首页 > 论文范文 > 医药卫生论文 > 中医医学论文 > 中医骨伤科论文 > 重骨颗粒对膝骨关节炎患者免疫炎症水平的影响

重骨颗粒对膝骨关节炎患者免疫炎症水平的影响

2024-05-14 56 上传者：管理员

摘要：目的观察重骨颗粒对膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)患者临床症状及相关实验室指标的影响。方法纳入60例KOA患者并分为治疗组和对照组，每组各30例。对照组予以口服盐酸氨基葡萄糖片，治疗组在对照组基础上口服重骨颗粒，两组均治疗12周。观察治疗前后疗效性评价量表和中医症状评分的变化，检测治疗前后C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、IL-6、IFN-γ、骨代谢生化指标(尿Ca、尿P、BALP、TRACP-5b、IGF-1)、基质金属蛋白酶指标(MMP-1、MMP-13)、血清OPG、RANKL水平及OPG/RANKL比值。结果两组均无脱落病例，与治疗前比较，两组治疗后临床疗效指标较前均有所改善。治疗后观察组的疗效性评价量表、中医症状评分、CRP、ESR、IL-6、IFN-γ、尿Ca、尿P、TRACP-5b、MMP-1、MMP-13、RANKL水平均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),BALP、IGF-1、OPG水平显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)。观察期间两组均未见明显不良反应。结论重骨颗粒可改善KOA患者临床症状，改善炎症因子及骨代谢水平，其机制可能与影响OPG/RANKL/RANK信号通路的表达有关。

关键词：
中医中药
炎症因子
疗效性评价量表
膝骨关节炎
重骨颗粒
加入收藏

膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA )是一种常见的退化性关节疾病，以软骨基质破坏、关节软骨退化、软骨下骨形成及滑膜炎症为病理特征，临床表现为关节肿胀、疼痛僵硬，进行性加重及日常功能障碍等[1]。中国中老年群体有症状的KOA患病率为8.1%,并且还在不断上升，严重影响了患者生活质量，给社会和经济带来巨大负担[2]。因此，对膝骨关节炎的防治势在必行。越来越多的证据表明无论是局部还是全身，炎症及骨破坏在整个关节结构可通过一些负责免疫反应的信号通路发挥作用，其中骨保护素(osteoprotegerin, OPG)/核转录因子-κB受体活化因子配体(receptor of activator of nuclear factor-κB,RANK)/核转录因子-κB受体(receptor of activator of nuclear factor-κB ligand, RANKL)信号通路在KOA发病机制中发挥重要作用，为近年来中西医治疗KOA的热点研究方向[3,4,5]。

中医认为膝骨关节炎属于“骨痹”“膝痹”等范畴，许多医家认为本病基本病机为“肝肾亏虚”,其中存在软骨破坏及功能障碍等病理特征可提示肝肾不足。本课题组依据“乙癸同源”及“肝主筋，肾主骨”等理论研制出院内制剂重骨颗粒，前期经过临床及动物实验[6,7],在抗炎止痛等方面疗效满意，其机制可能与调控细胞因子的表达、减少软骨外基质的降解和破坏有关。且前期研究证明重骨颗粒不仅可以改善膝关节功能及疼痛症状、降低机体炎症因子及改善骨代谢水平，还可降低临床患者的中医证候评分。本研究旨在进一步明确重骨颗粒的临床疗效，观察其对血清OPG、RANKL、骨代谢、基质金属蛋白酶、血清炎症因子及生活质量等指标的改善情况，现报道如下。

1、资料与方法

1.1资料

1.1.1一般资料：

将2022年2月至2023年3月安徽中医药大学第一附属医院风湿科收治的60例肝肾亏虚型膝骨关节炎患者纳入研究，采用随机数字表将其分为对照组和治疗组，每组30例。对照组男11例，女19例；平均年龄(53.2±11.4)岁；平均病程(12.3±6.9)年。治疗组男性13例，女性17例；平均年龄(52.6±10.4)岁；平均病程(11.9±7.1)年。两组患者的一般资料有可比性(P>0.05)。本研究符合伦理要求且方案经医院伦理委员会审查后批准(伦理批号：2023AH-41)。

1.1.2纳入标准：

①中医：符合中医辨证肝肾亏虚证[8],主症：关节隐痛。次症：易感疲劳，腰酸膝软、周身乏力。舌质红，苔薄，脉细无力；②西医：符合KOA临床及影像学分类标准[9];③年龄18～75岁；④近半年内未服用免疫抑制剂和生物制剂；⑤患者本人同意并自愿签署知情同意书；⑥未经膝关节置换术或其他关节手术治疗。

1.1.3排除标准：

①处于妊娠期或哺乳期妇女；②有肝肾、血液系统等严重损害者；③肝炎、结核患者；④其他原因的骨关节炎或者继发性骨关节炎；⑤对本研究中药物过敏者；⑥依从性差者。

1.2方法

1.2.1治疗手段：

对照组给予常规药物盐酸氨基葡萄糖片(0.75 g/粒，正大清江制药有限公司)治疗，早晚各一次，每次口服0.75 g;治疗组在常规药物基础上加用重骨颗粒(杜仲、牛膝、桑寄生、千年健、鹿衔草、海螵蛸各10 g、骨碎补9 g,由本院制剂中心提供并配制),早晚各一次，每次一剂。均持续12周。

1.2.2安全性指标：

每周对受试者进行一次血常规、肝肾功能等指标监测，关注并记录出现的不良反应。

1.2.3临床疗效评价标准：

参照《中药新药临床研究指导原则》[10]:①显效表现为膝关节活动受限及肿痛基本消失；②有效表现为膝关节活动受限及肿痛较前改善明显；③无效表现为膝关节活动及肿痛较前无改善。

1.2.4中医症状评分：

从关节隐痛、潮热盗汗、腰膝酸软、周身乏力等四方面进行评分，严重程度为0～6分，分值越高则愈严重。

1.2.5炎症因子及基质金属蛋白酶指标：

治疗前后嘱患者空腹并采静脉血各5 mL,采用酶联免疫吸附法检测血沉(ESR)水平，采用酶联免疫吸附试验检测C反应蛋白(CRP)水平，并采用免疫比浊法检测血清IL-6、干扰素 γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)、基质金属蛋白酶13(MMP-13)水平，试剂盒均为仪器配套，由武汉基因美科技有限公司提供(批号GR-2022-11) ,上述操作严格按照说明书进行检测。

1.2.6骨代谢生化指标：

采用全自动生化分析仪测定尿钙与尿磷代谢水平，并采用酶联免疫吸附法检测BALP、TRACP-5b、IGF-1含量(批号GR-2022-12)。

1.2.7血清OPG、RANKL含量及比值：

采用酶联免疫吸附试验检测OPG、RANKL并计算OPG /RANKL比值(批号GR-2022-13)。

1.2.8评价量表：

测定治疗前后：①NRS疼痛评分量表(范围为0～10分，0分代表没有疼痛，10分则代表疼痛剧烈);②4 min步行测试(患者在平地通道上往返行走4 min并记录步行距离);③Lequesne指数评分；④ 下肢功能评分(lower extremity functional scale, LEFS)。共包括20个问题，问卷最高分为80分，分数越低，提示困难程度越显著[11,12,13,14]。

1.3统计学方法

使用SPSS26.0统计软件并分析数据，数据变量采用均数±标准差

来表示，计数资料采用卡方检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2、结果

2.1不良反应

治疗期间两组未出现头晕呕吐、心慌胸闷等不良反应。

2.2两组患者临床疗效

治疗组总有效率高于对照组(P<0.05),见表1。

2.3中医症状评分

两组各项中医症状评分与治疗前相比具有可比性(P>0.05)。与治疗前相比，两组治疗后关节隐痛、潮热盗汗、腰膝酸软、周身乏力等评分均有所下降(P<0.05),以治疗组更明显(P<0.05),见表2。

表1两组临床疗效比较[n (%)]

表2两组各项中医症状评分比较

2.4免疫炎症及基质金属蛋白酶指标

两组各项指标与治疗前相比具有可比性(P>0.05)。与治疗前相比，两组治疗后CRP、ESR、IL-6、IFN-γ、MMP-1及MMP-13水平均有所降低(P<0.05) ,以治疗组更明显(P<0.05),见表3。

表3两组各项免疫炎症及基质金属蛋白酶指标的比较

2.5骨代谢生化指标

两组各项指标与治疗前相比具有可比性(P>0.05)。与治疗前相比，两组治疗后BALP、IGF-1水平较前升高，尿Ca、尿P及TRACP-5b水平均有所降低(P<0.05) ,以治疗组更明显(P<0.05),见表4。

表4两组骨代谢生化指标的比较

2.6血清OPG、RANKL水平及OPG/RANKL比值

两组各项指标与治疗前相比具有可比性(P>0.05)。与治疗前相比，两组治疗后OPG水平及OPG/RANKL比值较前升高(P<0.05),以治疗组更明显(P<0.05);两组治疗后血清RANKL水平均有所降低(P<0.05) ,以治疗组更明显( P<0.05),见表5。

表5两组血清OPG、RANKL水平及OPG/RANKL比值

2.7评价量表

两组各项量表评分与治疗前相比具有可比性(P>0.05)。与治疗前相比，两组治疗后NRS、Lequesne指数及LEFS评分均有所降低(P<0.05) ,以治疗组更明显(P<0.05);4 min步行测试较前有改善，且治疗组更为明显，见表6。

表6两组治疗前后各项评价量表评分的比较

3、讨论

在KOA疾病发展过程中[15],膝关节会发生结构、功能和代谢的变化，其中包括细胞成分和细胞外基质成分的改变。故如何维持膝骨关节免疫炎症和细胞基质代谢的平衡，是治疗和改善KOA患者预后的重要切入点。

中医认为KOA的病因病机以肝肾亏虚为本。《素问·六节藏象论》言“肾者……其充在骨”,又言“肝者……其充在筋”。故治疗上多采用平补肝肾、筋骨并重的施治方案。重骨颗粒中杜仲、桑寄生、牛膝均归属肝肾经。有研究表明，杜仲可减少钙磷从肾流失，提高骨密度，并促进OPG、RANKL、RANK mRNA及蛋白表达[16]。牛膝轻疏灵动，善引药下达腰膝，与杜仲配伍，可抑制破骨细胞(osteoclast, OC)分化，维持钙磷水平，有效改善骨骼脆性从而逆转骨重建衰弱状态[17]。桑寄生则可改善MMP-13水平并显著抑制促炎因子IL-6的产生[18]。三药合用，补益肝肾，壮骨强筋，共为君药，在调节炎性因子水平、抗氧化应激、保护软骨细胞等方面具有多靶点、多途径等优势。海螵蛸和骨碎补，温肾强骨，收敛固涩，纳为臣药。据有关报道，骨碎补提取物对软骨细胞产生保护作用，其机制与减少肿瘤坏死因子α及抑制基质金属蛋白酶的表达有关[19]。佐使药物千年健、鹿衔草，舒筋通络，消肿止痛。药理学研究显示千年健对成骨细胞矿化有明显活性，提示千年健具有抗骨质疏松、抗炎镇痛等作用[20]。

在骨关节炎通路中，OPG/RANNKL/RANK信号系统作为关键介质，在破骨细胞分化及骨重建过程中起重要作用[21]。定位在成骨细胞(osteoblast, OB)上的NF-κB配体(RANKL)的受体激活剂通过与其位于破骨细胞上的受体RANK的相互作用来增强破骨形成，而由成骨细胞产生的骨保护蛋白(OPG)通过与RANKL结合来抑制这种破骨形成。因此OPG与RANKL间的平衡是保持骨代谢的关键因素。有研究通过敲除OPG或外源性添加RANKL刺激RANKL/RANK信号，通过抑制炎性细胞因子的产生，发现OPG/RANKL/RANK信号可以通过Toll样受体信号通路达到减轻炎症的作用[22]。此外，OPG/RANKL/RANK信号还可控制胸腺细胞介导的髓质形成和T细胞自我耐受的形成并调节性T细胞(Treg)的数量。IFN-γ可促进B细胞活化，抑制Treg细胞功能并加重炎症反应。本研究发现，重骨颗粒可升高OPG水平，降低CRP、ESR、IL-6、IFN-γ及RANKL水平。

同时，OPG/RANKL/RANK通路在骨骼生长、再生和维护中发挥关键作用。OB和OC是一相互拮抗、维持骨代谢平衡的细胞。骨特异性碱性磷酸酶(bone specific alkaline phosphatase, BALP)可反应OB活性及骨合成的情况。抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRACP-5b)是敏感程度较高的骨吸收指标，可反映OC活性，其水平的降低证明了骨破坏的进程得到抑制。胰岛素样生长因子(IGF-1)是一种源于肝脏的内分泌激素，在骨代谢过程中有助于促进软骨细胞的功能和修复，对骨骼的生长发育起重要作用。吴等[23]通过动物实验显示补充IGF-1对早期软骨修复有一定的促进作用，进一步证实了IGF-1的补充可增加反映成骨细胞活性的骨代谢标志物。基质金属蛋白酶(MMPs)是一类由软骨细胞分泌的胶原酶，可通过降解软骨细胞细胞外基质蛋白(extracellular matrix, ECM)、促进炎症发生等机制推进KOA发展[21]。前期研究发现，MMPs是KOA发病过程的主要推动力[24,25]。MMP-1可降解关节软骨ECM进而导致软骨病理性损伤，MMP-13可与MMP-1协同破坏Ⅱ型胶原蛋白，进一步加重关节破损。本研究发现，重骨颗粒能显著降低尿Ca、尿P,TRACP-5b、MMP-1及MMP-13水平，上调BALP、IGF-1水平。

综上所述，重骨颗粒可以减轻膝骨关节炎患者的临床症状，降低疾病活动程度，改善人体免疫炎症水平并提高其生活质量。其机制可能通过下调RANKL、IL-8、IFN-γ、尿Ca、尿P、TRACP-5b等正向调节因子，上调BALP、IGF-1、OPG水平，抑制OPG/RANKL/RANK信号的过度表达而实现。本课题组后续将加大样本量并延长治疗周期，进一步通过体内外实验为重骨颗粒改善膝骨关节炎并影响OPG/RANKL/RANK信号通路的表达提供依据。

参考文献:

[6]束龙武,庞利君,李云飞,等.重骨颗粒治疗肝肾亏虚型膝骨关节炎临床疗效及对骨代谢指标的影响[J].安徽中医药大学学报,2023,42(1):31-35.

[7]陈君洁,尚双双,李明,等.重骨颗粒对膝骨关节炎IL-17､IL-35细胞因子及软骨基质代谢的影响[J].中国骨质疏松杂志,2023,29(3):397-402.

[8]陈卫衡,刘献祥,童培建,等.膝骨关节炎中医诊疗专家共识(2015年版)[J].中医正骨,2015,27(7):4-5.

[10]郑筱萸.中药新药临床研究指导原则(试行)[M]北京:中国医药科技出版社,2002:116-119.

[11]万丽,赵晴,陈军,等.疼痛评估量表应用的中国专家共识(2020版)[J].中华疼痛学杂志,2020,16(3):177-187.

[16]秧荣昆,关智宇.基于肾主骨理论探讨杜仲通过调控OPG/RANKL/RANK通路对去势骨质疏松大鼠的影响[J].中成药,2023,45(1):70-74.

[19]陈敏,赵凯,王娟,等.骨碎补总黄酮抑制NF-kB信号通路干预大鼠椎间盘退变[J].中国组织工程研究,2020,24(17):2654-2659.

[20]张珍珍,李晋奇,曾明辉.千年健化学成分及其药理作用研究进展[J].成都中医药大学学报,2021,44(4):98-108.

[23]吴训,孟娟红,张建运,等.浓缩生长因子修复兔髁突全层软骨损伤[J].中国组织工程研究,2021,25(8):1166-1171.

文章来源:程园园,黄传兵,钱爱,等.重骨颗粒对膝骨关节炎患者免疫炎症水平的影响[J].中国骨质疏松杂志,2024,30(05):694-698.