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血清miR-146a与miR-34a表达水平对ACS冠脉病变及预后评估价值

2020-09-17 200 上传者：管理员

摘要：目的:探讨急性冠状动脉综合征(ACS)患者血清miR-146a、miR-34a表达水平及临床价值。方法:选取2018年2月-2019年7月在内蒙古医科大学附属医院行冠状动脉(冠脉)造影术的100例ACS患者为研究对象,同期选取100例体检人群为对照组。造影结果行Gensini评分,将ACS患者分为轻度组(47例)、中度组(34例)、重度组(19例)。采用实时荧光定量PCR法检测各组miR-146a、miR-34a表达水平。随访患者1年内主要不良心血管事件(MACE)发生情况。结果:ACS3组患者血清miR-146a、miR-34a表达均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重度组miR-146a、miR-34a表达水平高于中度组与轻度组,并且中度组miR-146a、miR-34a表达水平高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。随访1年,MACE亚组血清miR-146a、miR-34a表达水平高于非MACE亚组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ACS患者血清miR-146a、miR-34a呈高表达,并与冠脉病变程度密切相关。

关键词：
主要不良心血管事件
冠状动脉病变
心血管
急危重症
急性冠状动脉综合征
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急性冠脉综合征(ACS)是最常见的急危重症之一[1]。近年来ACS诊疗进展较大,但预后未见显著改善,原因在于主要不良心血管事件(MACE)发生率未有效降低[2]。临床尚无较好评估ACS患者预后的指标[3]。近年来微小RNA(miRNAs)引起关注,其与多种疾病发生发展及预后相关,故有学者认为miRNAs可能与ACS病变存在相关性[4]。本研究探讨miRNAs表达水平与冠状动脉(冠脉)严重程度及预后关系,分析其在ACS患者早期监测和预后评估中的价值。

1、对象与方法

1.1对象

选取2018年2月-2019年7月内蒙古医科大学附属医院收治行冠脉造影术ACS患者100例,其中男73例,女27例。纳入标准:①ACS诊断胸痛持续时间>30min;②心电图两个以上导联提示心肌缺血;③血清心肌酶cTnI和CK-MB超过正常值两倍以上,但不稳定型心绞痛可正常;④冠脉造影提示血管病变。

选取同期健康体检人群100例纳为对照组。纳入标准:①既往无冠心病及心肌梗死、心肌炎、心肌病、心力衰竭(心衰)史;②年龄<75岁。

本研究经医院伦理委员会同意并签署知情同意书。两组研究对象排除标准:急性心衰及严重心律失常者;严重感染或恶性肿瘤病史患者;血液系统疾病及自身免疫性疾病者。

1.2标本采集

两组次日清晨空腹采集肘静脉血4ml,室温下静置30min,400×g离心10min后取上清液,置入-80℃冰箱保存。

1.3血清miRNAs检测

①取500μl血清与1mlTRIzol混匀室温静置15min后,依次加异丙醇、75%乙醇重复上述操作,提取总RNA,-20℃保存。

②用cDNA反转录试剂盒对总RNA行逆转录,合成cDNA产物,目标引物序列:miR-146a:(F)5'-GGTTTCATCCAGGATCGAGCAGG-3',(R)5'-ACAGGCCTTATGGTCACGAAGGC-3';miRNA-34a:(F)5'-GCCCTGGCAGTGTCTTAG-3',(R)5'-CAGTGCGTGTCGTGGAGT-3';内参GAPDH:(F)5'-CGTTAAGGCCGCTAGACCCGGGA-3',(R)5'-GCGGCCTTAAAGTACGTACA-3'。在冰上构建逆转录RNA为cDNA混合反应体系:100mmol/LdNTP0.15μl、50U/μl多链逆转录酶1μl、10×逆转录缓冲液l.5μl、20U/μlRNA酶抑制剂0.19μl、无核酸酶水4.16μl,总体积7μl。分别加1.6ng/μlRNA液5μl、5×逆转录引物3μl,混匀、5000g离心1min。循环反应:16℃30min;42℃30min;85℃5min,再立即插入冰浴至少1min,置-20℃保存。

③实时荧光定量PCR仪行qRT-PCR反应。按试剂盒提示准备PCR扩增体系:cDNA2μl、上下引物各3μl、Taq聚合酶0.5μl,总体积25μl。反应条件:95℃变性15s;60℃退火1min,共扩增30循环后,终止扩增反应。采用2-△△CT法计算miR-146a、miR-34a表达水平相对定量值。

1.4冠脉造影

由本院心内科医生操作,DSA图像处理系统定量分析冠脉狭窄病变程度,对造影结果行Gensini评分[5],根据分值差异将ACS组患者分为:轻度组,47例,评分<50分;中度组,34例,评分50～90分;重度组,19例,评分>90分。

1.5随访

所有患者术后均采用门诊复查或电话方式随访,时间点分别为术后1个月、3个月、6个月、1年,记录随访期间发生的MACE事件,终点事件主要包括:心源性死亡、再发性ACS、卒中及恶性室性心律失常。根据MACE发生情况将ACS组分为两个亚组:MACE亚组(18例)和非MACE亚组(82例)。

1.6统计学处理

采用SPSS20.0行统计学分析。符合正态分布的计量资料以x±s表示,符合齐性检验组间比较用成组t检验,冠脉病变组间比较用ANOVA检验,亚组间比较用LSD-t检验;计数资料采取百分数表示,比较用χ2检验。统计分析以α=0.05为检验水准。

2、结果

2.1一般资料比较

两组性别、年龄、高血压、糖尿病、吸烟史等差异无统计学意义(P>0.05),见表1。

2.2生化资料比较

ACS组CK-MB、cTnI、WBC、AST、LDL-C高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组间血肌酐、空腹血糖水平比较差异无统计学意义(P>0.05),见表2。

2.3血清miR-146a及miR-34a表达水平比较

ACS组血清miR-146a及miR-34a表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001),见表3。

2.4不同冠脉病变miR-146a、miR-34a表达

重度组血清miR-146a、miR-34a表达水平高于中度组与轻度组,差异有统计学意义(P<0.001),而中度组的两种指标水平高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.001),见表4。

2.5MACE与miR-146a、miR-34a表达关系

随访1年,ACS患者MACE发生率18.00%,其中心源性死亡2例、再发性ACS3例、卒中10例及恶性室性心律失常3例;MACE亚组患者造影后接受支架植入术6例(33.33%),接受急诊静脉溶栓治疗12例(66.67%);非MACE亚组患者造影后接受支架植入术76例(92.68%),接受急诊静脉溶栓治疗6例(6.52%),两亚组患者造影后治疗方式存在显著差异(χ2=35.224,P<0.001)。发生MACE患者血清miR-146a、miR-34a表达水平高于未发生MACE患者,差异有统计学意义(P<0.001),见表5。

表1两组一般临床资料分析

表2两组生化资料比较

表3两组血清miR-146a、miR-34a相对表达量比较

表4不同冠脉病变ACS患者血清miR-146a、miR-34a表达水平比较

表5ACS的MACE发生与血清miR-146a、miR-34a表达水平的关系

3、讨论

miRNA是一组单链非编码小分子RNA,通过抑制mRNA编码蛋白质翻译过程,调控目标基因表达[6]。研究表明,部分miRNA参与心肌细胞的生长及凋亡过程,进而参与心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病发生发展[4]。研究者认为miRNA对于ACS患者PCI术后冠脉再狭窄具有较好的预测价值[7]。miR-146a通过对靶基因的调控,参与肿瘤、心血管疾病等多种疾病病理过程。既往研究显示,miR-146a在动脉粥样硬化斑块中表达水平较对照组升高2.87倍[8]。miR-34a在心脏、肾脏等组织中高表达[9],研究表明miR-34a在动脉粥样硬化斑块中高表达[10,11]。IL-1β、TNF-α等促炎细胞因子可诱导内皮细胞中miR-145等miRNA分子表达水平快速上调,而miRNA又能通过抑制RNA结合蛋白表达及影响整合素连接激酶表达等多种途径,抑制内皮细胞活化[12,13,14]。另据研究发现,给小鼠注射anti-miR-34a能使凋亡相关蛋白表达显著减少,抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著增多,从而降低内皮细胞凋亡数量[15,16]。因此,miR-34a表达水平降低可促使抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,从而抑制内皮细胞凋亡[17]。这些都提示miR-146a、miR-34a在冠心病发病中扮演重要角色。然而目前ACS患者血清中miR-146a、miR-34a表达水平及与冠脉病变程度相关性等问题至今未见临床报道,因此本研究通过检测ACS患者血清miR-146a、miR-34a表达水平,分析其与冠脉病变程度及疾病预后关系,以探究其在ACS早期诊断及预后评估价值。

先前已有研究发现,血清miR-146a、miR-34a与多种心血管疾病发生发展有着密切关系,可作为心血管疾病风险预测和预后评估的新指标[18]。本研究进一步分析这两种血清miRNAs在ACS患者表达水平及在不同冠脉病变程度患者中表达水平差异。结果显示,此2种miRNAs在ACS患者循环血清中表达水平均显著高于对照组,同时随着冠脉病变加重,在患者体内表达水平也呈现增高趋势,由此提示ACS患者冠脉病变程度越重,血清miR-146a、miR-34a表达水平越高。此外,本研究对入组ACS患者行1年随访,发现发生MACE患者miR-146a、miR-34a表达水平较未发生MACE患者显著升高,提示miR-146a、miR-34a不仅可作为ACS早期诊断标志物,还可作为ACS病情预测与预后评估潜在标志物。

综上所述,ACS患者血清miR-146a、miR-34a表达水平升高,且随着冠脉病变程度加重而升高,与MACE发生相关;因此miR-146a、miR-34a可作为辅助ACS病情监测及预后评估的潜在标志物。但本实验属于小规模临床研究,仍需进一步扩大样本量来支持现有研究结果。

参考文献：

[1]秦小伟,项鹰羽,黄立娟.循环miRNA在急性冠脉综合征中的研究进展[J].国际免疫学杂志,2018,41(1):89-93.

[7]马智会,朱永武.冠状动脉血管内超声钙化特征联合血清miRNA-1､miRNA-208b对NSTE-ACS患者PCI术后冠状动脉再狭窄的预测价值[J].临床心血管病杂志,2019,35(9):795-800.

[10]刘艳宾,杨树涵,陈红伟,等.老年冠心病患者血清miRNA-34a表达及其临床意义[J].实用医学杂志,2019,35(22):3482-3486.

[13]王木琼,孙向阳.美托诺尔对急性心肌梗死患者miRNA-423-5p与整合素连接激酶的影响[J].临床心血管病杂志,2019,35(10):899-902.

牛君义,陈凤英,狄祥龙,陈敬严,谢秀峰.血清miR-146a与miR-34a表达水平对ACS冠脉病变及预后评估价值[J].临床心血管病杂志,2020,36(09):815-818.