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慢性心力衰竭患者血清中NAMPTmir-206表达及临床意义
摘要：目的:探讨慢性心力衰竭患者血清中烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）、mir-206表达及临床意义。方法:选取2020年1月至2021年8月在本院接受治疗的慢性心力衰竭患者76例为心衰组，另选取同期在本院体检健康者34例为健康组。采用酶联免疫吸附法检测血清中NAMPT水平，实时荧光定量PCR法检测血清mir-206水平;对患者进行心功能分级，比较不同心功能分级患者血清NAMPT、mir-206水平，并分析NAMPT、mir-206水平与左室舒张末期内径（LVEDD）、B型钠尿肽（BNP）、左心室射血分数（LVEF）的相关性，利用受试者工作特征曲线（ROC）分析血清NAMPT、mir-206水平对慢性心力衰竭患者的预测价值。结果:心衰组NAMPT、LVEDD、BNP水平高于健康组（P<0.05）,mir-206、LVEF水平低于健康组（P<0.05）;慢性心力衰竭患者血清中NAMPT水平随着心功能分级的增加逐渐升高（P<0.05）,mir-206水平随着心功能分级的增加逐渐降低（P<0.05）;Pearson结果显示，慢性心力衰竭患者血清NAMPT水平与LVEDD、BNP水平均呈正相关（r=0.750、0.757,P<0.05），与LVEF水平呈负相关（r=-0.759,P<0.05）;血清mir-206水平与LVEDD、BNP水平均呈负相关（r=-0.775、-0.883,P<0.05），与LVEF水平呈正相关（r=0.819,P<0.05）;ROC结果显示，血清NAMPT、mir-206水平预测慢性心力衰竭的曲线下面积（AUC）分别为0.853（95%CI:0.773-0.913）、0.981（95%CI:0.935-0.998），对应的特异度分别为61.76%、97.06%，灵敏度分别为93.42%、88.16%，血清NAMPT、mir-206二者联合预测慢性心力衰的AUC为0.993，特异度为97.06%，灵敏度为96.05%。结论:慢性心力衰竭患者血清NAMPT表达水平升高、mir-206表达水平降低，与患者心功能分级有关，对慢性心力衰竭的发生有一定的预测价值，有望成为诊断慢性心力衰竭的生物学指标。
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慢性心力衰竭是一组由心脏结构和/或功能异常引起的复杂的临床综合征，当患者出现心力衰竭时，往往已到了疾病的终末阶段[1]。虽然慢性心力衰竭的治疗方法在不断更新，但并没有使患者的死亡率下降[2]。因此，及时识别诊断并给予有效治疗对慢性心力衰竭患者有重要意义。B型钠尿肽(BNP)是诊断心力衰竭的常用指标，但由于肺栓塞、高龄等原因会对BNP结果产生一定影响[3]，因此，寻找新的灵敏度和特异度较高的标志物对及时诊断十分重要。烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)参与能量代谢，在调控炎症反应及肿瘤的发生与发展中起着关键性作用[4]。mir-206是miRNA家族成员，具有调节细胞生长增殖和分化的作用[5]。基于此，本研究将探讨NAMPT、mir-206在慢性心力衰竭患者中的表达水平，并分析血清中NAMPT、mir-206水平对慢性心力衰竭患者的预测价值。
1、资料与方法
1.1 一般资料:
选取2020年1月至2021年8月在本院接受治疗的慢性心力衰竭患者76例为心衰组，男40例，女36例，吸烟史:有39例，无37例，饮酒史:有38例，无38例，年龄48～74岁，平均(56.28±7.22)岁，心功能分级，Ⅱ级18例，Ⅲ级29例，Ⅳ级29例。纳入标准:①符合《中国心力衰竭诊断和治疗指南(2018)》[6]中慢性心力衰竭诊断标准;②病情稳定且病程>1年者;③心功能分级在Ⅱ～Ⅳ级者;④2周内未接受过治疗者。排除标准:①伴有先天性心脏病者;②伴有急性心肌梗死者;③伴有多脏器功能衰竭者;④合并严重全身感染者;⑤病情危重，生存期限≤3个月者。另选取同期在本院体检健康者34例为健康组，男20例，女14例，吸烟史:有18例，无16例，饮酒史:有19例，无15例，年龄46～72岁，平均(55.12±7.28)岁。本研究经本院伦理委员会批准。比较两组患者吸烟史、饮酒史、年龄等一般资料，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
1.2 方法
1.2.1 样本采集及RNA提取:
外周血样本:分别抽取两组患者清晨空腹静脉血5mL，在室温下3000r/min离心15min，得到上层血清，放入-80℃冰箱保存备用。血清总RNA样本:使用miRNeasy试剂盒(德国Qiagen)提取RNA，将所得外周血与PBS溶液1∶1混合，室温下1500r/min进行离心处理，当离心管内血液分为4层后，取第二层与PBS再次混合，室温下1000r/min离心2次，提取RNA。
1.2.2 实时荧光定量PCR:
使用逆转录试剂盒对提取的RNA进行逆转录，得到cDNA后，使用qRT-PCR检测试剂盒(美国Gene-Copoeia)，在罗氏LightCycler480Ⅱ扩增仪进行扩增，具体反应体系参照试剂盒说明书，反应程序为95℃预变性10min,95℃变性15s,60℃退火30s,72℃延伸10s，共40个循环。每个样本重复3次，取平均值，使用2-△△Ct公式，确定miR-206表达水平。
1.2.3 酶联免疫吸附法:
采用酶联免疫吸附法检测两组患者血清中NAMPT和BNP水平，试剂盒购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，具体步骤严格按照试剂盒说明书进行。
1.2.4 彩色多普勒超声心动图检查:
采用超声心动图(深圳市靖邦电子有限公司)检测两组患者就诊当天LVEDD和LVEF水平。
1.3 观察指标:
比较心衰组和健康组血清中NAMPT、mir-206水平及不同心功能分级患者血清NAMPT、mir-206水平，分析血清中NAMPT、mir-206的表达与LVEDD、LVEF及BNP的相关性，并分析血清中NAMPT、mir-206水平对慢性心力衰竭患者的预测价值。
1.4 统计学方法:
采用SPSS25.0统计学软件对数据进行录入与分析，计量资料以均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，多组数据间比较利用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验。计数资料用例(n)或率(%)表示，行卡方检验。利用Pearson法分析慢性心力衰竭患者血清中NAMPT、mir-206的表达与LVEDD、LVEF及BNP的相关性，利用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清中NAMPT、mir-206水平对慢性心力衰竭患者的预测价值。P<0.05为差异有统计学意义。
2、结果
2.1 心衰组和健康组血清中NAMPT、mir-206表达水平及LVEDD、LVEF、BNP指标比较:
心衰组NAMPT、LVEDD、BNP水平高于健康组(P<0.05),mir-206、LVEF水平低于健康组(P<0.05)。见表2。
2.2 不同心功能分级患者血清NAMPT、mir-206水平比较:
慢性心力衰竭患者血清中NAMPT水平随着心功能分级的增加逐渐升高(P<0.05),mir-206水平随着心功能分级的增加逐渐降低(P<0.05)。见表3。
2.3 慢性心力衰竭患者血清NAMPT、mir-206水平与LVEDD、LVEF及BNP之间的关系:
Pearson结果显示，慢性心力衰竭患者血清NAMPT水平与LVEDD和BNP水平之间均呈正相关(r=0.750、0.757,P<0.05)，与LVEF水平呈负相关(r=-0.759,P<0.05);血清mir-206水平与LVEDD和BNP水平之间均呈负相关(r=-0.775、-0.883,P<0.05)，与LVEF水平呈正相关(r=0.819,P<0.05)。见表4。
2.4 血清NAMPT、mir-206水平对慢性心力衰竭患者的预测价值:
ROC结果显示，血清NAMPT、mir-206水平预测慢性心力衰竭的曲线下面积(AUC)分别为0.853(95%CI:0.773-0.913)、0.981(95%CI:0.935-0.998)，对应的特异度分别为61.76%、97.06%，灵敏度分别为93.42%、88.16%;血清NAMPT、mir-206二者联合预测慢性心力衰的AUC为0.993，特异度为97.06%，灵敏度为96.05%。见图1，表5。
3、讨论
慢性心力衰竭是心血管疾病患者死亡的主要原因，主要表现为乏力、呼吸困难、水肿等，对患者日常生活带来很大困扰[7]。并且随着我国老龄化的加重，慢性心力衰竭的发病率呈上升趋势。因此，及时诊断及时治疗对减少慢性心力衰竭的发病率有重要意义。NAMPT具有调节炎症反应及肿瘤发生与发展的作用。如:李杨杨等[8]研究表明，NAMPT在呼吸机相关性肺炎患者中呈高表达，并且NAMPT表达水平增高可加重炎症反应，增加呼吸机相关性肺炎的病死率。苟小霞等[9]研究表明，NAMPT参与着细胞间信号传导，细胞增殖，在脑胶质瘤中呈高表达，且与脑胶质瘤预后密切相关。本研究结果显示，NAMPT在慢性心力衰竭患者中表达水平高于健康者，且随着心功能分级的增高，NAMPT的表达水平也逐渐升高，提示，NAMPT在慢性心力衰竭患者中呈高表达，且高表达水平NAMPT可能与慢性心力衰竭发生有关。BNP是诊断慢性心力衰竭的标志物，随着慢性心力衰竭的加重，BNP会逐渐升高[10]。LVEDD、LVEF也是反应心功能的有效指标，LVEDD会随着心力衰竭的加重而增加，LVEF随着心力衰竭的加重而降低。相关性分析结果显示，血清NAMPT与LVEDD和BNP水平之间呈正相关，与LVEF呈负相关，提示血清NAMPT和LVEDD、LVEF、BNP共同发挥作用，参与慢性心力衰竭的发生与发展。
mir-206位于人类染色体6p12.2上，是miRNA家族成员，参与细胞分化与血管形成[11]。郭登斌等[12]研究结果显示，mir-206与骨的发育有关，并且能够抑制骨细胞分化，在骨折延迟愈合患者中呈低表达。白爱红等[13]研究结果显示，mir-206在多囊卵巢综合征患者血清中呈低表达，且表达水平与胰岛素抵抗有关。本研究结果显示，mir-206在慢性心力衰竭患者中呈低表达，且表达水平与心功能分级密切相关，提示，mir-206参与着慢性心力衰竭患者的病情进展。相关性分析结果显示，血清mir-206水平与LVEDD和BNP水平之间均呈负相关，与LVEF水平呈正相关，提示血清mir-206与LVEDD、LVEF、BNP共同参与着慢性心力衰竭的发生与发展。BNP作为临床预测慢性心力衰竭的常用指标之一，灵敏度、特异度均已获得大量临床证据支持，但BNP水平变化与多种心血管疾病的发生有关，仅以其作为预测指标可能会存在漏诊或误诊患者，因此在结合患者临床表现的基础上，尚需参考其他易于检测的血清指标进行判断，以提高诊断的准确性。本研究ROC结果显示，血清NAMPT、mir-206二者联合预测慢性心力衰竭的AUC为0.993高于血清NAMPT、mir-206单独预测慢性心力衰竭的AUC(0.853、0.981)，具有较高的灵敏度、特异度，提示全面检测血清NAMPT、mir-206水平对慢性心力衰竭的发生有一定预测价值，对辅助鉴别慢性心力衰竭具有积极意义。
综上所述，慢性心力衰竭患者血清NAMPT表达水平升高、mir-206表达水平降低，与患者心功能分级有关，对慢性心力衰竭的发生有一定的预测价值，有望成为诊断慢性心力衰竭的生物学指标。但后续还应加大样本量，进一步对本研究结果进行验证。
参考文献:
[1]王志燕,陈晨,吕强,等.2021年ESC急慢性心力衰竭诊断与治疗指南解读[J].中华心血管病杂志,2021,49(12):1252~1255.
[2]姚璐,武云涛,田国祥.托伐普坦在老年心力衰竭患者中的应用评价[J].中国循证心血管医学杂志,2019,11(2):252~253,256.
[6]中华医学会心血管病学分会à力衰调学组,中国医师论会心力哀竭专业委员会,中华心血管病杂志编辑委员会.中国心力衰竭诊断和治疗指南2018[J].中华心力衰竭和心肌病杂志,2018.2(4)196-225.
[7]李杨杨,胡芳芳,李莉,呼吸机相关性肺炎患者血清降钙素原,载脂蛋白E和烟酩胺磷酸核糖转移酶表达及其预后相关影响因素分析[J].临床误诊误治,2019,29111)72~76.
[9]苟小霞,阮培刚,徐颖,等.基于数据挖掘分析nampt在脑胶质瘤中的表达及意义[J].肿瘤预防与治疗,2019,32(3);221~227.
[12]郭登斌,王春,刘清平.miR-1､miR-206与IGF-1在骨折延迟愈合患者血清中的表达关系及意义[J].广东医学,2019,40(10):1487~1491.
[13]白爱红,付秀虹,李荣香,等.多囊卵巢综合征患者血清miR-206和IGF-1的表达水平及临床意义[J].中国妇幼保健,2019,34(1):139~142.
文章来源：哈斯高娃,乌吉斯古楞.慢性心力衰竭患者血清中NAMPTmir-206表达及临床意义[J].河北医学,2022,(04):614-619.
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