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EBV感染患儿凝血功能及血清免疫水平的研究

2025-07-30 24 上传者：管理员

摘要：目的：探讨不同程度EBV感染后儿童的凝血功能和血清免疫水平对疾病预后评估的价值。方法：回顾性选取100例EBV-DNA阳性感染患儿为病例组，再根据EBV-DNA阳性患儿是否确诊传染性单核细胞增多症（IM）分为IM组（36例）和单纯EBV感染组（64例）,另取同期健康体检儿童51例为对照组。采集外周血，检测各组凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血酶原时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）以及淋巴细胞亚群、免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）等指标水平。统计组间差异，Pearson分析EBV-DNA载量与T淋巴细胞亚群之间的相关性。结果：与对照组比较，IM组CD4+T细胞、CD4+/CD8+、CD16+56+NK细胞、CD19+B细胞降低，CD3+T细胞、CD8+T细胞、IgA、IgG、IgM、PT、APTT、TT、FIB升高，差异具有统计学意义（P<0.05）;与单纯EBV感染组比较，IM组CD4+/CD8+、CD19+B细胞降低，CD3+T细胞、CD8+T细胞、IgA、IgG、PT、APTT、TT、FIB升高，差异具有统计学意义（P<0.05）。外周血CD3+T细胞水平与EBV-DNA载量呈正相关（r=0.363,P<0.05）,CD4+/CD8+与EBV-DNA载量呈负相关（r=-0.389,P<0.05）。结论：EBV感染导致的凝血功能障碍和免疫系统失衡与不同感染程度有关，有助于临床评估病情发展，可为患者预后提供更好的指导策略。

关键词：
EB病毒
传染性单核细胞增多症
免疫球蛋白
凝血功能
淋巴细胞亚群
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Eb病毒(Epstein-BarrVirus,Ebv)即人类疱疹病毒4型,为双链线性Dna病毒,人群普遍易感,据流行病学调查显示,全球90%的人有Ebv感染史[1]｡学龄前儿童和青少年因免疫系统发育尚未健全,约50%的Ebv感染儿童患传染性单核细胞增多症(InfectionMononucleosis,Im)[2]｡Im是一种以发热､咽峡炎､淋巴结肿大､肝脾肿大为主要临床表现的全身性疾病｡有研究发现[3],感染Ebv的儿童凝血功能水平和免疫应答状态与其临床症状､疾病的发展转归密切相关｡在疾病发展的病理过程中,淋巴细胞亚群和免疫球蛋白作为人体免疫防御体系中的重要组成部分,可反映机体的细胞免疫和体液免疫水平,并对机体的免疫平衡起重要调控作用[4]｡但在Ebv感染患儿凝血功能水平变化方面的研究较少｡故本研究对不同程度Ebv感染患儿的凝血功能和血清免疫水平等指标变化进行分析,以期为临床诊治提供参考｡

1、资料与方法

1.1一般资料选取2023年1月—2024年10月我院收治的100例Ebv-Dna阳性患儿作为病例组,再根据其是否确诊为Im分为单纯Ebv感染组64例､Im组36例｡另选取同期在我院儿童保健科体检的健康儿童51例作为对照组｡对照组男31例,女20例,平均年龄(6.75±4.11)岁;单纯Ebv感染组男30例,女34例,平均年龄(5.64±3.35)岁;Im组男23例,女13例,平均年龄(5.44±2.54)岁｡各组一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.5),具有可比性｡本研究经医院医学伦理学委员会审核批准｡纳入标准:(1)所有患儿均符合Eb病毒感染诊断标准,经核酸定量检测,EbvDna载量>4×102Copies/Ml,对照组儿童Ebv-Dna均为阴性｡(2)单纯Ebv感染组患儿Ebv-Dna阳性,但尚未确诊Im｡(3)Im组患儿符合《诸福棠实用儿科学》中的诊断标准,入院时Ebv-Dna阳性并伴有急性发热､咽峡炎､淋巴结肿大､肝脾肿大等临床表现;外周血形态学检查异型淋巴细胞比例增加(>10%)[5]｡(4)病原体检测仅检测出Ebv阳性,其他病毒均为阴性,细菌､肺炎支原体等检测均为阴性｡排除标准:(1)其他疾病导致的免疫和凝血功能紊乱,如肝脏疾病､免疫缺陷或自身免疫性疾病｡(2)近期使用免疫抑制剂｡(3)合并其他呼吸道感染性疾病,如肺炎､支气管炎等｡(4)实验室检测资料不完整｡

1.2方法

1.2.1Ebv-Dna定量检测｡实时荧光定量聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,Pcr)取2mlEp管,先加入1ml红细胞裂解液,再加入800μlEdta抗凝全血,轻柔颠倒混匀后,置于离心机以12000r/Min离心10min,去上清,向沉淀中再加入1ml红细胞裂解液,再去上清,重复3次后加入400μl核酸释放剂振荡混匀,75℃恒温处理10min后瞬间离心｡最后取10μl处理后的样本和40μlPcr-Mix加入Pcr反应管中,采用Abi7500实时荧光定量仪器(湖南圣湘基因股份有限公司)上机进行Pcr反应,读取结果｡

1.2.2凝血检测｡采集2ml新鲜静脉血,加入0.22ml枸橼酸钠溶液(109mmol/L),充分混匀(血液与抗凝剂体积比为9∶1),室温下以2000×g离心10min,取上层血浆使用沃芬Acltop500全自动凝血分析仪进行检测｡1.2.3淋巴细胞亚群检测｡按试剂使用说明书,将20μl荧光标记的试剂移取到流式细胞仪专用的BdTrucont管底部,加入50μl充分混匀的Edta抗凝全血,盖上管盖振荡混匀后室温避光孵育15min,加入450μl10%Facs溶血素,盖上管盖振荡混匀后室温避光孵育15min｡在FacsCalibur型流式细胞仪(美国Bd公司相关配套试剂)上分析检测｡

1.2.4免疫球蛋白检测｡空腹采集3ml静脉血,室温下以3000×g离心10Min,分离上层血清,使用Aristo全自动特定蛋白分析仪通过免疫散射比浊法检测血清中免疫球蛋白含量｡

1.3统计学方法采用Spss29.0软件进行数据处理和分析｡满足正态分布的计量资料以(x±s)表示,两两比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析;计数资料以例数或百分比表示;Pearson相关性分析不同指标与Ebv-Dna载量之间的相关性;P<0.05为差异具有统计学意义｡

2、结果

2.1三组凝血功能相关指标比较与对照组比较,Im组凝血酶原时间(Pt)､活化部分凝血酶原时间(Aptt)､凝血酶时间(Tt)和纤维蛋白原(Fib)均升高(P<0.05);单纯Ebv感染组仅表现为Fib升高(P<0.05),其余指标差异无统计学意义(P>0.05)｡与单纯Ebv感染组比较,Im组Pt､Aptt､Tt､Fib均明显升高(P<0.05),见表1｡

表1三组凝血功能相关指标比较(x±s)

2.2三组淋巴细胞亚群比较与对照组比较,单纯Ebv感染组Cd8+T细胞升高,Cd4+T细胞､Cd4+/Cd8+､Cd16+56+Nk细胞降低(P<0.05);Im组Cd3+T细胞､Cd8+T细胞升高(P<0.05),Cd4+T细胞､Cd4+/Cd8+､Cd16+56+Nk细胞､Cd19+B细胞降低(P<0.05)｡与单纯Ebv感染组比较,Im组Cd3+T细胞､Cd8+T细胞升高,Cd4+/Cd8+､Cd19+B细胞降低(P<0.05),见表2｡

表2三组淋巴细胞亚群比较(x±s)

2.3三组外周血免疫球蛋白比较与对照组比较,Im组Iga､Igg､Igm升高,单纯Ebv感染组Iga､Igg升高(P<0.05)｡与单纯Ebv感染组比较,Im组Iga､Igg升高(P<0.05),见表3｡

表3三组外周血免疫球蛋白比较(x±s,g/L)

2.4患儿的Ebv-Dna载量与Cd3+T细胞､Cd4+/Cd8+的相关性Ebv感染患儿淋巴细胞亚群中Cd3+T细胞与Ebv-Dna载量呈正相关(r=0.363,P<0.05),Cd4+/Cd8+与Ebv-Dna载量呈负相关(r=-0.389,P<0.05),见图1｡

图1患儿的Ebv-Dna载量与Cd3+T细胞､Cd4+/Cd8+的相关性

3、讨论

Ebv是一种嗜淋巴细胞病毒,被国际癌症研究中心归类为Ⅰ类致癌物质,以侵犯B淋巴细胞为主,可导致肿瘤发生[6]｡既往研究显示,Ebv感染后可导致肝功能的损伤,主要原因是Ebv感染后产生的炎症细胞可以产生血清白细胞介素1β(Il-1β),Il-1β可诱导肝细胞的凋亡和坏死｡而肝脏是合成多种凝血因子的重要器官,有助于平衡凝血—纤溶系统｡目前为止临床研究共鉴定出14种人体凝血因子,其中肝脏参与12种凝血因子的合成,只有合成凝血因子Ⅲ､Ⅳ的过程无须肝脏参与[7-8]｡故凝血因子可灵敏地反映出肝脏损伤程度,当肝功能受到损伤,可打破机体的凝血—纤溶系统平衡,出现凝血指标水平异常｡凝血筛查试验为常用的临床凝血功能筛查指标,其中Pt值反映参与外源性凝血途径的凝血因子Ⅰ､Ⅱ､Ⅴ､Ⅶ､Ⅹ的活性,Aptt值反映参与内源性凝血途径凝血因子Ⅷ､Ⅸ､Ⅺ､Ⅻ的活性,Tt值反映血浆纤维蛋白原的活性｡本研究结果显示,与对照组比较,Im组Pt､Aptt､Tt显著延长,单纯Ebv感染组Pt､Aptt､Tt未见明显延长｡而与单纯Ebv感染组比较,Im组Pt､Aptt､Tt均显著延长,这与解承娟等[9]研究报道结果一致｡提示随着疾病的进一步发展,Ebv感染后确诊为Im的患儿易出现肝功能损伤,进而导致凝血功能异常,因此,凝血指标有利于临床区分单纯Ebv感染患儿向Im进展的疾病病程｡另外,与对照组比较,Im组与单纯Ebv感染组Fib水平升高,且Im组升高更明显(P<0.05),这与以往文献报道[10]有所不同,原因可能是本研究较早期地对Ebv感染患儿的凝血水平进行监测,Fib作为急性时相反应蛋白之一,在感染的早期出现应激性增高｡

有研究报道证实,患儿感染Ebv后,淋巴细胞亚群比例失衡,细胞免疫功能和体液免疫功能紊乱,这可能是引起患儿抵抗力下降,进一步出现Im临床症状的原因[11]｡本研究中,与单纯Ebv感染组比较,Im组患儿的Cd3+T细胞､Cd8+T细胞明显升高,Cd4+/Cd8+､Cd19+B细胞降低,提示淋巴细胞亚群的变化与Ebv感染患儿的疾病发展有关｡淋巴细胞亚群是一种参与生物免疫调节并具有细胞免疫功能的免疫活性细胞,主要包括表达Cd4+的辅助性T细胞(HelperTCell,Th)､Cd8+的细胞毒性T细胞(CytotoxicTCell,Tc)､Cd16+56+的自然杀伤细胞(NaturalKiller,Nk)和表达Cd19+的B淋巴细胞｡Th参与促进细胞介导的免疫应答,活化后可合成释放各种细胞因子,并能辅助B细胞分化成熟生成抗体,作为机体的免疫保护剂｡Tc通过特异性直接杀死靶细胞以及靶细胞内的病原体,作为机体的免疫抑制剂[12-13]｡Nk细胞是参与调节固有免疫应答,无须抗原致敏即可直接杀灭病原体,而Cd19+是B淋巴细胞的表面抗原,通过产生Igg､Iga､Igm等抗体参与体液免疫反应过程｡与对照组相比,单纯Ebv感染组和Im组的Cd3+T细胞升高,Im组相较于单纯Ebv感染组升高更明显,说明Ebv感染后,因病毒主要侵袭机体的B淋巴细胞,被感染的B淋巴细胞向T淋巴细胞呈递抗原,进一步激活T淋巴细胞高度增殖和活化,此时患儿可出现急性发热､淋巴结肿大､肝脾肿大等T淋巴细胞免疫反应体征[14]｡与对照组比较,单纯Ebv感染组和Im组的Cd8+T细胞升高,Cd4+T细胞､Cd4+/Cd8+､Cd16+Cd56+Nk细胞降低,其中Im组Cd8+T细胞和Cd19+B细胞变化较单纯Ebv感染组明显,说明随着Ebv感染病程的加重,Cd8+T细胞大量活化增殖后,一方面,特异性直接杀伤被Ebv感染的B淋巴细胞,并进一步清除病毒;另一方面,大量增殖的Tc侵犯组织和器官,导致患儿出现免疫病理损伤｡Hoshino等[15]连续性检测急性感染Ebv患儿的外周血T淋巴细胞,数据结果分析发现,Ebv感染程度与表达Cd8+的Tc数值呈正相关,这与本研究结果一致｡因此,临床可以根据Cd8+T细胞的水平变化,评估Ebv感染患儿的疾病进程｡Cd4+/Cd8+是常用的反映细胞免疫功能水平的指标,其水平下降提示细胞免疫功能出现抑制,与Ebv感染后机体的免疫系统损伤程度相关[16]｡

在体液免疫中,T淋巴细胞辅助介导B淋巴细胞的活化和分泌,生成抗感染作用的免疫球蛋白Iga､Igg和Igm,对机体抵抗病原体入侵具有重要作用[17]｡本研究中,感染Ebv的患儿Iga､Igg和Igm较对照组升高,且Im组的Iga､Igg明显高于单纯Ebv感染组,说明感染Ebv后,机体处于特异性致敏状态,当机体再次接触到Ebv抗原时,细胞膜上的免疫球蛋白会与之特异性结合,阻止病毒的进一步入侵[17]｡本研究结果发现,Ebv感染组患儿的Ebv-Dna载量与Cd3+T细胞､Cd4+/Cd8+之间具有明显的相关性,提示外周血T淋巴细胞水平与感染Ebv患儿的临床特征有关,临床可根据细胞免疫水平评估患儿的疾病进展｡

综上所述,Ebv感染患儿会出现一定程度的免疫系统和凝血功能紊乱,并且随着疾病的发展转归进一步加深,故可通过检测患儿的免疫和凝血功能的各项指标来判断Ebv病毒感染的疗效和预后｡

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