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探讨BAFF及IL-4在Graves病患者机制中的作用及其诊断预测价值

2020-05-30 151 上传者：管理员

摘要：目的探讨人B淋巴细胞刺激因子(BAFF)和白细胞介素-4(IL-4)在毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)发病机制中的作用，评估BAFF、IL-4对Graves病的诊断预测价值。方法选取2018年12月至2019年6月蚌埠医学院第一附属医院内分泌科收治的Graves病患者58例(GD组)，其中新发者33例(GD1组)，治愈者25例(GD2组)；选取同期健康体检者27例作为对照(N组)。检测研究对象血清BAFF、IL-4和甲状腺功能等指标。结果GD组患者血清中BAFF、IL-4表达水平较N组明显上调，且GD1组较N组上调更加明显，GD1组患者血清中BAFF、IL-4表达水平较GD2组明显上调，差异均有统计学意义(P<0.05)。GD1组患者血清中BAFF、IL-4表达水平与促甲状腺激素受体抗体均具有一定的相关性(r=0.7541、0.6386,P<0.05);GD1组患者血清中BAFF表达水平与IL-4表达水平呈正相关(r=0.4952,P=0.034)。BAFF、IL-4联合诊断Graves病的受试者工作特征曲线下面积为0.889,BAFF、IL-4对Graves病均具有一定的诊断价值。结论Graves病患者血清中BAFF、IL-4表达水平高于健康者，且二者表达水平与促甲状腺激素受体抗体显著相关，说明BAFF、IL-4与Graves病的发病机制相关。

关键词：
人B淋巴细胞刺激因子
免疫性疾病
毒性弥漫性甲状腺肿
游离甲状腺素
甲状腺激素受体抗体
白细胞介素-4
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毒性弥漫性甲状腺肿（Graves病）是一种常见自身免疫性疾病，其特点是产生B淋巴细胞免疫反应，形成促甲状腺激素受体抗体（TRAb），引起甲状腺滤泡细胞增生，增加甲状腺激素分泌。人B淋巴细胞刺激因子（BAFF）属肿瘤坏死因子家族的成员，对B淋巴细胞分化、维持B淋巴细胞存活具有积极重要的作用。有研究表明，在Graves病患者血清中BAFF出现高表达的情况，并呈现出与TRAb具有一定的相关性[1]。白细胞介素-4(IL-4）是Ⅱ型辅助T淋巴细胞（Th2细胞）分泌的细胞因子，其生物作用包括刺激活化B、T淋巴细胞增殖，促进CD4+T淋巴细胞分化成Th2细胞。IL-4是一种免疫系统具有多效活性的细胞因子，又称为B淋巴细胞激活因子[2]。

1、资料与方法

1.1资料

1.1.1研究对象

选取2018年12月至2019年6月蚌埠医学院第一附属医院内分泌科收治的确诊为Graves病患者58例（GD组），其中新发者33例（GD1组），治愈者25例（GD2组）；选取同期健康体检者27例作为对照（N组）。

1.1.2诊断标准

GD组患者均符合《中国甲状腺疾病诊治指南》中Graves病的诊断标准。GD1组除符合《中国甲状腺疾病诊治指南》中Graves病的诊断标准外，还满足既往未有自身免疫性甲状腺病史亦未曾服用抗甲状腺药物；GD2组患者甲状腺激素水平[三碘甲状腺原氨酸总量（TT3）、甲状腺素总量（TT4）、游离三碘甲状腺原氨酸（FT3）、游离甲状腺素（FT4）、促甲状腺激素（TSH）]均在正常值范围内；TRAb低于正常值下线1U/L和（或）甲状腺免疫蛋白抗体（TGAb）、甲状腺微粒体抗体（TMAb）在正常范围内，伴甲状腺毒症的症状明显消失。

1.1.3排除标准

(1）有碘缺乏地区生活史、手术史或放射性碘治疗史；（2）合并其他自身免疫性疾病（如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等）及哺乳期、妊娠期的妇女；（3）合并恶性肿瘤或甲状腺异常回声结节怀疑恶性病变；（4）服用其他影响甲状腺激素水平的药物。

1.2方法

受检者晚餐后禁食、禁饮10h，于次日清晨采取3mL静脉血2570r/min离心10min分离上清液后装入离心管，冷冻保存于-80℃冰箱中。参照酶联免疫吸附试验试剂盒（上海快根生物科技有限公司，Elabscience品牌）说明书测定血清BAFF、IL-4水平。甲状腺功能7项（TT3、TT4、FT3、FT4、TSH、TGAb、TMAb）采用直接化学发光法测定。TRAb采用全自动电化学发光免疫分析法检测，试剂盒为美国西门子医学诊断股份有限公司产品（ADVIACentaur系列）。

1.3统计学处理

应用SPSS20.0统计软件进行数据分析，进行正态分布检验，符合正态分布计量资料以±s表示，计数资料以率或构成比表示，组间比较采用独立样本t检验、非参数检验、χ2检验等；采用单因素方差分析；使用受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）及95%可信区间（95%CI）评估各指标的预测价值。采用双侧检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1各组研究对象一般资料比较

各组研究对象性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2GD1组、GD2组患者甲状腺激素水平及相关抗体比较

GD1组、GD2组患者甲状腺激素水平及TRAb比较，差异均有统计学意义（P<0.05);GD1组、GD2组患者TGAb、TMAb比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表2。

表1各组研究对象一般资料比较

表2GD1组、GD2组患者甲状腺激素水平及相关抗体比较（±s)

2.3各组研究对象血清中BAFF、IL-4表达水平比较

GD组患者血清中BAFF、IL-4表达水平较N组明显上调，且GD1组较N组上调更加明显，GD1组较GD2组明显上调，差异均有统计学意义（P<0.05);GD2组患者血清中BAFF、IL-4表达水平与N组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表3。

表3各组研究对象血清中BAFF、IL-4表达水平比较（±s,pg/mL)

2.4BAFF表达水平与TRAb、FT4的相关性

GD1组患者血清中BAFF表达水平与TRAb具有显著相关性（r=0.7541,P<0.05);GD1组、GD2组患者血清中BAFF表达水平与FT4均无关（r=0.2580、0.1240,P>0.05）。见图1。

2.5IL-4表达水平与TRAb、FT4的相关性

GD1组患者血清中IL-4表达水平与TRAb、FT4均具有一定的相关性（r=0.6386、0.3907,P<0.05);GD2组患者血清中IL-4表达水平与FT4无关（r=-0.053,P>0.05）。见图2。

图1BAFF表达水平与TRAb、FT4的相关性

图2IL-4表达水平与TRAb、FT4的相关性

2.6BAFF表达水平与IL-4表达水平的相关性

GD1组患者血清中BAFF表达水平与IL-4表达水平呈正相关（r=0.4952,P=0.034);GD2组患者血清中BAFF表达水平与IL-4表达水平无关（r=-0.309,P>0.05）。见图3。

图3BAFF表达水平与IL-4表达水平的相关性

2.7检测BAFF、IL-4对Graves病的诊断价值

BAFF、IL-4联合诊断Graves病的AUC为0.889,95%CI为0.883～1.006。见图4。

图4BAFF、IL-4联合诊断Graves病的ROC曲线

3、讨论

本研究选取了85例研究对象（Graves病患者58例，健康体检者27例）探讨BAFF、IL-4在Graves病发病机制中的作用，并评估了BAFF、IL-4对Graves病的诊断预测价值，结果显示，GD组患者血清中BAFF、IL-4表达水平较N组明显上调，且GD1组较N组上调更加明显，GD1组较GD2组明显上调，差异均有统计学意义（P<0.05），表明BAFF表达水平可能与Graves病的发病机制相关，同时，也表明BAFF与患者病情也具有某些关联。本研究进一步分析了BAFF表达水平与IL-4表达水平的相关性，结果显示，GD1组患者血清中BAFF表达水平与IL-4表达水平呈正相关（P<0.05);GD2组患者血清中BAFF表达水平与IL-4表达水平无关（P>0.05），提示Graves病患者BAFF与IL-4潜在的调节作用可促进血清中TRAb的产生，并在发病过程中调节甲状腺功能。且GD1组患者血清中BAFF、IL-4表达水平与TRAb均具有一定的相关性，进一步提示了BAFF、IL-4在Graves病中的致病作用。

由于GD2组患者为Graves病治愈者，TRAb滴度几乎为零，分析意义不大。然而在GD1组患者血清中IL-4表达水平与FT4具有相关性，而BAFF的表达水平与FT4无关。表明BAFF、IL-4高表达与甲状腺功能亢进症（甲亢）的发生机制相关，从GD1组与GD2组分析数据的结果差异可推测，BAFF、IL-4的差异表达还可能与疾病的病情相关。另外，相关研究结果显示，血清中BAFF、IL-4表达水平与TRAb的关系存在性别差异[3]，但这一结果可能尚需更大的研究样本量进一步验证。

BAFF表达于中性粒细胞、单核细胞、树突状细胞、淋巴间质细胞和恶性B淋巴细胞中，其与受体配对结合后在调节B淋巴细胞的成熟、增殖和分化、延长B淋巴细胞存活等方面具有重要作用。有不少文献报道，BAFF参与了几种自身免疫性疾病的发病机制及致病性抗体的产生[4,5,6,7]，如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、干燥综合征、系统性硬化等。通过多种信号通路的整合作用，导致BAFF表达失调以促进过渡性B淋巴细胞产生自身免疫性抗体[8]；后来又有文献报道，自身免疫性甲状腺疾病患者血清中BAFF表达水平上调[9]。LIN等[1]研究表明，自身免疫性甲状腺疾病组患者血清中BAFF表达水平高于对照组，BAFF与TRAb、FT4显著相关；另外，CHENG等[10]研究证明，骨桥蛋白（OPN）在活跃性Graves病患者血清中表达水平上调，且与TRAb具有相关性，后来又发现健康对照组研究对象血清OPN与BAFF表达水平无关，而Graves病和桥本甲状腺炎患者血清OPN与BAFF表达水平相关，提示BAFF和OPN的存在是同步的，间接提示BAFF在Graves病患者血清中高表达的情况。以上这些研究结果与本研究结果几乎是一致的，所不同的是，本研究结果显示，GD1组、GD2组患者血清中BAFF表达水平与FT4表达水平均无关（P>0.05），造成这种差异的可能为研究样本量有限及研究所选人群的不同。CHENG等[10]研究还表明，活跃性甲亢组患者血清中OPN表达水平高于非活跃性甲亢组，间接提示BAFF表达水平也符合这一特征。且LIN等[1]研究也表明，活跃性甲亢组患者血清中BAFF表达水平与TRAb具有明显相关性，而在非活跃性甲亢组患者血清中二者无关。进一步提示BAFF可能不仅参与了Graves病的发病机制，还可能与该病患者的病情发展相关。本研究结果显示，GD1组患者血清中BAFF表达水平明显高于GD2组，验证了这一猜想。

ROBINSON等[11]通过利用BAFF、IL-4、IL-2构建了B淋巴细胞培养体系，结果显示，IL-4、BAFF、IL-2通过可分离的编程增殖、存活和生发中心B淋巴细胞表型获取，驱动活化B淋巴细胞命运的不同成分，表明B淋巴细胞的增殖、分化完成分泌抗体的过程不是某一单独因子的作用，可能是作为几种因子的共同刺激分子参与了自身抗体的分泌过程。辅助性T淋巴细胞可能分泌多种细胞因子，这些因子是帮助B淋巴细胞的分子体现[12]。IL-4是Th2细胞分泌的细胞因子，主要作用包括刺激活化B淋巴细胞和T淋巴细胞增殖、CD4+T淋巴细胞分化成Th2细胞等。T淋巴细胞受自身条件的控制，影响IL-4的产生、B淋巴细胞的激活和B淋巴细胞的耐受[13]。为此，作者猜想，IL-4与BAFF可能作为共同刺激因子，在B淋巴细胞增殖、成熟、分化过程中具有协同作用，共同参与了致病性抗体的产生。与本研究预期结果相符的是，GD1组患者血清中IL-4表达水平明显高于N组、GD2组，且GD1组患者血清中IL-4表达水平与TRAb具有显著相关性（P<0.05),IL-4与FT4亦具有较弱的相关性（P<0.05）。而GD2组患者血清中IL-4表达水平与N组比较，差异无统计学意义（P>0.05），可能是GD2组患者为治愈者，与TRAb转阴有关，均表明IL-4表达水平与甲亢发病机制具有相关性。至于本研究结果显示，GD2组患者血清中IL-4表达水平与FT4无关，可能与研究样本量及选取人群有关。

BAFF除对B淋巴细胞具有作用外，还可通过BAFF-R介导的磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路的激活而影响T淋巴细胞的生理活性[14]，成熟的T淋巴细胞是B淋巴细胞成熟分化产生自身抗体的一个主要因素，实现这一重要作用主要是借助Th2细胞分泌的一些重要细胞因子。BAFF高表达有利于通过某种信号途径刺激Th2细胞产生炎性细胞因子，如IL-4[15]，二者协同作用作为共同刺激因子参与了Graves病的发生、发展。从本研究结果可见，GD1组患者血清中BAFF表达水平与IL-4表达水平呈正相关（P<0.05）。而在GD2组患者血清中二者表达水平无关（P>0.05），造成本研究结果与预期不一致的原因可能是，由于人口种族、样本量、用于量化的方法和疾病状态等，需要更多的研究来澄清这种不一致。本研究还分析了检测BAFF、IL-4对Graves病的诊断价值，结果显示，BAFF、IL-4联合诊断Graves病的AUC为0.889，说明BAFF、IL-4对Graves病均具有一定的诊断价值，有可能为以后Graves病的临床诊断标准提供新的线索。

王丹,毕娅欣,徐二琴,金国玺.BAFF及IL-4在Graves病患者血清中的表达水平及意义[J].现代医药卫生,2020,36(10):1448-1451+1454.

基金:安徽省蚌埠市科技局科技指导项目(20160328);