物科技有限公司提供的PLGF ELISA检测试剂盒测定研究组与对照组孕妇血清PLGF水平。②检测并比较研究组与对照组孕妇胎盘组织中PLGF蛋白水平：采用Western Blot检测，操作如下：研究组与对照组孕妇分娩后取其胎盘组织，用0.9%氯化钠液(武汉市福星生物药业有限公司)漂洗去除血迹，剪碎，加组织裂解液，匀浆，离心，取上清，使用BCA试剂盒(北京凯瑞基生物科技有限公司)测定蛋白浓度，取蛋白上样，电泳，切胶，转膜，封闭，加入1∶300稀释的PLGF一抗(深圳欣博盛生物科技有限公司)、1∶200稀释的β-actin一抗(上海联迈生物工程有限公司),4℃摇床过夜，PBST缓冲液(上海晅科生物科技有限公司)洗膜，加入1∶500稀释的山羊抗小鼠IgG(上海樊克生物科技有限公司),4℃摇床过夜，PBST洗膜，ECL发光试剂盒(上海炎熙生物科技有限公司)显色、显影，用Image Quant TL软件分析各条带的灰度值，以目的蛋白与内参蛋白的灰度值之比计算研究组与对照组孕妇PLGF蛋白表达水平。③检测并比较研究组与对照组胎盘中滋养层细胞凋亡率：研究组与对照组孕妇分娩后取其胎盘组织，剪碎，加0.25%胰蛋白酶(上海素冉生物科技有限公司)消化，获得胎盘滋养细胞悬液，细胞计数为1×106个，依次向流式管中加入300μl细胞悬液、5μl Annexin V-FITC、200μl 1 M×Tris Buffer缓冲液、5μl PI染液，混匀，使用FACSCanto II流式细胞仪(美国BD公司)检测细胞凋亡率。④HTR-8/SVneo滋养细胞培养及分组处理：人绒毛滋养细胞HTR-8/SVneo(上海圻明生物科技有限公司)用含10%胎牛血清的DMEM培养基(武汉纯度生物科技有限公司)于37℃、5% CO2恒温箱(广州立珠生物科技有限公司)培养，当细胞融合达50%时进行分组，分为control组、高糖组、PLGF干预组，control组不作任何处理；高糖组使用30 mmol/L高糖进行处理；PLGF干预组使用10 ng/ml PLGF预处理HTR-8/SVneo滋养细胞24 h后再加入30 mmol/L高糖继续处理。处理完毕3组均于37℃、5% CO2恒温箱培养48 h后，采用流式细胞仪检测3组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率。

表1两组孕妇一般资料比较(x¯±s)

1.3统计学分析

本研究数据的统计分析在SPSS 22.0软件上进行，采用t检验比较研究组与对照组血清PLGF水平、胎盘组织中PLGF蛋白水平及胎盘中滋养层细胞凋亡率；采用F检验比较control组、高糖组、PLGF干预组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1研究组与对照组孕妇血清PLGF水平及胎盘组织中PLGF蛋白水平比较

见表2、图1。

表2研究组与对照组孕妇血清PLGF水平及胎盘组织中PLGF蛋白水平(x¯±s)

研究组血清PLGF水平显著高于对照组，差异具有统计学意义(P<0.05);研究组胎盘组织中PLGF蛋白水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。

图1研究组与对照组胎盘组织中PLGF蛋白水平

2.2研究组与对照组胎盘中滋养层细胞凋亡率比较

对照组与研究组胎盘中滋养层细胞凋亡率分别为(25.69±1.34)%、(9.75±1.58)%,研究组胎盘中滋养层细胞凋亡率显著低于对照组，差异有统计学意义(t=59.569,P<0.05)。研究组与对照组胎盘中滋养层细胞凋亡率见图2。

2.3 control组、高糖组、PLGF干预组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率比较

control组、高糖组、PLGF干预组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率分别为(8.02±0.86%)、(23.47±2.66%)、(15.87±1.74%),3组比较差异有统计学意义(F=99.08,P<0.01)。高糖组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率显著高于control组，差异有统计学意义(P<0.05);PLGF干预组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率显著低于高糖组，差异有统计学意义(P<0.05);PLGF干预组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率显著高于control组、差异有统计学意义(P<0.05)。各组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡情况见图3。

图2研究组与对照组胎盘中滋养层细胞凋亡率

注：横坐标表示Annexin V/FITC染色，纵坐标表示PI染色，Q1象限表示机械性死亡细胞，Q2象限表示凋亡晚期的细胞，Q4象限表示正常活细胞，Q3象限表示凋亡早期的细胞

图3各组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡情况

3、讨论

妊娠期糖尿病是一个严重危害胎儿的妊娠并发症，由于孕妇体内雌激素、孕激素、胎盘生乳素、胎盘胰岛素酶等抗胰岛素样物质增加，导致孕妇对胰岛素敏感性下降，增加了对胰岛素需求，导致血糖升高，进而出现妊娠期糖尿病[6]。据调查[7]妊娠期糖尿病在我国发生率为1%～5%,其临床表现为妊娠期多饮、多食、多尿及外阴假丝酵母菌感染等，血糖控制不良者易导致巨大儿、流产、早产、难产等，病情严重者可出现酮症酸中毒(ketoacidosis)[8]。胎盘是妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的重要器官，滋养细胞是胎盘的主要组成成分，在胎盘功能维持及母胎免疫耐受中发挥重要作用[9]。有研究发现[10]妊娠期糖尿病患者滋养细胞凋亡减少是胎儿出生体质量增加进而导致难产的重要机制之一，妊娠期糖尿病病情程度越高患者胎盘中滋养细胞凋亡越少，显微镜下观察到的胎盘绒毛成熟不良、干绒毛小动脉管壁增厚及管腔狭窄、绒毛间质血管过度充盈等胎盘病理变化越明显，早产、胎膜早破、胎儿生长受限等发生率越高[11,12,13]。为此，探究妊娠期糖尿病患者胎盘滋养细胞凋亡减少的原因有着十分重要的临床指导意义。

PLGF是一个对滋养层细胞功能有自分泌作用和对血管生长有旁分泌作用的蛋白，由1条69 kD的α链和34 kD的β链通过二硫键连接形成二聚体，主要由滋养细胞和血管内皮细胞(vascular endothelial cell, VEC)分泌[14],其碱基序列与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因有高度的同源性，在胎盘组织中丰富表达，可与位于滋养层细胞和VEC的酪氨酸酶受体结合，发挥对滋养层细胞和VEC调节作用，促进滋养细胞增殖、转移及侵袭，增加胎盘血管通透性[15,16]。据报道[17]检测孕妇血液PLGF水平可用于识别胎盘合体滋养层细胞存在供氧压力，预测子癫前期孕妇不良妊娠结局，并对子痫前期疗效监测有重要意义。有学者研究发现[18]PLGF在胎盘绒毛膜滋养细胞层中高表达并在妊娠过程中发挥重要作用。研究显示[19],PLGF同胎盘源性宫内生长受限存在显著相关性，有可能成为日后诊断治疗胎儿生长受限的新途径。在学术报告中发现[20],血清PLGF表达水平与唐氏综合征孕妇孕周及PAPP-A呈正相关，有望成为唐氏综合征早期筛查的指标之一。上述报道[5,15]与本研究结果相符，本研究结果显示研究组血清及胎盘组织中PLGF水平显著高于对照组，且研究组胎盘中滋养层细胞凋亡率显著低于对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05),提示PLGF可能对子痫前期孕妇胎盘滋养细胞凋亡产生抑制作用。为进一步探讨PLGF对胎盘滋养细胞的影响，本研究通过高糖诱导HTR-8/SVneo滋养细胞模拟妊娠期糖尿病体外模型，发现高糖组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率显著高于control组，PLGF干预组HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡率显著低于高糖组，差异均具有统计学意义(P<0.05),提示妊娠期糖尿病诱导的高糖环境可能上调胎盘中PLGF水平，引起胎盘滋养层细胞凋亡减少，导致胎盘过度发育，从而增加了巨大儿的发生风险。

综上所述，PLGF在妊娠期糖尿病患者中表达上调，妊娠期糖尿病患者胎盘中滋养细胞凋亡明显减少，PLGF能够抑制高糖所致HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡，PLGF表达上调可能是导致妊娠期糖尿病患者胎盘中滋养细胞凋亡减少的因素之一，这可为降低妊娠期糖尿病患者胎儿过度发育提供新的干预靶点。但由于本研究受时间限制，收集病例数量有限，故有待扩大样本数作进一步研究。

参考文献：

[1]柳怖伟，丁科亮,罗海霞,等妊娠期糖尿病孕妇不同血糖指标异常与妊娠结局的关系[J].临床和实验医学杂志, 2016.48(2):899-902.

[2]王翠晓,李盈血清同型半胱氨酸联合hs-CRP在妊娠期糖尿病肾病中的诊断价值分析[J]湖南师范大学学报(医学版).2010.186(1):103-106.

[3]关怀，尚丽新妊娠期糖尿病流行现状[]中国实用妇科与产科杂志, 2015,31(1):91-94.

[4]杨丽萍,侯俊瘪,冯海芹,等IGF-1、PLGF水平与早发型子痫前期的关系研究[J]浙江医学, 2017.23(19):74-76.

[5]洪喜萍，奚杰子痫前期孕妇尿液中sFIt- 1/PLGF比值与滋养细胞慢蕊凋亡异常的相关性[J]海南医学院学掖。2018.213(14):58-61.

[6]妾修丽妊娠期糖尿病早期筛玉任与治疗对妊娠结局的影响[J]中外女性健豪研究, 2016. 10(8):173-175.

[8]胡玉菊,李淑娟,胡可佳,等.动态血糖监测指导个体化营养联合运动对妊娠期糖尿病患者的疗效分析[J]海军医学杂志, 2018.39(1):58-85.

[9]汪佳,樊晓艳，黄爱华,等.miR-208-5p调节FKBP52表达及诱导滋养细胞凋亡的研究[J]中华妇产科杂志, 2017. 12(2):259-263.

[10]史亚波,任亚楠,万惠丽，等胎查生长因子在妊娠期糖尿病患者胎盘中抑制滋养细胞凋亡的作用研究[J]实用妇产科杂志, 2019.35(1):44-40.

[11]韩云，陈丽平,郑艳莉,等内质网应激介导的胎查滋养细胞凋亡在妊娠期糖尿病合并胎儿生长曼限中的研究[J]中国妇产科临床杂志, 2018.4(5):445-446.

[12]任春霞，张少王早产胎膜早破危险因素与胎盘病理变化及妊娠结局分析[J].临床合理用药杂志。2018,11(35):154-155