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观察寻常型痤疮应用自体血液穴位注射治疗的临床效果

2020-06-20 379 上传者：管理员

摘要：目的观察自体血液穴位注射疗法治疗寻常型痤疮的临床效果，并从免疫调节方面探讨其治疗寻常型痤疮的部分作用机制。方法选择30例符合纳入标准的寻常型痤疮患者为治疗组，20例健康志愿者为对照组。治疗组采用自体血注射曲池、血海和足三里穴位，2次/周，4周为1个疗程，治疗1个疗程后评估临床效果，对照组不给予任何干预措施。采用流式细胞仪检测30例寻常型痤疮患者经自体血液穴位注射疗法治疗前后外周血CD14+单核细胞TLR2的表达，并与对照组20例健康志愿者进行比较。结果干预后，治疗组皮肤出油、皮损程度、数量、颜色、肿痛及皮损总积分均较干预前降低（P<0.05）。治疗组干预前外周血CD14+单核细胞TLR2的表达显著高于对照组（P<0.05）；干预后，治疗组外周血CD14+单核细胞TLR2的表达显著低于干预前（P<0.05）；治疗组干预后外周血CD14+单核细胞TLR2的表达与对照组无显著差异（P>0.05）。自血疗法治疗寻常型痤疮的总有效率达83.3%。结论自血疗法能够有效改善寻常型痤疮患者的皮损状态，其作用机制可能与降低寻常型痤疮患者外周血CD14+单核细胞TLR2的表达有关。

关键词：
TLR2
免疫调节
寻常型痤疮
慢性炎症性疾病
皮肤病
自血疗法
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寻常型痤疮是一种累及毛囊皮脂腺的慢性炎症性疾病，多发生于头面部、颈部、前胸、后背等皮脂腺丰富的部位，可表现为粉刺、丘疹、脓疱、结节、囊肿及瘢痕等皮损。病程长久易反复，严重影响患者的身心健康和生活质量，全球约10%的人口患有寻常性痤疮，且呈持续性增长趋势[1,2]。目前寻常型痤疮的治疗主要有局部外涂药物、口服药物、光疗和痤疮疫苗等方法[3,4,5]，但本病治疗疗程长，药物治疗容易产生耐药性及副作用，因此寻找一种安全有效的绿色疗法尤为重要。陕西省中医院针灸科采用自血疗法治疗寻常型痤疮取得了良好的临床效果，且无任何副作用。自血疗法是一种非特异性刺激的自然疗法，指抽取患者少量肘静脉血（不加抗凝剂及任何药物），立即注入选定穴位的中医特色疗法。虽然自血疗法治疗寻常型痤疮临床效果确切，但其作用机制尚不明确。现有研究表明，免疫反应在寻常型痤疮的发生、发展和转归中发挥着重要作用[6]。因此本研究拟通过观察寻常型痤疮患者自血疗法干预前、后及健康志愿者外周血CD14+单核细胞TLR2的表达变化，从免疫调节的角度探讨自血疗法治疗寻常型痤疮的作用机制，现报道如下。

1、资料与方法

1.1一般资料

随机选择2018年8月至2018年12月就诊于陕西省中医医院针灸科门诊的30例寻常型痤疮患者为治疗组，另选择同期在本院招募的20例健康志愿者为对照组。治疗组男5例，女25例；年龄20～45岁，平均年龄（26.17±6.25）岁；病程1个月至18年，平均（48.47±47.77）个月；疾病严重程度：中度（Ⅱ级）10例，中重度（Ⅲ级）18例，重度（Ⅳ级）2例。对照组男4例，女16例；年龄20～32岁，平均（25.85±4.22）岁。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。本研究经陕西省中医院伦理委员会审核通过[伦理批件号：（2017）伦理第（9）号]，且研究对象均签署知情同意书。

诊断标准：符合中医药科技出版社《中药新药临床研究指导原则》与赵辨著《中国临床皮肤病学》中关于痤疮的诊断及分级标准[7,8]，即a.多发于青春期男女，b.发病部位为面部、颈部、胸背部等油脂分泌明显的部位，c.皮损形式多样，表现为针头大小的丘疹、粉刺、结节、脓疱、囊肿等，d.起初时发痒，感染时伴随疼痛，有时有皮脂溢出。

痤疮的严重程度分级以Pillsbury四级改良分级法为依据。Ⅰ级（轻度）：皮损主要为粉刺，可有少量丘疹和脓疱，总病灶数少于30个；Ⅱ级（中度）：皮损表现主要为粉刺，并有中等数量的丘疹、脓疱，少数丘疹伴有炎症，病灶数>30～50个，发病部位局限在面部；Ⅲ级（中重度）：皮损表现在深在性丘疹和脓疱，病灶数>50～100个，发病部位在面部、颈部和胸背部；Ⅳ级（重度）：结节或囊肿性或聚合性痤疮，多数有疼痛并形成囊肿，病灶数>100个，结节或囊肿>3个。

纳入标准：(1)临床确诊为寻常型痤疮，Pillsbury分级中属Ⅱ～Ⅳ级的患者；(2)皮损主要集中在颜面部的患者；(3)年龄18～45岁的患者。

排除标准：(1)Ⅰ级寻常型痤疮患者；(2)孕妇、拟妊娠及哺乳期的妇女；(3)存在凝血功能障碍患者；(4)药物性痤疮和职业型痤疮患者；(5)有肝炎、艾滋病等传染病史；(6)心、肝、肾功能异者。

1.2方法

治疗组采用自血穴位注射疗法。选穴：双侧曲池、血海、足三里。定位：参照中华人民共和国国家标准GB/T 12346-2006《腧穴名称与定位》。操作方法：患者在Ⅲ级医疗环境中（清洁的治疗室）接受治疗，取仰卧位或坐位，暴露施术部位，对肘正中静脉所在部位消毒后，使用一次性10 mL无菌注射器抽取约6 mL血液，双侧曲池、血海、足三里严格消毒，注射针头刺入穴位约0.5～0.8寸，得气后，每个穴位注射1 mL血液，出针后轻微按压片刻。2次/周，一共治疗4周。对照组不予任何干预措施。

1.3观察指标及疗效评价标准

皮损积分，包括皮肤出油、皮损程度、数量、颜色、肿痛5项积分，计分标准如下。皮肤出油情况：干性（0分），中性（2分），混合性（4分），油性（6分）；皮损程度：正常（0分）为治疗前无或治疗后消失，轻度（2分）为粉刺为主，少量丘疹和脓疱，中度（4分）为粉刺，中等数量丘疹和脓疱，偶见结节，重度（6分）为粉刺、丘疹、脓疱并见，可有结节和囊肿；皮损数量：正常（0分）为治疗前无或治疗后消失，轻度（2分）为总病灶数少于30个，中度（4分）为总病灶数31～50个，重度（6分）为总病灶数51～100个，结节/囊肿小于3个；皮损颜色：正常（0分）为治疗前无或治疗后消失，轻度（2分）为粉刺尖端色白或黑，中度（4分）为粉刺尖端色黑，丘疹色微红，重度（6分）为丘疹色红掀热，脓疱黄绿色；皮损肿痛：正常（0分）为治疗前无或治疗后消失，轻度（2分）为轻微肿胀疼痛，中度（4分）为局部肿胀疼痛较明显，无或略有破损，重度（6分）为肿硬疼痛明显，明显破溃，流血性脓液。

外周血CD14+单核细胞TLR2的表达。抽取治疗组患者干预前、干预4周后及对照组的静脉血各3 mL置于EDTA管中，用于流式细胞仪检测外周血CD14+单核细胞TLR2的表达。主要仪器和试剂：美国BECKMAN Coulter公司生产的BECKMAN Coulter Inc Epics XL流式细胞仪、Laboratories Gel Doc XR+全自动成像系统。FITC标记小鼠抗人CD14单抗、FITC标记IgG1同型对照、红细胞裂解液均购自于美国BECKMAN Coulter公司，PE标记小鼠抗人TLR2单抗、PE标记IgG2a同型对照及受体封闭剂均购自于Biolegend公司。具体检测步骤：(1)分别在A、B、C 3支样品测定管中加入抗凝血100μL及受体封闭剂5μL，涡旋器振荡混匀后避光孵育10 min;(2)然后在A管中加入FITC-IgG1 20μL、PE-IgG2a 5μL,B管中加入FITC-CD14 20μL、PE-IgG2a 5μL,C管中加入FITC-CD14 20μL、PE-TLR2 5μL，振荡混匀，室温避光孵育20 min;(3)分别加入红细胞裂解液500μL，振荡混匀，室温避光10 min;(4)1 500 r/min离心5 min，弃上清液，加入PBS液2 mL，振荡混匀，再1 500 r/min离心5 min，弃上清液，加入PBS液500μL，振荡混匀；(5)应用BECKMAN Coulter Inc Epics XL流式细胞仪检测CD14+单核细胞TLR2阳性细胞率。干预前及干预4周后的血样均使用以上方法进行检测，对比样本干预前及干预4周后TLR2的表达率。（备注：A管中加入IgG1-FITC 20μL/IgG2a-PE 5μL,2种抗体的阴性对照均不能表达人血中的CD14单核细胞及TLR2，而只有CD14单抗、TLR2单抗能表达，保证抗体的质量及结果的真实性；B管中加入CD14-FITC 20μL/IgG2a-PE 5μL，观察CD14单抗只特异性标记CD14单核细胞，而TLR2的同型对照无法表达CD14单核细胞上的TLR2，消除试验干扰；C管中加入CD14-FITC20μL/TLR2-PE 5μL,TLR2只表达CD14单核细胞上的值，不表达其他细胞中的TLR2。）

综合疗效评定：痊愈为皮损全部消退，仅遗留有色素沉着，疗效指数≥95%；显效为大部分皮损消退，症状明显减轻，95%>疗效指数≥70%；有效为皮损部分消退，症状改善，70%>疗效指数≥30%；无效为皮损无消退，甚至加重，疗效指数<30%[7]。疗效指数=[（干预前皮损积分-干预后皮损积分）/干预前皮损积分]×100%。总有效率=[（痊愈例数+显效例数+有效例数）/总例数]×100%。

1.4统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件分析数据，计数资料用n/%表示，用χ2检验，计量资料用±s表示，用t检验，以P<0.05为差异具有统计学意义。

2、结果

2.1治疗组患者干预前、后皮损积分比较

干预后，治疗组皮肤出油、皮损程度、数量、颜色、肿痛及皮损总积分均较干预前降低（P<0.05，表1）。

表1治疗组患者干预前、后皮损积分比较（n=30,±s，分）

2.2两组研究对象干预前、后外周血CD14+单核细胞TLR2的表达比较

治疗组干预前外周血CD14+单核细胞TLR2的表达显著高于对照组（t=7.927,P=0.000）；干预后，治疗组外周血CD14+单核细胞TLR2的表达显著低于干预前（t=8.491,P=0.000）；治疗组干预后外周血CD14+单核细胞TLR2的表达与对照组无显著差异（t=1.539,P=0.130）。见表2。图A、B、C分别为具有代表性的对照组、观察组干预前、后患者外周血中CD14+单核细胞TLR2的表达量。

表2两组研究对象干预前、后外周血CD14+单核细胞TLR2的表达比较

2.3治疗组患者的综合疗效分析

自血疗法治疗寻常型痤疮的总有效率达83.3%，其中痊愈2例，显效2例，有效21例，无效5例。

A对照组代表性患者TLR2的表达量

B治疗组代表性患者干预前TLR2的表达量

C治疗组代表性患者干预后TLR2的表达量

3、讨论

寻常型痤疮是最常见的面部皮肤病之一，其发病率在70%～87%[9]，且发病率呈逐年上升趋势。中国痤疮指南推荐口服及外用异维A酸是治疗寻常型痤疮的标准方法[10]，也是目前治疗寻常型痤疮最有效的方法，但其不良反应较大，特别是致畸胎作用。而本研究采用的自血疗法安全有效，且无任何副作用。

自血穴位注射疗法结合了放血、针刺、穴位注射等传统治疗的优点。抽取少许血液有利于促进机体的新陈代谢，与中医传统的祛瘀生新理论相一致；针刺有激活局部血液循环、调和气血的作用；穴位注射可通过自体血液对穴位的长时间刺激作用，疏通经络，调节人体阴阳平衡，达到消除痤疮的目的。本研究选用的足三里为胃经合穴，《内经》言“合则治腑”，故选取足三里可健脾和胃，除湿化浊，调理中州，清泄肺胃之热，从根本上改善痤疮；血海具有“治一切血疾及诸疮”的特点，自血注入血海可发挥活血健脾，祛风止痒，养血行血的目的，是治疗痤疮的常用穴；曲池是治疗痤疮的临床首选穴之一，自血刺激曲池以起到疏风散热，通腑化浊，行气活血的作用。

现代医学认为，免疫反应在痤疮的发病机制中起着关键作用。虽然痤疮发病的免疫应答机制尚未完全明确，但近年来研究发现，Toll样受体（Tol-like receptor,TLRS）是现阶段发现的一种非常重要的模式识别受体，其可以识别微生物的结构组分及代谢产物，从而启动人体的固有免疫应答反应，目前已发现11种类型的TLRS，不同类型的TLR可以识别不同病原体的结构，而与痤疮关系密切的是TLR2[11]。一系列研究证实痤疮丙酸杆菌通过TLR依赖途经激活单核细胞，上调表达TLR2，通过一系列级联反应诱导IL-8、IL-12、TNF-α等多种促炎因子释放及炎症细胞聚集，从而引起免疫反应[12,13]，导致痤疮发生。本研究结果显示，干预后，治疗组皮肤出油、皮损程度、数量、颜色、肿痛及皮损总积分低于干预前（P<0.05），说明自血疗法能够有效改善痤疮患者的皮损状态，且安全有效。治疗组干预前外周血CD14+单核细胞TLR2的表达高于对照组（P<0.05），其机制可能是座疮丙酸杆菌通过TLR2依赖途径激活单核细胞，使单核细胞表面TLR2的表达上调，刺激炎症细胞因子释放，从而招募免疫活性细胞聚集于痤疮丙酸杆菌入侵部位，最终导致受累毛囊及皮脂腺炎症的发生[13]。干预后，治疗组外周血CD14+单核细胞TLR2的表达显著低于治疗前（P<0.05）；治疗组干预后外周血CD14+单核细胞TLR2的表达与对照组无显著差异（P>0.05），此结果提示自血疗法可能是通过下调TLR2的表达，减少相关炎症因子的释放，从而抑制炎症反应，减轻或阻止痤疮的发生。

综上所述，自血疗法可能在痤疮患者的治疗过程中发挥免疫调节作用，参与单核细胞表面TLR-2表达的调节，改善机体的炎性反应，为控制痤疮炎症反应提供一种安全有效的治疗手段，为自血穴位注射疗法治疗痤疮的临床推广应用提供了强有力的科学理论依据，在理论上丰富和深化了自血疗法治疗痤疮的机制，利于该疗法更好地在临床推广，达到服务社会的目的。

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