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HPLC法测定蒙成药哈日十二味散中异土木香内酯的含量

2025-04-15 41 上传者：管理员

摘要：目的：建立测定蒙成药哈日十二味散中异土木香内酯含量的方法。方法：采用高效液相色谱法，流动相为乙腈-0.4%磷酸（58∶42），流速1.0mL/min，色谱柱为AgilentZORBAXBonus-RPC18柱，(Analytical250mm×4.60mm,5Micron)，检测波长225nm，柱温40℃。结果：异土木香内酯对照品在0.007208～0.178900mg范围内呈良好线性关系，r=0.997；土木香内酯平均加样回收率为96.42%,RSD=1.0%。结论：本方法操作简便，可准确地测定哈日十二味散中异土木香内酯的含量。

关键词：
哈日十二味散
异土木香内酯
消化不良
蒙成药
高效液相色谱法
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蒙成药哈日十二味散收载于《卫生部药品标准》蒙药分册一九九八年中[1],由土木香、黑冰片、胡黄连、苦地丁等十二种药材配方而成。哈日十二味散的疗效经过长期临床验证,具有显著的药理作用。尤其对“协日”病、瘟疫、瘟疫陷胃引发的目肤发黄以及消化不良、口渴烦躁等症状具有确切疗效。土木香为菊科旋复花属植物土木香的干燥根。土木香别名祁木香,为蒙医常用清热类药,味辛、苦,性温,归肝、脾经,具有健脾和胃、调气解郁和止痛安胎等功效。该药收录于《中国药典》2020年版、《本草纲目拾遗》等文献[2]。其具有解巴达干热、清赫依血相讧、开胃止痛、温中消食的功效,在多种蒙药复方中作为主药[3],常用于治疗胸胁挫伤、呕吐泻痢、岔气作痛、脘腹胀痛以及胎动不安等病症[4]。异土木香内酯属倍半萜内酯化合物,现代药理表明,异土木香内酯具有镇痛、抗肿瘤、抗炎、抗菌和驱虫等药效作用[5-7]。由于当前哈日十二味散的检验标准仅涵盖基础性状及常规检查项目,难以全面评估药品的内在品质。为了对该方剂中土木香的核心活性成分异土木香内酯实施有效的质量控制,研究采取高效液相色谱法（HPLC）开展定量分析工作。

1、仪器与试药

研究过程中使用的异土木香内酯标准品采购自中国食品药品检定研究院,批号为110761-201807,标示纯度为98.2%。实验所需的三批哈日十二味散样品（批号分别为20190201、201904、201905）均从通辽市瑞草堂大药房购买。分析中使用的主要仪器设备包括配备变色龙工作站的赛默飞世尔高效液相色谱仪、XS3DU精密电子天平、KQ-500E超声波清洗仪及92SM-202A电子分析天平。实验中采用的乙腈和甲醇为色谱级试剂,实验用水选用超纯水,其他试剂均选用分析纯级别。

2、方法与结果

本研究通过色谱分析,采用AgilentZORBAXBonus-RPC18分析柱,设定工作温度为36℃,选择230nm作为检测波长。流动相选用乙腈-0.5%磷酸水溶液（54:46）,以1.1mL/min的流速进行洗脱,每次进样量设定为10μl。在样品制备环节,取1.6g供试品置于45mL锥形瓶中,精密加入25mL色谱纯甲醇并称重,随后进行超声处理（功率260W,频率40kHz）32分钟。待溶液冷却后补充挥发损失的溶剂,充分摇匀后,取该溶液过滤备用。为配制标准溶液,精密称取9.256mg异土木香内酯对照品于100mL量瓶中,加入适量色谱纯甲醇使其充分溶解。同时制备不含土木香的其他药材组合作为阴性对照,按相同方法处理制得阴性对照液。将制备的各溶液分别注入色谱仪进行检测分析,获得相应的色谱图（如图1所示）用于后续研究。为验证方法的可靠性,进行了系统的方法学考察。配制异土木香内酯对照品溶液,精密称取0.01235g置于50mL量瓶中,用甲醇定容,再分别精密移取0.6、1.2、2.8、4.8、6.8、9.8mL于10mL量瓶中,加甲醇至刻度进样测定。回归分析结果表明,在0.009256～0.196580mg范围内呈良好线性关系,回归方程为Y=148.3562X-0.0286（r=0.999）。通过对同一标准品溶液进行10次连续进样（10μL）测定,峰面积RSD为1.3%,证实了仪器精密度。选取批号20190305样品溶液在0h、4h、6h、8h、10h、12h、14h、16h、18h、20h、24h进行测定,峰面积RSD为1.6%,表明溶液24h内稳定性良好。对同批样品（批号20190304）独立制备6份供试品溶液进行测定,测得异土木香内酯平均含量为0.18mg/g,RSD为1.4%,显示方法重复性符合要求。为考察准确度,取已知含量样品（批号20190304）9份,每份约1.4g,精密称重后置于25mL量瓶中,分别加入浓度为0.1356mg/mL的对照品溶液1.4mL、2.4mL、3.4mL,按规定方法处理测定,计算得平均回收率为98.26%。对三批样品各进行双份测定,按规定方法制备测定,结果见表1。

图1哈日十二味散中异土木香内酯HPLC图

表1三批次供试样品含量测定结果汇总

3、讨论

（1）工艺条件优化研究。在供试品溶液制备环节,固定甲醇用量为28mL,分别探究超声时间25min、35min、45min对提取效率的影响,实验数据显示35min超声处理可获得最佳提取效果。基于已建立的测定方法对三批样品进行检测分析,结果显示异土木香内酯含量均超过0.18mg/g[9-13]。通过系统的方法学研究证实,该方法具有良好的选择性和稳定性,能有效排除其他药材成分对异土木香内酯测定的干扰影响,为该中药制剂的质量控制提供了可靠的分析方法。但考虑到药材来源及质量波动性,建议将含量限度适当放宽,初步规定本品每1g中异土木香内酯（C15H2002）含量应不低于0.12mg。该分析方法具有准确度高、操作便捷、重现性优良等优势,能够为哈日十二味散的质量标准化提供可靠的技术支持。

（2）蒙医药作为我国传统医药文化的重要组成部分，拥有数千年的实践积累和独特的理论体系。作为蒙医药的重要载体,蒙成药在临床治疗中发挥着不可替代的作用。然而,当前蒙成药的质量控制和标准化程度相对滞后,难以满足现代医药工业的监管要求。因此,加快推进蒙成药标准化建设已成为当前质量控制工作的重中之重。在制定和完善蒙成药质量标准时,要立足于临床实践,充分尊重和吸收前人的经验积累。同时,还需采用现代分析技术手段,从药效物质基础、药理作用机制、安全性评价等方面,对蒙成药的疗效和安全性开展系统的科学考察。

参考文献:

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文章来源:闫凤杰,边力,王燕燕,等.HPLC法测定蒙成药哈日十二味散中异土木香内酯的含量[J].中国品牌与防伪,2025,(04):21-23.