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2020-2022年1501例地中海贫血疑似病例基因检测结果分析

2024-12-02 49 上传者：管理员

摘要：目的：探讨桂林市临桂区的地贫基因类型和频率分布，为该地区地贫防控工作提供参考。方法：对在桂林医学院第二附属医院进行地中海贫血基因检测的1 501例疑似病例的检测结果进行回顾性分析。采用跨越断裂点PCR（gap-PCR）技术检测缺失型α地中海贫血基因，PCR-反向点杂交（PCR-RDB）技术检测非缺失型α地中海贫血基因和β地中海贫血基因。结果：在1 501例被检者中，共检出地贫基因携带者678例，检出率为45.17%，其中α地贫（包括缺失型α地贫和非缺失型α地贫）379例，检出率为25.25%，以基因型--SEA/αα（227例，15.12%）为主，其次为-α3.7/αα（53例，3.53%）;β地贫270例，检出率为17.99%，以基因型βCD41-42/βN（144例，9.59%）为主，其次为βCD17/βN（66例，4.40%）;α地贫复合β地贫29例，检出率为1.93%，以基因型--SEA/αα复合βCD41-42/βN（5例，0.33%）最为常见。结论：桂林市临桂区属于地中海贫血高发区，携带者基因型复杂多样，具有遗传异质性。本研究结果为该地区的遗传咨询和产前诊断提供了科学依据。

关键词：
地中海贫血
基因型
染色体隐性遗传
桂林市临桂区
频率
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地中海贫血（thalassemia，简称“地贫”）又称海洋性贫血或珠蛋白生成障碍性贫血，属于单基因常染色体隐性遗传性疾病，是一组由于1种或1种以上珠蛋白基因缺失或突变，导致相应珠蛋白肽链合成不足或缺如而引起的遗传性溶血性疾病。其中，α地贫和β地贫为常见的地贫类型，α地贫又分为缺失型α地贫和非缺失型α地贫，我国α地贫患病率高于β地贫，且以缺失型α地贫为主[1]。现阶段，对于地贫患者而言，除了对症输血治疗外，仍缺乏经济且行之有效的治疗措施[2]。因此，在地贫高发区大规模开展婚前、产前筛查及遗传咨询是非常有必要的，这是避免重型地贫患儿出生的最佳预防措施[3]。桂林市临桂区属于地贫高发区，地贫检出率高且存在明显遗传异质性。本研究通过对来桂林医学院第二附属医院进行地贫基因筛查的1 501例被检者进行回顾性分析，以了解当地的地贫基因携带情况及分布，为当地地贫防控工作提供参考依据。

1、材料和方法

样本来源

研究对象为2020年1月-2022年12月来桂林医学院第二附属医院中心实验室进行地贫基因检测的1 501例疑似地贫患者，年龄为10小时至93岁1个月，平均年龄19.80±0.10岁。本研究已获得受试对象或其监护人知情同意。

试剂与仪器

缺失型α-地中海贫血基因检测试剂盒、非缺失型α-地中海贫血基因检测试剂盒、β-地中海贫血基因检测试剂盒均购自亚能生物技术（深圳）有限公司。7500型荧光定量PCR仪购自美国Applied Biosystems公司，Genesy 96T基因扩增热循环仪购自西安天隆科技有限公司，EXM3000型全自动核酸提取仪购自重庆中元汇吉生物技术有限公司，JS-2000型全自动凝胶成像系统购自上海培清科技有限公司，YN-H48型全自动核酸分子杂交仪购自亚能生物技术（深圳）有限公司。

地中海贫血基因检测方法

采用跨越断裂点PCR(gap-PCR）法检测3种缺失型α地中海贫血（包括--SEA、-α3.7、-α4.2）；采用PCR体外扩增和DNA反向点杂交（PCR-RDB）法检测3种非缺失型α地中海贫血（包括αWSα、αCSα、αQSα）及17种中国人常见的点突变型β地中海贫血基因（包括41-42M/N、654M/N、-28M/N、71-72M/N、17M/N、βEM/N、43M/N、-29M/N、31M/N、-32M/N等10种杂合突变和IVS-I-1M、27/28M、-30M、14-15M、CAPM、Int M和IVS-I-5M等7种不区分型别的突变）。

统计学分析

使用Excel 2016录入、整理数据，以分析各种地贫基因的检出率和构成比。

2、结果

地中海贫血基因检测总体情况分析

1 501例被检者中最终有678例被确诊为地贫基因携带者，检出率为45.17%。其中2020-2022年被检例数分别为679例、458例、364例，确诊为地贫携带者例数分别为235例、241例、202例，检出率分别为34.61%(235/679）、52.62%(241/458）、55.49%(202/364）（表1）。根据携带基因的不同进行分类，α地贫携带者379例，检出率为25.25%(379/1 501),β地贫携带者270例，检出率为17.99%(270/1 501),α地贫复合β地贫携带者29例，检出率为1.93%(29/1 501）。

α地贫检测结果分析

379例α地贫携带者中，检出缺失型α地贫携带者329例，包括6种α缺失类型，其中检出率最高的3种基因型分别为--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα,--SEA/αα型最为常见；检出非缺失型α地贫携带者39例，共检出5种基因型，其中最常见的基因型为αCSα/αα，其次是αQSα/αα和αWSα/αα；检出缺失型复合非缺失型α地贫患者11例，包括3种基因型，其中基因型--SEA/αCSα最常见（表2）。

β地贫检测结果分析

最终确诊的β地贫携带者为270例，共检出βCD17/βN、β-28/βN、β-29/βN、βCD41-42/βE、βCD41-42/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、βCD71-72/βN、βE/βN、βCD43/βN、β-28/βCD41-42等10种基因型，其中检出率最高的3种基因型分别为βCD41-42/βN(144例，9.59%）、βCD17/βN(66例，4.40%）、βIVS-Ⅱ-654/βN(24例，1.60%),βCD41-42/βN基因型在β地贫中为最常见（表3）。

α地贫复合β地贫检测结果分析

在1 501例地贫受检者中，检出α地贫复合β地贫携带者共29例，检出率为1.93%，其中最常见的基因型是--SEA/αα复合βCD41-42/βN(5例，0.33%），其次是-α3.7/αα复合βCD41-42/βN、-α4.2/αα复合βCD41-42/βN、αCSα/αα复合βCD41-42/βN（三者均为3例，检出率为0.20%）（表4）。

3、讨论

地贫是全球发病率最高的遗传性溶血性疾病[4-5]，该病分布具有地域性。在我国，地贫多发于南方地区，如广西[6]、广东[7]、海南[8-11]等省份为地贫高发区。广西是我国地贫携带率最高的地区之一，每4个人中就有1个地贫携带者[12]。桂林市临桂区位于桂北地区，也属于地贫高发区。所以，在本区开展产前地贫基因筛查，可有效预防重型地贫患儿的出生。

本研究在1 501例疑似病例中共检出678例地贫基因携带者，检出率为45.17%，与王梁等[6]的研究相符。且在近3年中地贫检出率逐年升高，由2020年的34.61%上升至2022年的55.49%。本研究共检出39种地贫基因型，表明桂林市临桂区地中海贫血具有明显的遗传异质性。α地贫、β地贫以及α地贫复合β地贫的检出率分别是25.25%、17.99%、1.93%。本地区主要以缺失型α地贫为主，共检出6种基因型，其中以--SEA/αα最常见，其次依次为-α3.7/αα、-α4.2/αα，这与我国南方地区广东[7,13-14]、海南[15]、湖南[5]、广西[16]等地的部分报道一致，但与Yu等[17]在海南地区研究中报道的以-α4.2/αα缺失型为主不太一致，且构成比上存在一定的差异。本研究共检出5种非缺失型α地贫基因型（39例），主要以αCSα/αα突变型为主，这与叶丽花等[16]在来宾市及孔德佳等[18]在厦门地区的研究结果一致，与冼嘉嘉等[19]在广州地区报道的以ααWS/αα突变型为主不同。与何金龙等[15]在海口地区的研究类似，本研究也检出了缺失型复合非缺失型α地贫基因（11例），但不同的是，我们的检测结果以基因型--SEA/αCSα为主，而何金龙等的上述研究以-α3.7/ααWS基因型为主。此外，本研究共检出10种β地贫突变型，主要以βCD41-42/βN突变型为主，其次依次是βCD17/βN、βIVS-Ⅱ-654/βN、β-28/βN，这4种突变型共占92.22%，这与四川[20]、福建[21]等地区的研究结果相似，与重庆地区报道的以βCD17/βN为主不太一致[22]，与Zeng等[23]在广东河源地区报道的以βCD41-42/βN为主，其次为βIVS-II-654/βN也不太一致，表明不同地区或相同地区的不同研究基因型分布具有差异性。本研究还检出了15种α地贫复合β地贫基因型，其中以基因型--SEA/αα复合βCD41-42/βN为主，其次为-α3.7/αα复合βCD41-42/βN、-α4.2/αα复合βCD41-42/βN以及αCSα/αα复合βCD41-42/βN，这与李东明等[24]、He等[25]及Xian等[26]的研究结果以基因型--SEA/αα复合βCD41-42/βN为主相似。本研究中合并3种突变型的患者仅有1例，可见复合3种突变型的地贫发病率较低。

地中海贫血是全球普遍关注的关键出生缺陷，每一对同型地贫携带者夫妇有四分之一的概率生出重型地贫患儿，从而可能严重影响人口质量。目前，临床尚未研究出能够治愈地贫的有效方法[27]。临床上对于地贫患者的治疗主要还是对症治疗为主，即给患者输注红细胞；此外，亦可进行造血干细胞移植，但配型合适的干细胞相当缺乏并且存在一定的技术局限性，治疗费用也相对较高，在临床上较难开展[2]；而基因治疗还处在临床研究阶段。由于地贫的高发及其明显的遗传异质性，有关部门应当鼓励当地居民婚前进行地贫基因筛查，尽量避免两个地贫基因携带者结婚。如果婚前没有进行地贫基因筛查，应该在孕前、孕期进行遗传咨询及筛查，密切关注，一旦诊断出重型地贫胎儿应尽早终止妊娠，避免生出重型地贫患儿，因为重型地贫患儿需要终生输血，给家庭和社会带来沉重的负担[28]。本研究结果有助于当地医疗卫生部门深入了解临桂区地中海贫血基因携带率及基因突变或缺失类型，对地贫的防治宣传、遗传咨询、产前诊断、避免重型患儿的出生、提高人口质量有重要意义。

参考文献:

4胡新年,欧文岳,欧阳慧,等. 2659例地中海贫血基因检测结果分析.中国优生与遗传杂志, 2020, 28(10):1174-1176+1193.

5彭灿,贺骏,周世豪,等.长沙地区21618例地中海贫血基因检测分析.中国产前诊断杂志(电子版), 2022, 14(3):21-26.

6王梁,左杨瑾,林丽,等.广西地区人群地中海贫血基因分型.重庆医学, 2022, 51(3):491-494.

8李猛,项松鹤,丁一,等.中国海南省三亚地区地中海贫血基因类型分析.中国实验血液学杂志, 2018, 26(4):1146-1150.

9刘秀莲,王洁,杨春,等.海口地区地中海贫血基因分型及频率的研究.中国优生与遗传杂志, 2012, 20(9):22-23.

10莫亚虹,吴秀继.海南地区13440对育龄夫妇地中海贫血基因检测结果分析.中国热带医学, 2017, 17(12):1206-1209.

11涂志华,周知,吴维学,等.海南省陵水黎族自治县育龄夫妇地中海贫血基因检测结果分析.中国实验血液学杂志, 2019,27(4):1227-1231.

12侯姝芳,朱俊芳,陈燕,等. 8757例地中海贫血基因诊断结果分析与研究.中国产前诊断杂志(电子版), 2018, 10(1):26-29.

基金资助:中央引导地方科技发展资金项目(桂科AD20238021);桂林市科学研究与技术开发项目(20210218-2);

文章来源:杨雪丽,刘珍玉,张俊宁,等.2020-2022年1501例地中海贫血疑似病例基因检测结果分析[J].中国实验血液学杂志,2024,32(06):1848-1851.