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RhD阴性献血者鉴定结果分析

2020-08-28 296 上传者：管理员

摘要：目的：探讨血站确认为RhD阴性的献血者中弱D、部分D、Del表型的比例及对安全输血的影响。方法：血站使用单克隆IgM抗D试剂检测D抗原，用间接抗人球蛋白试验确认弱D或部分D；将血站确认为RhD阴性献血者标本送专业机构，用吸收放散试验和基因分型做进一步鉴定。结果：50例在血站确认为RhD阴性的献血者中，检出弱D4例，占8%；检出Del表型13例，占26%;33例被确认为RhD阴性，占66%。结论：弱D、Del表型作为阴性血液输给阴性受血者，可刺激产生抗体，给临床输血带来安全隐患。

关键词：
Del表型
Rh血型
弱D
献血者
血液
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Rh血型系统是输血医学中仅次于ABO系统的第二大血型系统，Rh血型系统常见的抗原有D、C、c、E、e5种，使用相应的抗D、抗C、抗c、抗E和抗e5种血型试剂可以鉴定这些抗原。临床上，D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原，也是最具有临床意义的抗原，故一般只作D抗原鉴定，凡带有D抗原者称为Rh阳性，不带D抗原者称为Rh阴性。中国汉族人群中Rh阳性比例约为99.7%,Rh阴性比例0.2%～0.4%[1]。根据红细胞表面D抗原的数量和质量不同及抗原性不同，将D抗原分为5种：（1）正常D，常见的D抗原。（2）弱D,D抗原数量减少，质量无变化。（3）部分D（表位不完全型D),D抗原数量基本正常，但是缺失正常D抗原上部分抗原表位（质量减少）。（4)Del表型（表位不完全型弱D),D抗原数量减少，缺失部分D抗原决定簇（质量减少）。（5）增强D,D抗原数量大量增多，抗原性极大增加。弱D、部分D、Del表型由于抗原数量或质量减少，不能用常规血清学方法检出，需要通过间接抗人球蛋白试验（IAT）、吸收放散或基因检测方法证实其红细胞膜上D抗原的存在。如果献血者是弱D、部分D或Del表型，其血液输给Rh阴性受血者，可能刺激受血者产生抗D抗体，导致受血者再次输入弱D、部分D或Del表型血液时发生溶血性输血反应。为了解本中心血站确认为RhD阴性的献血者中，弱D、部分D、Del表型的比例，研究者作了进一步的鉴定和分析，现将结果报道如下。

1、资料与方法

1.1一般资料

选取2003-2009年本中心血站确认为RhD阴性，愿意接受进一步鉴定的献血者50例作为研究对象。

1.2主要试剂

RhD(IgM）血型定型试剂（上海血液生物医药有限责任公司）、RhD(IgG）血型定型试剂（北京金豪制药股份有限公司）、抗D(IgM+IgG）血型定型试剂（英国Millipore公司）、抗人球蛋白试剂（IgG）检测试剂（上海血液生物医药有限责任公司）。

1.3方法

1.3.1检测方法

RhD血型常规检测采用平板法，将检测为RhD阴性的标本进行确认，确认采用试管法，用2种不同厂家生产的抗D试剂进行IAT，判读并记录实验结果，所有操作严格按照试剂使用说明书进行。

1.3.2进一步鉴定方法

在中国医学科学院北京协和医学院输血研究所进行鉴定。（1）血清学试验：使用抗D(IgM+IgG）试剂进行盐水法筛选RhD阴性标本；筛选为阴性的标本采用IAT进行弱D或部分D鉴定；IAT试验采用人源性血清（中国医学科学院输血研究所、上海血液生物医药有限责任公司）和混合单克隆抗D[Rh1，批号：430000(DIAGAST）]；再使用人源抗D血清对剩余标本进行吸收放散试验以检测Del表型。初筛阴性标本采用血清学常规试管法做RhD表型鉴定，抗E(20090105）、抗e(00700001）、抗C(20070113）和抗c(00800002）（上海血液生物医药有限责任公司）。（2）基因组DNA制备：采用TIAN-GEN基因组DNA提取试剂盒，从乙二胺四乙酸抗凝的外周全血中制备基因组DNA，严格按照试剂说明书进行操作。（3)RhD的序列特异引物-聚合酶链反应（PCR-SSP）法基因分型：对IAT确定为弱D或部分D的阳性标本进行RhD10个外显子的检测，采用10对针对RhD基因外显子及侧翼序列的PCR-SSP引物，特异扩增RhD的10个外显子（测序PCR），方法参照文献[2]。

2、结果

50例RhD阴性献血者标本经IAT、吸收放散试验和RhD基因分型检测，检测结果显示，50例RhD阴性献血者中检出弱D、Del表型共17例，占34%。其中弱D4例，占8%;Del表型13例，占26%。RhD阴性33例，占66%，其中Exon1-10全缺失29例，Exon3-9全缺失4例。见表1。

表150例RhD阴性献血者鉴定结果

3、讨论

《全国临床检验操作规程》中Rh血型鉴定，当献血者初筛检测为阴性时需进一步进行Rh阴性确认试验，以排除弱D，但是如果检测的是患者标本，则可不必再确认。弱D型鉴定采用的是试管法IAT,Del需通过更加敏感的吸收放散技术才能检测到。中国人RhD阴性群体中10%～30%的个体是Del表型，这类表型的个体在受到D抗原免疫刺激时，几乎不产生应答[3]。在临床输血中弱D型个体输注RhD阳性红细胞后可产生抗D抗体，所以受血者（患者）为弱D型，作Rh阴性论，应输注Rh阴性血液；供血者（献血者）为弱D型者，应作Rh阳性论，不应当输血给Rh阴性的受血者[1]。

对血站已确认为RhD阴性的人群中，检出弱D、部分D、Del表型早已有报道，只是检出比例各方报道不同[3]。本研究50例确认试验为RhD阴性的血液中检出弱D、部分D比例、Del表型比例低于海南地区[4]，高于湖北[5]、云南[6]、安徽地区[7]。

弱D、部分D、Del表型的检测在临床输血中具有比较重要的意义，弱D、部分D、Del表型只是红细胞表面D抗原数量或质量减少，但是红细胞表面仍然存在D抗原，仍具有一定的免疫原性。当Rh阴性受血者输注弱D、部分D、Del表型血液后，可能会刺激受血者产生抗D抗体；受血者再次输注RhD阳性红细胞、弱D、部分D、Del表型血液时，可能会发生溶血性输血反应，或者导致女性受血者怀孕时流产、新生儿溶血病等，给患者带来输血安全隐患[8]。

《血站技术操作规程》（2019版）规定，RhD阴性的结果应经过确认试验，但并没有指出确认试验应采用的方法[9]。由于血站检出技术和方法等原因，经过RhD阴性确认实验，仍然有一定比例的弱D、部分D、Del表型血液无法检出。对于一般的中心血站，使用抗C分型和吸收放散试验鉴定可操作性比较强，但还需要相关数据研究和技术规范的支持。本鉴定结果分析提示，由于试剂、操作、方法等原因，血站提供给临床的RhD阴性血液中仍有弱D、部分D和Del。

参考文献：

[1]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会医政医管局.全国临床检验操作规程[M].4版.北京:人民卫生出版社,2015.

[2]李宏,宋宁,邓永福,等.四川地区汉族人群Rh(D)变异体分子机制研究[J].中国输血杂志,2010,23(5):368-372.

[3]邹文涛,何子毅.无偿献血者弱D型的检出[J].临床输血与检验,2007,9(1):67-68.

[4]叶健忠,杨向萍,蔡于旭,等.海南汉族RhD阴性个体RHD基因研究[J].中国输血杂志,2005,18(2):97-100.

[5]沈钢,章俊华,张浩,等.湖北汉族RhD阴性个体Rh表型及RHD基因多态性研究[J].中国输血杂志,2007,20(4):304-306.

[6]蔡玲君,丁权,陈文仙,等.云南地区RhD阴性个体RHD基因研究[J].中国输血杂志,2006,19(6):452-453.

[7]吕蓉,刘忠,方勤,等.安徽地区RhD(-)无关供血者的血型调查[J].中国输血杂志,2006,19(5):402-403.

[8]林甲进,朱碎永,白植地.Rh弱D､Del的检测及意义[J].温州医学院学报,2008,38(4):361-362.

[9]中华人民共和国国家卫生健康委员会.国家卫生健康委关于印发血站技术操作规程(2019版)的通知(国卫医函[2019]98号)[EB/OL].(2019-05-08)[2019-11-28].

祝晓琴,邓永福.RhD阴性献血者鉴定结果分析[J].检验医学与临床,2020,17(16):2399-2400.