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896例儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌分型及耐药情况调查

2021-11-25 82 上传者：管理员

摘要：目的分析儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌分型及耐药性情况,为预防和治疗儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌提供依据。方法选择2017年6月—2020年8月河南省济源市疾病预防控制中心收集的896例呼吸道感染儿童痰液标本,采用V因子、V+X、X因子需求试验鉴定流感嗜血杆菌,采用玻片凝血法进行血清学分型,统计流感嗜血杆菌感染分型情况。采用K-B纸片扩散法进行流感嗜血杆菌药物敏感性检验,采用头孢硝噻吩显色法检测不可分型流感嗜血杆菌感染菌株中β-内酰胺酶表型,并分析其耐药率。结果 896例患儿共分离出98株流感嗜血杆菌,分离率为10.94%（98/896）,98株中不可分型流感嗜血杆菌62株,可分型流感杆菌36株（其中a型1株、b型2株、c型4株、d型26株、e型0株、f型3株）。896例患儿中男性574例,女性322例,其中感染流感嗜血杆菌男性58例（10.10%）、女性40例（12.42%）,不同性别呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌检出率比较差异无统计学意义（χ2=1.138,P=0.286）; 896例患儿中年龄<1岁438例,1～3岁246例,>3岁212例,分离出流感嗜血杆菌分别为56例（12.79%）、32例（13.01%）、10例（4.72%）,不同年龄呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌检出率比较差异有统计学意义（χ2=11.039,P=0.004）。可分型流感嗜血杆菌和不可分型流感嗜血杆菌对阿莫西林-克拉维酸、氧氟沙星、利福平、氨苄青霉素-舒巴坦的耐药率均为0.00%;62株不可分型流感嗜血杆菌中,β-内酰胺酶阳性菌株42株,检出率为67.74%,β-内酰胺酶阴性菌株20株,β-内酰胺酶阳性菌株对甲氧苄啶-磺胺甲基异恶唑、四环素、氨苄西林的耐药率比β-内酰胺酶阴性菌株高（均P<0.05）。结论济源地区儿童呼吸道感染中可分型流感嗜血杆菌以d型为主,临床用药时应根据药敏结果合理选用抗菌药物,减少耐药菌株的产生。

关键词：
儿童呼吸道感染
抗菌药物
流感嗜血杆菌
耐药性
血清学分型
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呼吸道感染是一种临床上常见的疾病，好发于小儿，具有发病率高、迁延难愈的特点，严重影响患者的生命健康[1]。流感嗜血杆菌作为一种无运动力、多形态的革兰阴性短小杆菌，菌体可寄生在人体的上呼吸道黏膜表面，造成化脓性感染、呼吸道感染等[2]。相关研究指出[3],小儿自身免疫力较低，且呼吸道感染患儿早期临床症状并不明显，给诊断治疗带来较高难度，容易错失最佳治疗时机。近年来，抗菌药物的大量应用，使流感嗜血杆菌的耐药性逐渐上升[4]。为有效指导呼吸道感染患儿合理应用抗菌药物，本研究对河南省济源市疾病预防控制中心收集的896例呼吸道感染儿童痰液标本，进行流感嗜血杆菌检测和分型，并分析其耐药性，现报道如下。

1、资料与方法

1.1资料来源

本研究经济源市疾病预防控制中心医学伦理委员会批准，选择2017年6月—2020年8月济源市疾病预防控制中心收集的896例呼吸道感染患儿痰液标本进行流感嗜血杆菌检测和分型及药敏实验。纳入标准：①均为呼吸道感染患儿；②年龄小于12岁；③患儿家属均签署知情同意书；④痰液标本合格者。排除标准：①伴有严重的肝、肾等脏器功能不全者；②伴有慢性肺疾病；③临床资料缺失者；④近3 d内接受抗生素药物治疗者；⑤伴有严重先天性心脏病者；⑥伴有其他全身性感染者。

1.2方法

1.2.1样本采集及检测

禁食4 h后采集所有患儿痰液标本，采用漱口水将患儿口腔进行清洁，取半卧位，用压舌板将舌根固定，之后在患儿咽部插入一次性无菌吸痰管进行吸痰，采用0.9%氯化钠注射液漂洗分泌物标本，并将标本接种于流感嗜血杆菌选择性平板及哥伦比亚血琼脂平板(均购自法国生物梅里埃公司),于35℃条件下，放置在5%二氧化碳培养箱中21 h左右，待孵育结束时，以似露液状、无色透明的微小菌落作为可疑菌落，之后采用革兰氏染色，染色结果显示为革兰氏阴性短小杆菌于血琼脂平板实施卫星实验，若结果为阳性，采用V因子、V+X、X因子需求试验[5],上述因子均购自法国生物梅里埃公司。流感嗜血杆菌的鉴定方法：只有V+X因子周边生长的菌落即为流感嗜血杆菌[5]。

1.2.2血清学分型

对上述分离的流感嗜血杆菌采用玻片凝血法行血清学分型，取流感嗜血杆菌菌液10μl于载玻片上，将其与各分型的流感嗜血杆菌荚膜型特异性抗血清(日本生研株式会社)混匀，若1 min肉眼可见上述混匀液体凝集，则为可分型流感嗜血杆菌，可判定对应的血清分型(a、b、c、d、e、f型);若均不凝集，则为不可分型流感嗜血杆菌[5]。

1.2.3药敏试验

用K-B纸片扩散法[6]进行药敏实验，按照美国临床实验室标准化研究所(CLSI)2016年版标准[7]判定药敏结果。使用的抗生素包括头孢克洛、头孢曲松、阿莫西林-克拉维酸、甲氧苄啶-磺胺甲基异恶唑、氧氟沙星、利福平、氨苄西林、头孢噻肟、氨苄青霉素-舒巴坦、克拉霉素、氯霉素、四环素、亚胺培南。使用的质控菌株为流感嗜血杆菌ATCC49766,ATCC49247。

1.2.4β-内酰胺酶表型检测方法

采用头孢硝噻吩显色法[8]检测上述不可分型流感嗜血杆菌中β-内酰胺酶表型情况，用无菌去离子水浸润头孢硝噻吩纸片(购自法国生物梅里埃公司),之后蘸取不可分型流感嗜血杆菌菌落，10 min观察结果，若60 min内未见颜色变化即为β-内酰胺酶阴性，阴性对照质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC25923;若60 min内可见颜色变化即为β-内酰胺酶阳性，阳性对照质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC29213。

1.3统计学分析

采用SPSS 18.0软件进行数据分析，以例数(%)表示计数资料，采用检验或Fisher确切概率法，P<0.05为差异有统计学意义。

2、结果

2.1流感嗜血杆菌分离情况

896例患儿共分离出98株流感嗜血杆菌，分离率为10.94%(98/896),其中不可分型流感嗜血杆菌62株，可分型流感杆菌36株(其中a型1株、b型2株、c型4株、d型26株、e型0株、f型3株)。

2.2不同年龄、性别呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌分离率比较

不同性别呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌分离率比较差异无统计学意义(P>0.05),不同年龄呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌分离率比较差异有统计学意义(P<0.05),且年龄<1岁、1～3岁呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌分离率高于>3岁患儿(P<0.05),见表1。

表1不同年龄、性别呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌分离率比较

2.3可分型流感嗜血杆菌和不可分型流感嗜血杆菌对不同药物的耐药率

可分型流感嗜血杆菌和不可分型流感嗜血杆菌对阿莫西林-克拉维酸、氧氟沙星、利福平、氨苄青霉素-舒巴坦的耐药率均为0.00%;可分型流感嗜血杆菌对头孢克洛、头孢曲松、阿莫西林-克拉维酸、氧氟沙星、利福平、头孢噻肟、氨苄青霉素-舒巴坦、克拉霉素、氯霉素、四环素、亚胺培南的耐药率均<10%;不可分型流感嗜血杆菌对阿莫西林-克拉维酸、氧氟沙星、利福平、头孢克洛、头孢曲松、头孢噻肟、氨苄青霉素-舒巴坦、克拉霉素、亚胺培南的耐药率均<10%,见表2。

表2分析可分型流感嗜血杆菌和不可分型流感嗜血杆菌对不同药物的耐药率

2.4不可分型流感嗜血杆菌中β-内酰胺酶阳性和阴性菌株对抗菌药物的耐药率

62株不可分型流感嗜血杆菌中，β-内酰胺酶阳性菌株42株，检出率为67.74%,β-内酰胺酶阴性菌株20株，β-内酰胺酶阳性菌株对甲氧苄啶-磺胺甲基异恶唑、四环素、氨苄西林的耐药率比β-内酰胺酶阴性菌株高(P<0.05),见表3。

表3不可分型流感嗜血杆菌中β-内酰胺酶阳性和阴性菌株对抗菌药物的耐药率

3、讨论

呼吸道感染属于一种临床上常见的呼吸道疾病，其病原体复杂多样，对机体影响较大的为流感嗜血杆菌，严重影响患儿的生命健康[9,10]。目前，抗菌药物的广泛使用，使得流感嗜血杆菌对抗菌药物产生较高的耐药率，在一定程度上增加了临床治疗难度。因此，研究呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌感染分型及药敏情况对于提高呼吸道感染患儿的治疗效果具有重要意义。

本研究结果显示，896例患儿共分离出98株流感嗜血杆菌，分离率为10.94%,与既往研究结果[11]类似。有研究[12]指出，可分型流感杆菌以b型为主，而本研究结果显示，可分型流感杆菌36株以d型为主，可能与地区生活环境、样本量不同等有关。年龄<1岁、1～3岁呼吸道感染患儿流感嗜血杆菌分离率高于年龄>3岁，与既往研究结果[13]相符，可能与低龄患儿自身免疫功能较低，更容易感染流感嗜血杆菌等有关。相关研究指出[14],流感嗜血杆菌是引起小儿严重细菌感染的主要致病菌之一，当呼吸道感染患儿机体免疫功能降低时，可诱发肺部感染，在一定程度上会加重患者病情。近年来，氨苄西林的广泛使用，随后不断检出耐药菌，且各地耐药率不同，甚至存在很大差异，目前临床上已产生耐氨苄西林的流感嗜血杆菌，在很大程度上增加了感染控制难度，因此临床治疗感染流感嗜血杆菌的呼吸道感染患儿应慎用氨苄西林[15]。本研究结果显示，流感嗜血杆菌对阿莫西林-克拉维酸、氧氟沙星、利福平、氨苄青霉素-舒巴坦的耐药率均较低，临床上针对感染流感嗜血杆菌的呼吸道感染患儿可给予阿莫西林-克拉维酸、氧氟沙星、利福平、氨苄青霉素-舒巴坦治疗。既往研究指出[16],若菌株β-内酰胺酶阳性，提示该菌株对氨苄西林存在一定的耐药率，因此对β-内酰胺酶表型进行检测可快速预测对相关抗菌药物的敏感性。本研究结果显示，62株不可分型流感嗜血杆菌中，β-内酰胺酶阳性菌株42株，检出率为67.74%,β-内酰胺酶阴性菌株20株，β-内酰胺酶阳性菌株对甲氧苄啶-磺胺甲基异恶唑、四环素、氨苄西林的耐药率比β-内酰胺酶阴性菌株高，因此对β-内酰胺酶阳性菌株临床用药时应慎重，选择低耐药率的抗菌药物。

综上所述，896例呼吸道感染儿童感染的可分型流感嗜血杆菌以d型为主，临床上针对呼吸道感染患儿，应预先明确流感嗜血杆菌的感染情况及对抗菌药物的耐药情况，合理选用抗菌药物，减少耐药菌株的产生，确保治疗效果。

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[16]杨耀锋,徐兰飞,金洪星,等呼吸道感染患儿不可分型流感嗜血杆菌分离率和耐药性分析[J]儿科药学杂志,2020,26(8):41-45.