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妊娠期糖尿病患者血清miR-15a和MIF水平及与母婴不良结局关系

2024-08-30 28 上传者：管理员

摘要：目的探讨妊娠期糖尿病（GDM）患者血清微小核糖核酸-15a（miR-15a）和巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）水平及其与母婴不良结局的关系。方法选取2020年1月至2022年12月于衡水市第四人民医院产检并分娩的106例GDM患者为实验组,另选取同期在该院进行孕检并分娩的健康女性106例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-15a水平,采用酶联免疫吸附试验法检测血清MIF水平。两组血清MIF和miR-15a水平进行比较,并进行多因素Logistic回归分析miR-15a和MIF水平与GDM患者发生母婴（母体、围生儿）不良结局的关系。结果实验组血清miR-15a和MIF水平高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。实验组发生母婴不良结局患者的年龄>35岁、孕前体重指数>24 kg/m2、有不良孕产史、血糖控制不良占比和血清MIF和miR-15a水平高于实验组发生母婴良好结局患者,差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄>35岁、孕前体重指数>24 kg/m2、有不良孕产史、血糖控制不良及血清miR-15a和MIF均为实验组发生母婴不良结局的危险因素（P<0.05）。结论 GDM患者血清miR-15a和MIF水平异常升高,且血清miR-15a和MIF水平与患者发生母婴不良结局密切相关。

关键词：
妊娠期糖尿病
巨噬细胞移动抑制因子
微小核糖核酸-15a
母婴不良结局
糖代谢
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妊娠期糖尿病(GDM)主要是指妊娠期间首次出现糖代谢异常的一类疾病,是孕期女性容易出现的一类并发症,据统计,我国GDM这一疾病的发病率超过了15%,并存在逐年上升趋势[1-2]。GDM与妊娠不良结局相关,可对孕妇、胎儿及新生儿造成严重危害[3-4]。微小核糖核酸(mi RNA,简称mi R)参与人体多种生物学过程,包括细胞增殖、分化、侵袭、血管生成和凋亡等[5]。吴美芬等[6]的研究显示,通过下调mi R-15 a-5p水平可缓解糖尿病大鼠的胰岛素抵抗。有研究表明,在2型糖尿病患者中mi R-15a表达异常,其有望成为预测2型糖尿病进展及最佳治疗方向的生物标志物[7]。巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)是集生长因子、细胞因子、激素和酶等一系列特性的多功效蛋白分子,具有很多不同方面的生物学活性,在免疫、炎症、细胞的凋亡、增殖过程中发挥重要的作用[8]。MIF可以由免疫细胞、内皮细胞、上皮细胞和许多其他类型的细胞产生。胎盘作为MIF的重要靶器官之一,MIF在母-胎界面大量表达,在建立和维持健康妊娠方面发挥重要作用[10]。研究证实在胎盘组织里面MIF异常表达与许多妊娠相关的疾病关系密切[11]。当前已证实2型糖尿病患者血清MIF水平升高明显,MIF通过非特异性免疫途径参与2型糖尿病的发展[9]。但GDM患者血清mi R-15a和MIF水平变化及对母婴不良结局的影响还尚不清楚。因此,本研究旨在分析血清mi R-15a和MIF在GDM患者中水平变化及其与母婴不良结局的关系,以期为GDM患者临床相关的诊治提供参考。现报道如下。

1、资料与方法

1.1一般资料

本研究选取2020年1月至2022年12月于衡水市第四人民医院(简称本院)产检并分娩的106例GDM患者为实验组,另选取同期在本院进行孕检并分娩的健康女性106例作为对照组。两组除了空腹血糖外,其他临床基线资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。纳入标准:(1)实验组全部符合GDM相应的确诊标准,诊断标准参照文献[12];(2)年龄24～45岁;(3)产后筛查新生儿无畸形或发育异常。排除标准:(1)孕妇在孕前合并内分泌疾病;(2)伴有妊娠期高血压、子痫前期等其他妊娠期合并症;(3)孕妇合并严重的心、肺、肝、肾、血液系统、精神疾病等其他疾病;(4)孕妇存在吸烟史或饮酒史等不良生活习惯;(5)孕妇服用对体内脂糖代谢有影响的药物;(6)合并有胎盘早剥、前置胎盘、胎位不正。本研究已通过本院伦理委员会审核,研究对象已签署相应的知情同意书。

表1实验组与对照组临床基线资料比较[或n(%)]

1.2方法

1.2.1血样采集

使用普通血清管(红色头盖)采集实验组在首次诊断GDM后进行降糖干预前,以及对照组在体检时的空腹状态下的外周静脉血6m L,于室温下静置凝固,3500r/min,离心半径10cm,离心10min分离血清,分离的血清保存在无核酸酶的EP管内,以进行后续的实时荧光定量聚合酶链反应(q PCR)和酶联免疫吸附试验。

1.2.2血清mi R-15a水平检测

血清mi R-15a水平通过qPCR检测。将采集的血清通过Trizol试剂盒(购自美国的Invitrogen公司)提取里面的总RNA,并用紫外分光光度计(Thermo Fisher公司,型号:NanoDrop2000)测量总RNA浓度和纯度。采用PrimeScript TMRTMasterMix试剂盒(Ta Ka Ra,货号:RR047Q)对上述所提取的RNA进行逆转录成c D-NA。采用TBGreen®PremixExTaqTMⅡ(Tli RNase HPlus)试剂盒(Ta Ka Ra,货号:RR820A)对RNA逆转录所得的c DNA模板用实时荧光定量PCR检测仪(Roche公司,型号:Light Cycler480)对c DNA进行扩增,扩增引物设计:miR-15a正向引物序列为5'-TAGCAGCACATAATGGTTTGTG-3';反向引物序列为5'-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3'。内参U6正向引物序列为5'-CTCGCTTCGGCAGCACAT-3',反向引物序列5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'。条件设置:3个复孔,反应的体系定为50μL,循环程序:50℃2min,95℃10min,40个循环:95℃15s,60℃60s,并以U6作为内参,采用2-△△Ct法对两组mi R-15a水平进行计算。

1.2.3血清MIF水平检测

通过酶联免疫吸附试验的试剂盒(上海酶联生物公司,货号:MM-0200H2)检测血清MIF水平,具体实验步骤按照试剂盒说明书实施。使用680全自动酶标仪(美国Bio-Rad公司)在450nm处读取其具体的吸光度值,横坐标以标准品浓度数值标注,纵坐标吸光度值标注,绘制标准曲线,计算血清MIF水平。

1.3母婴不良结局判断

全部研究对象随访到分娩结束,对其具体的母婴结局予以观察,其中母体不良结局主要有羊水过多、胎膜早破、产后感染、产后出血、羊水过少;围生儿不良结局主要有早产儿、巨大儿、胎儿窘迫、新生儿窒息、新生儿呼吸窘迫综合征、新生儿低血糖,并对两组发生母婴(母体、围生儿)不良结局的情况进行比较。

1.4血糖控制

所有GDM患者在入院时即开始进行饮食和运动指导,并监测空腹和餐后2h血糖,在连续干预1周后,若血糖水平仍控制不佳,则加用胰岛素治疗。经饮食指导或经胰岛素治疗后血糖控制在正常范围内为血糖控制良好,否则为血糖控制不良。血糖控制良好标准:空腹血糖控制3.3～5.6mmol/L,餐后2h血糖控制4.4～6.7mmol/L。

1.5统计学处理

本研究数据以Epidata3.1录入,采用统计软件SPSS22.0进行数据分析。符合正态分布的计量资料以表示,组间行t检验。计数资料以例数或百分率表示,组间行χ2检验。将年龄、孕前体重指数、不良孕产史、生产史、血糖控制情况、血清mi R-15a和MIF等指标设为自变量,因变量则是母婴结局,实施多因素Logistic回归分析mi R-15a和MIF水平与GDM患者发生母婴不良结局的关系。P<0.05表示差异有统计学意义。

2、结果

2.1实验组和对照组血清mi R-15a和MIF水平比较

实验组血清mi R-15a和MIF水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.2两组母婴不良结局发生情况比较

实验组发生母体不良结局有50例,发生围生儿不良结局35例;对照组发生母体不良结局有10例,发生围生儿不良结局4例。实验组母婴(母体、围生儿)不良结局发生率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3、4。

表2血清mi R-15a和MIF水平比较

表3两组母体不良结局发生率比较

表4两组围生儿不良结局发生率比较

2.3血清mi R-15a和MIF水平与实验组发生母体不良结局的关系

实验组发生母体不良结局患者的年龄>35岁、孕前体重指数>24kg/m2、有不良孕产史、血糖控制不良占比和血清MIF和mi R-15a水平高于实验组发生母体良好结局患者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。经多因素Logistic回归分析结果显示,年龄>35岁、孕前体重指数>24kg/m2、有不良孕产史、血糖控制不良和血清MIF和mi R-15a均为实验组发生母体不良结局的危险因素(P<0.05)。见表6。

表5影响实验组发生母体不同结局的因素分析[n(%)或]

表6多因素Logistic回归分析实验组发生母体不良结局有关的因素

注:赋值为年龄≤35岁=0,>35岁=1;孕前体重指数≤24 kg/m2=0,>24 kg/m2=1;不良孕产史为无=0,有=1;血糖控制情况为良好=0,不良=1。

2.4血清mi R-15a和MIF水平与实验组发生围生儿不良结局的关系

实验组发生围生儿不良结局患者的年龄>35岁、孕前体重指数>24kg/m2、有不良孕产史、血糖控制不良占比及血清mi R-15a和MIF水平高于实验组发生围生儿良好结局患者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表7。经多因素Logistic回归分析结果显示,年龄>35岁、孕前体重指数>24kg/m2、有不良孕产史、血糖控制不良及血清mi R-15a和MIF均为实验组发生围生儿不良结局的危险因素(P<0.05)。见表8。

表7影响实验组发生围生儿不同结局的因素分析

表8多因素Logistic回归分析实验组发生围生儿不良结局有关的因素

3、讨论

全球范围内GDM患病率正在逐年上升,并与肥胖、2型糖尿病的流行并行,且不良妊娠结局与妊娠期高血糖显著相关[13-14]。近年来,mi RNA已被确定为妊娠期间代谢适应的关键调节因子。越来越多的证据表明母体mi RNA与妊娠并发症之间存在关联,包括胎盘早剥、前置胎盘、先兆子痫和妊娠期高血压及宫内生长受限、巨大儿和GDM[15]。因此,本研究旨在分析血清mi R-15a和MIF水平在GDM患者中的差异及血清mi R-15a和MIF水平与母婴不良结局的关系,以期为临床诊治提供参考。

本研究结果发现,实验组血清mi R-15a水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。既往研究显示,mi R-15a能够通过调控bcl2、ccnd1及wnt3a等靶向基因,参与细胞的增殖调控,从而抑制神经母细胞瘤的进展[16]。刘林平等[17]研究发现,2型糖尿病患者房水和血清中mi R-15a水平均异常升高,与本研究结果类似。另外,本研究结果发现,实验组血清MIF水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。既往已有研究显示,MIF基因的多态性与GDM患者胰岛素抵抗风险的增加有关[18]。追溯其作用机制,在全身的多种组织细胞里面MIF全部广泛表达,这里面就包括了胰岛β细胞。在GDM患者中,高水平MIF会对胰岛素β细胞产生刺激,从而分泌更多的胰岛素,而葡萄糖和胰岛素可以刺激MIF的分泌,从而产生了一种恶性循环[19]。

本研究结果显示,实验组发生母体不良结局患者血清MIF和mi R-15a水平高于实验组发生母体良好结局患者,差异有统计学意义(P<0.05);实验组发生围生儿不良结局患者血清mi R-15a和MIF水平高于实验组发生围生儿良好结局患者,差异有统计学意义(P<0.05),提示血清mi R-15a和MIF水平与GDM母婴不良结局之间存在较为密切的关系。有研究报道,不明原因连续流产和mi RNA基因多态性关系紧密,这进一步说明mi RNA可能与母婴不良结局存在一定的关系[20-21]。多因素Logistic回归分析显示,血清MIF和mi R-15a为实验组发生母婴(母体、围生儿)不良结局的危险因素(P<0.05)。另外,既往有研究证实,GDM患者血清mi R-15a表达异常升高,可增加患者发生母婴不良结局的概率,mi R-15a表达与患者发生母婴不良结局关系紧密[22]。本研究结果发现,年龄>35岁、孕前体重指数>24kg/m2、有不良孕产史、血糖控制不良均为实验组发生母婴(母体、围生儿)不良结局的危险因素(P<0.05),推测可能是由于孕前体重指数过高易引起肥胖,加重糖脂代谢紊乱,而高龄产妇生育能力出现一定的下降情况,既往有不良孕产史对孕妇的精神与心理造成较大压力,血糖控制方面的不佳会造成母体长时间处于高血糖的环境从而诱发母婴不良结局的出现[23-26]。

综上所述,GDM患者血清mi R-15a和MIF水平异常升高,且血清mi R-15a和MIF水平与患者发生母婴不良结局密切相关。

参考文献:

[6]吴美芬,潘海燕,黄兴丽,等.沙格列汀通过mi R-15 a-5p/INSR轴缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制研究[J].安徽医科大学学报,2021,56(7):1082-1088.

[12]中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南(2017年版)[J].中国实用内科杂志,2018,38(4):292-344.

[17]刘林平,吴伯乐,倪莉莎,等.2型糖尿病患者mi R-15 a､mi R-1 6､mi R-20b变化及与糖尿病视网膜病变的相关性[J].中华全科医学,2020,18(6):954-958.

[19]詹瑛,王玉苹,李超,等.MIF基因rs1007888位点单核苷酸多态性与妊娠期糖尿病发病的相关性[J].中华妇产科杂志,2013,48(5):326-329.

基金资助:衡水市科技计划项目(2022014017Z);

文章来源:张琛,苗爱文,李珊珊,等.妊娠期糖尿病患者血清miR-15a和MIF水平及其与母婴不良结局的关系[J].国际检验医学杂志,2024,45(16):1973-1978.